靳松　陳澤斌　李育川　夏體淵　趙鳳　任禛

摘 要 以石蟬草根、莖、葉為材料，采用Illumina MiSeq高通量測(cè)序技術(shù)研究石蟬草內(nèi)生細(xì)菌多樣性。結(jié)果表明，根、莖、葉樣品共測(cè)得167個(gè)OTUs，歸屬于11個(gè)門，分別為變形菌門、Ignavibacteriae、芽單胞菌門、梭桿菌門、厚壁菌門、異常球菌-棲熱菌門、綠彎菌門、擬桿菌門、放線菌門和酸桿菌門，各樣品的菌群組成和多樣性雖有差異，但以變形菌門為優(yōu)勢(shì)菌群，約占62.48%～93.24%。在各樣品菌群豐度最高的10個(gè)OTUs中，葉部?jī)?yōu)勢(shì)群落芽孢桿菌屬、根部特有群落粘球菌目與石蟬草中具有抗炎、抗腫瘤活性的物質(zhì)存在潛在相關(guān)性。

關(guān)鍵詞 石蟬草；內(nèi)生細(xì)菌；高通量測(cè)序；多樣性

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Abstract In this study， the species and diversity of endophytic bacteria in the root， stem and leaf of Peperomia dindygulensis Miq. were comprehensively investigated by highthroughput sequencing technology based on Illumina Miseq platform. The results showed that the number of OTUs were 167 in total which belonged to 11 phyla respectively as Proteobacteria， Ignavibacteriae， Gemmatimonadetes， Fusobacteria， Firmicutes， Deinococcus-Thermus， Chloroflexi， Bacteroidetes， Actinobacteria and Acidobacteria. There were differences in the community composition and diversity of endophytic bacteria from different samples， but the dominant groups of 3 samples were Proteobacteria， accounting for 62.48%-93.24%. In this research， it is showed that Bacillus and Myxococcus on genus level were specifically located in the leaf and root， respectively. These may have some correlation with preferable anti-inflammation and anti-tumor effects.

Key words Peperomia dindygulensis Miq.； endophytic bacteria； high-throughput sequencing； diversity

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.06.017

石蟬草（Peperomia dindygulensis Miq.）系胡椒科草胡椒屬植物，多分布于中國南方各省區(qū)?！吨腥A本草》、《云南中草藥選》等對(duì)其均有記載，其味辛、性涼，具有清熱解毒、化瘀散結(jié)、利水消腫的功效，對(duì)肺癌、肝癌、胃癌等有治療作用[1]。

植物內(nèi)生菌是指定殖于健康植物組織內(nèi)部，而又不引發(fā)宿主植物表現(xiàn)出明顯感染癥狀的一類微生物[2]。在與宿主植物協(xié)同共生的過程中，植物內(nèi)生菌可產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的代謝產(chǎn)物，包括萜類、芳香類等化合物，這些物質(zhì)具有多種生物學(xué)活性，如抗菌、降糖等[3]。已有研究表明中藥材中部分活性成分的形成與其內(nèi)生菌有關(guān)，Strobel等[4]分離于紅豆杉韌皮部的內(nèi)生真菌紫杉霉（Taxomyces anreanae）可以產(chǎn)生紫杉醇或其他紫杉烷類化合物，該類物質(zhì)對(duì)多種惡性腫瘤具有突出療效；崔晉龍等[5]利用3株活性真菌開展了野外誘導(dǎo)白木香產(chǎn)生沉香的試驗(yàn)，試驗(yàn)證明此方法可應(yīng)用于沉香的實(shí)際生產(chǎn)；陶金華等[6]研究茅蒼術(shù)內(nèi)生真菌時(shí)發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生真菌誘導(dǎo)子能有效提高茅蒼術(shù)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系中蒼術(shù)素的產(chǎn)量。

目前，國內(nèi)外對(duì)石蟬草的研究多集中于化學(xué)成分的分離鑒定及其生物活性[1，7]，而忽視了植物內(nèi)生菌在中藥材形成中所發(fā)揮的作用。陳立[1]研究發(fā)現(xiàn)石蟬草抗癌活性成分主要集中在氯仿和乙酸乙酯部位，單體化合物以斷聯(lián)木脂素活性較好。本試驗(yàn)以石蟬草根、莖、葉為研究對(duì)象，采用16S rRNA擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)石蟬草的內(nèi)生菌菌群多樣性結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，旨在探究石蟬草內(nèi)生細(xì)菌種類多樣性，為更好地保護(hù)和開發(fā)利用石蟬草資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2015年10月上旬于云南省文山州馬關(guān)縣采集生長(zhǎng)健壯的石蟬草全株，不同部位樣品從植株分離后立即裝入無菌采樣袋中，低溫保鮮，于48 h內(nèi)進(jìn)行內(nèi)生細(xì)菌的分離，取石蟬草根、莖、葉為分析樣品，樣品名依次為ROOT、STEM和LEAF。

1.2 方法

1.2.1 表面消毒 取石蟬草根、莖、葉樣品，用自來水洗凈，75%酒精震蕩浸泡1 min，轉(zhuǎn)入2%次氯酸鈉震蕩5 min，無菌水漂洗5次。取最后1次漂洗水涂布于NA平板作為對(duì)照，以此檢驗(yàn)表面消毒是否徹底。

1.2.2 DNA提取、PCR擴(kuò)增和測(cè)序 石蟬草根、莖、葉樣品總DNA提取參照陳澤斌等[8]的方法。因植物質(zhì)體對(duì)細(xì)菌16S rRNA基因的擴(kuò)增具有極大的污染，本研究采用多重PCR方法對(duì)植物來源污染進(jìn)行抑制，兩輪PCR體系不變，僅變換引物并更改相應(yīng)退火溫度。在PCR擴(kuò)增過程中使用2對(duì)引物分別進(jìn)行兩輪PCR，第一輪PCR為抑制植物質(zhì)體污染，所用引物為P63F（5'-GTCGAACGGGAAG TGGT-3'）和P1490R（5'-CTTCACTCCAGTCGCAA GC-3'），退火溫度為68 ℃；隨后取第一輪PCR線性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)入第二輪16S rDNA基因V4區(qū)的擴(kuò)增，其擴(kuò)增引物為515F（5'-GTTTCGGTGCCAGC MGCCGCGGTAA-3'）和806R（5'-AGTTCCGGACT ACHVGGGTWTCTAAT-3'），退火溫度為54 ℃。16S擴(kuò)增子PCR體系為10×PCR Buffer for KOD-PlusNeo，5 μL；2 mmol/L dNTPs 5 μL；25 mmol/L MgSO4 3 μL；引物10 μmol/L，各1.5 μL；KOD-Plus-Neo DNA聚合酶，1 μL；ddH2O，32 μL；模板DNA，1 μL。PCR擴(kuò)增體系為預(yù)變性94 ℃，2 min，1個(gè)循環(huán)；變性98 ℃，10 s，退火，30 s，延伸68 ℃，30 s，26個(gè)循環(huán)；延伸72 ℃，5 min，1個(gè)循環(huán)；25 ℃恒溫。16S rRNA基因V4區(qū)擴(kuò)增子PCR產(chǎn)物通過1.5%瓊脂糖凝膠凝膠電泳分離后切膠純化回收，回收產(chǎn)物送成都羅寧生物科技有限公司進(jìn)行16S rDNA基因擴(kuò)增子高通量測(cè)序。高通量測(cè)序文庫使用Illumina公司TruSeq DNA PCR-Free Sample Prep Kit試劑盒構(gòu)建350 bp小片段文庫，隨后使用Qubit 2.0進(jìn)行濃度定量后使用Illumina公司MiSeq Reagent Kit v3試劑盒在Illumina Miseq測(cè)序儀上完成高通量測(cè)序。

1.3 數(shù)據(jù)處理

1.3.1 測(cè)序數(shù)據(jù)處理 根據(jù)竇妍等[9]的方法，使用FLASH[10]將Miseq測(cè)序得到的PE reads進(jìn)行拼接，同時(shí)對(duì)序列質(zhì)量進(jìn)行質(zhì)控，在去除低質(zhì)量堿基及接頭污染序列等操作過程后完成數(shù)據(jù)過濾，以產(chǎn)生可供后續(xù)分析的高質(zhì)量目標(biāo)序列。

1.3.2 多樣性和群落結(jié)構(gòu)分析 在97%的相似性水平上使用UPARSE算法[11]進(jìn)行OTU操作分類單元（Operational Taxonomic Units，OTUs）聚類。挑選出OTU的代表性序列，使用Greengene數(shù)據(jù)庫[12]進(jìn)行物種分類信息的劃分，去除注釋為葉綠體、線粒體以及非細(xì)菌界或古菌界的OTU。利用 QIIME[13]軟件對(duì)樣品進(jìn)行Alpha多樣性分析，包括Chao1指數(shù)和Shannon指數(shù)。運(yùn)用Mothur和R程序?qū)λ玫腛TUs數(shù)目進(jìn)行維恩（Venn）分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 序列處理分析

Miseq測(cè)序得到的雙端序列數(shù)據(jù)，根據(jù)PE reads之間的重疊關(guān)系，將成對(duì)的reads采用PEAR序列拼接算法合并為1條序列后，根、莖、葉共測(cè)得原始序列104 695/124 427/33 685條，對(duì)雙末端讀長(zhǎng)序列的質(zhì)量進(jìn)行質(zhì)控過濾后，得到有效序列89 503/105 597/32 577條，有效序列的長(zhǎng)度分布在270～310 bp范圍內(nèi)，平均長(zhǎng)度約300 bp（表1）。

2.2 樣品豐富度分析

由圖1可以看出，隨序列數(shù)增加，3個(gè)樣品的稀釋曲線變化趨勢(shì)相似并逐漸趨于平緩，但均未達(dá)到飽和；當(dāng)序列數(shù)在0～500范圍內(nèi)時(shí)，Chao1指數(shù)曲線斜率最大，序列數(shù)大于500后斜率逐漸變??；3個(gè)樣品的Shannon指數(shù)值在3左右趨于穩(wěn)定，并表現(xiàn)為葉>根>莖。3條曲線走勢(shì)表明，測(cè)序數(shù)據(jù)量合理，能反映出樣品中細(xì)菌的多樣性。

2.3 Alpha多樣性分析

在97%相似性水平下，利用Usearch 軟件將227 677條有效序列分為168個(gè)OTUs，其中根113個(gè)，莖116個(gè)，葉105個(gè)，表明根、莖、葉樣品的OUT數(shù)目差異不大（表2）。Chao1指數(shù)和Shannon指數(shù)可分別反映樣品中菌群豐富度和多樣性情況，從表2看，不同部位菌群種類豐富度表現(xiàn)為根>莖>葉，菌群多樣性表現(xiàn)為莖>根>葉，莖相較于根和葉菌群多樣性更為豐富。

2.4 菌群結(jié)構(gòu)分析

采用Greengene軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)比對(duì)，3個(gè)樣品的167個(gè)OTUs歸屬于11個(gè)門（圖2），26個(gè)綱，48個(gè)目，82個(gè)科和104個(gè)屬，主要分布在變形菌門（Proteobacteria）、Ignavibacteriae、芽單胞菌門（Gemmatimonadetes）、梭桿菌門（Fusobacteria）、厚壁菌門（Firmicutes）、異常球菌-棲熱菌門（Deinococcus-Thermus）、綠彎菌門（Chloroflexi）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、放線菌門（Actinobacteria）和酸桿菌門（Acidobacteria）。莖樣品中的細(xì)菌分布于11個(gè)門，根和葉樣品中的細(xì)菌分布于10個(gè)門，其中梭桿菌門細(xì)菌在根樣品中未檢測(cè)到，Ignavibacteriae細(xì)菌在葉樣品中未檢測(cè)到。變形菌門細(xì)菌為根、莖和葉樣品的優(yōu)勢(shì)菌群，分別占總菌群的93.24%、62.48%和67.54%；厚壁菌門細(xì)菌為根和葉樣品的次優(yōu)勢(shì)菌群，分別占總菌群的3.15%和18.70%；異常球菌-棲熱菌門細(xì)菌為莖樣品的次優(yōu)勢(shì)菌群，占總菌群的25.53%。由此可見，不同部位內(nèi)生細(xì)菌菌群種類和所占比例雖有差異，但變形菌門均為不同部位共有的優(yōu)勢(shì)菌群，所占比例在62.48%～93.24%之間。

為進(jìn)一步了解不同部位內(nèi)生細(xì)菌的分布和組成情況，選取各樣品中菌群豐度最高的10個(gè)OTUs（表3）。3個(gè)樣品中菌群豐度最高的10個(gè)OTUs的序列比對(duì)結(jié)果表明（表3），其主要與變性菌門、厚壁菌門、異常球菌-棲熱菌門、綠彎菌門和芽單胞菌門相似。其中，根為伯克氏菌目（Burkholderiales，22.12%）、Dokdonella（21.88%）、嗜糖假單胞菌屬（Pelomonas，9.60%）、粘球菌目（Myxococcales，8.22%）、弧菌屬（Vibrio，4.03%）、B-變形菌綱 （Betaproteobacteria，3.25%）、叢毛單胞菌科（Comamonadaceae，3.04%）、海單胞菌屬 （Marinomonas，2.68%）、硫桿菌屬（Thiobacillus，2.27%）、芽孢桿菌屬（Bacillus，2.01%）；莖為硫桿菌屬（Thiobacillus，30.87%）、Truepera（25.46%）、弧菌屬（Vibrio，6.15%）、Sulfurimonas（4.44%）、海單胞菌屬（Marinomonas，3.87%）、固氮弧菌屬（Azoarcus，3.08%）、芽孢桿菌屬（Bacillus，2.98%）、綠彎菌門（Chloroflexi，2.63%）、鏈球菌屬（Streptococcus，1.73%）、弓形桿菌屬（Arcobacter，1.35%）；葉為弧菌屬（Vibrio，24.64%）、海單胞菌屬（Marinomonas，13.15%）、芽孢桿菌屬（Bacillus，12.14%）、動(dòng)球菌科（Planococcaceae，5.27%）、硫桿菌屬（Thiobacillus，4.62%）、假交替單胞菌屬（Pseudoalteromonas，3.91%）、Roseiflexus（3.61%）、Truepera（2.66%）、芽單胞菌屬（Gemmatimonas，2.41%）、弓形桿菌屬（Arcobacter，2.06%）。弧菌屬（Vibrio）、海單胞菌屬（Marinomonas）、硫桿菌屬（Thiobacillus）和芽孢桿菌屬（Bacillus）在所有樣品中均有分布；Truepera和弓形桿菌屬（Arcobacter）僅在莖和葉中分布；其他僅在1種樣品中分布。伯克氏菌目（Burkholderiales）在樣品根中含量最高為22.12%；Truepera在樣品莖中含量最高為25.46%；弧菌屬（Vibrio）在樣品葉中含量最高為24.64%。

2.5 樣品間OTUs Venn圖分析

在OTU分析中，維恩圖用于表示多個(gè)組樣品的OTU共有和獨(dú)有的情況。從圖3可見，3個(gè)樣品中有60個(gè)相同的OTUs；各樣品兩兩間共有的OTUs個(gè)數(shù)分別為11、14和21個(gè)，其中莖和葉的共有OTUs個(gè)數(shù)最多；各樣品獨(dú)有的OTUs個(gè)數(shù)分別為13、21和28個(gè)，表現(xiàn)為根>莖>葉。

3 討論

植物內(nèi)生菌具有豐富的生物多樣性，是微生態(tài)的重要組成部分，包括內(nèi)生細(xì)菌、內(nèi)生真菌和內(nèi)生放線菌[14-16]。中草藥內(nèi)生菌的相關(guān)報(bào)道多以內(nèi)生真菌為主，而內(nèi)生細(xì)菌鮮見報(bào)道。黃雅麗等[17]在研究結(jié)香和非結(jié)香的白木香內(nèi)生細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)及變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，結(jié)香前后白木香內(nèi)生細(xì)菌發(fā)生顯著的、有規(guī)律的變化，因此筆者認(rèn)為中草藥內(nèi)生細(xì)菌資源的開發(fā)利用有待挖掘。

隨著基因測(cè)序技術(shù)的不斷進(jìn)步，Illumina MiSeq高通量測(cè)序技術(shù)已先后應(yīng)用于環(huán)境微生物[18]、腸道微生物[19]等的研究之中，該技術(shù)克服了傳統(tǒng)分子生物學(xué)方法通量低、信息量小等缺陷，從基因水平上對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。就植物組織而言，葉綠體和線粒體與細(xì)菌在系統(tǒng)發(fā)育上具有高度的同源性[20]，采用高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行植物內(nèi)生細(xì)菌的研究時(shí)，陳澤斌等[21]發(fā)現(xiàn)，在植物內(nèi)生細(xì)菌16S rRNA-V4變異區(qū)測(cè)序時(shí)，會(huì)出現(xiàn)宿主污染現(xiàn)象，導(dǎo)致部分豐度較低的OTUs被忽略，從而影響內(nèi)生細(xì)菌多樣性分析結(jié)果的全面性和準(zhǔn)確性。本試驗(yàn)為減小宿主污染對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，在16S rRNA基因PCR擴(kuò)增階段采用多重PCR方法抑制植物質(zhì)體污染，使各樣品測(cè)試結(jié)果中葉綠體豐度降低至18.66%～53.38%，其中葉部最高，由此可見質(zhì)體污染是植物內(nèi)生菌研究的重要障礙，能夠在降低質(zhì)體和線粒體干擾的情況下無偏差地進(jìn)行微生物多樣性的研究是植物內(nèi)生菌多樣性研究的重點(diǎn)。

從各樣品菌群豐度最高的10個(gè)OTUs分析看，石蟬草內(nèi)生細(xì)菌存在明顯的組織特異性。伯克氏菌目和Dokdonella屬細(xì)菌為根部?jī)?yōu)勢(shì)菌群。硫桿菌屬和Truepera屬為莖部?jī)?yōu)勢(shì)群落?；【鷮?、海單胞菌屬和芽孢桿菌屬為葉部?jī)?yōu)勢(shì)群落。其中，芽孢桿菌屬在石蟬草根、莖、葉中均有分布，已有研究結(jié)果表明多種芽孢桿菌屬細(xì)菌可通過產(chǎn)生脂肽類抗生素和誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性對(duì)植物病原菌產(chǎn)生廣譜抗性[22]，同時(shí)芽孢桿菌屬也是產(chǎn)生醫(yī)用抗生素的3個(gè)主要來源之一[23]；粘球菌目?jī)H存在于石蟬草根部，其廣泛分布于全球各地的土壤中[24]，粘細(xì)菌為第三大類次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生菌[25]，研究發(fā)現(xiàn)粘細(xì)菌能產(chǎn)生豐富的生物活性物質(zhì)，其抑瘤譜較廣[26]，抗腫瘤活性甚至高于紫杉醇[27]，是發(fā)掘藥用活性物質(zhì)和新型化合物的良好材料[28]。由此推斷，石蟬草部分內(nèi)生細(xì)菌可能與其具有抗炎[29]、抗腫瘤[1]生物活性的化合物存在潛在的相關(guān)性。石蟬草活性成分的形成是否與其內(nèi)生細(xì)菌的活動(dòng)具有密切關(guān)系，下一步還需通過分離培養(yǎng)等研究進(jìn)行驗(yàn)證。

4 結(jié)論

本研究采用Illumina MiSeq高通量測(cè)序技術(shù)，從石蟬草根、莖、葉3個(gè)樣品中共獲得167個(gè)OTUs，歸屬于11個(gè)門，26個(gè)綱，48個(gè)目，82個(gè)科和104個(gè)屬，主要門類為變形菌門、Ignavibacteriae、芽單胞菌門、梭桿菌門、厚壁菌門、異常球菌-棲熱菌門、綠彎菌門、擬桿菌門、放線菌門和酸桿菌門，各樣品的菌群組成和豐度雖有差異，但變形菌門為優(yōu)勢(shì)菌群，約占62.48%～93.24%。本研究更加準(zhǔn)確、全面的揭示了石蟬草內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)等重要信息，并利用非培養(yǎng)方法首次發(fā)現(xiàn)石蟬草內(nèi)生細(xì)菌與其具有抗炎、抗腫瘤生物活性的化合物具有潛在的相關(guān)性，從而為深入了解內(nèi)生細(xì)菌與石蟬草之間的相互作用，甚至進(jìn)一步研究石蟬草內(nèi)生菌代謝途徑及其活性成分形成機(jī)理提供了有價(jià)值的研究成果。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳 立. 石蟬草化學(xué)成分及抗腫瘤活性的研究[D]. 北京： 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院， 2007.

[2] 劉學(xué)周， 趙智靈， 李紹賓， 等. 西洋參內(nèi)生菌群落結(jié)構(gòu)與多樣性[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2015， 55（3）： 330-340.

[3] 朱妍妍， 艾 嫦， 張 嘉， 等. 具有生物活性的植物內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物[J]. 化學(xué)進(jìn)展， 2011， 23（4）： 704-730.

[4] Strobel G， Stierle A， Stierle D. Tawmyces andreanae， a proposed new taxon for a Bulbilliferous hyphomycete associated with Pacific yew（Taxus brevifolia）[J]. Mycotaxon， 1993， 47（1）： 71-80.

[5] 崔晉龍， 肖培根， 郭順星. 真菌誘導(dǎo)白木香產(chǎn)生沉香的野外實(shí)驗(yàn)與分析[J]. 中國藥學(xué)雜志， 2012， 47（20）： 1 614-1 617.

[6] 陶金華， 濮雪蓮， 江 曙. 內(nèi)生真菌誘導(dǎo)子對(duì)茅蒼術(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)及蒼術(shù)素積累的影響[J]. 中國中藥雜志， 2011， 36（1）： 27-31.

[7] 朱文君， 林夢(mèng)感， 楊國紅， 等. 石蟬草中兩個(gè)新的聚酮類化合物[J]. 中草藥， 2011， 42（3）： 420-423.

[8] 陳澤斌， 李 冰， 王定康， 等. 白芨內(nèi)生細(xì)菌組成及多樣性分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2016， 47（2）： 227-233.

[9] 竇 妍， 趙曉偉， 丁 君， 等. 基于高通量測(cè)序技術(shù)分析患病與健康蝦夷扇貝（Patinopecten yessoensis）閉殼肌菌群多樣性[J]. 生態(tài)學(xué)雜志， 2016， 35（4）： 1 019-1 025.

[10] Magocv T， Salzberg S L. FLASH： fast length adjustment of short reads to improve genome assemblies[J]. Bioinformatics， 2011， 27（21）： 2 957-2 963.

[11] Edgar R C. UPARSE： highly accurate OTU sequences from microbial amplicon reads[J]. Nature Methods， 2013， 10（10）： 996-998.

[12] Cole J R， Wang Q， Cardenas E， et al. The Ribosomal Database Project： improved alignments and new tools for rRNA analysis[J]. Nucleic Acids Research， 2009， 37（Database issue）： D141-145.

[13] Caporaso J G， Kuczynski J， Stombaugh J， et al. QIIME allows analysis of high-throughput community sequencing data[J]. Nat Meth， 2010， 7（5）： 335-336.

[14] Azevedo J L， Maccheroni Jr W， Pereira J O， et al. Endophytic microorgnisms： a review on insect control and recent advances on tropical plants[J]. J Biotech， 2000， 3（1）： 40-65.

[15] 郭良棟. 內(nèi)生真菌研究進(jìn)展[J]. 菌物系統(tǒng)， 2001， 20（1）： 148-152.

[16] 曹理想， 周世寧. 植物內(nèi)生放線菌研究[J]. 微生物學(xué)通報(bào)， 2004， 31（4）： 93-96.

[17] 黃雅麗， 鄺棗園， 宋夢(mèng)微， 等. 結(jié)香與未結(jié)香白木香內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及變化[J]. 中國中藥雜志， 2015， 40（1）： 63-67.

[18] Sogin M L， Morrison H G， Huber J A， et al. Microbial diversity in the deep sea and the underexplored“rare biosphere”[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences， 2006， 103（32）： 12 115-12 120.

[19] 南春燕， 馬雅軍， 徐建農(nóng)， 等. 中華按蚊幼蟲腸道細(xì)菌宏基因組的組成研究[J]. 中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志， 2013， 31（2）：114-119.

[20] 胡 楷， 吳慶書. 單細(xì)胞生物進(jìn)化研究的進(jìn)步[J]. 遺傳， 2002， 24（1）： 104-110.

[21] 陳澤斌， 李 冰， 王定康， 等. Illumina MiSeq高通量測(cè)序分析核桃內(nèi)生細(xì)菌多樣性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2015（5）： 1 129-1 133.

[22] 黃 曦， 許蘭蘭， 黃榮韶， 等. 枯草芽孢桿菌在抑制植物病原菌中的研究進(jìn)展[J]. 生物技術(shù)通報(bào)， 2010， 7（1）： 24-29.

[23] 霍培元. 一株芽孢桿菌Bacillus pumilus次生代謝產(chǎn)物研究[D]. 沈陽： 中國醫(yī)科大學(xué)， 2010.

[24] 周秀文. 土壤中粘細(xì)菌群落的調(diào)查及領(lǐng)地性行為的分子機(jī)制的研究[D]. 濟(jì)南： 山東大學(xué)， 2013.

[25] 唐少軍， 肖 蓉， 文 也， 等. 粘細(xì)菌STXZ54的分離鑒定及其抗腫瘤活性[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2014， 54（5）： 532-542.

[26] Steinmetz H， Mohr K I， Zander W， et al. Indiacens A and B： Prenyl Indoles from the Myxobacterium Sandaracinus amylolyticus[J]. Journal of Natural Products， 2012， 75（10）： 1 803-1 805.

[27] 原紅娟， 譚志遠(yuǎn)， 朱紅惠. 粘細(xì)菌的生物活性物質(zhì)及其應(yīng)用前景研究進(jìn)展[J]. 生態(tài)科學(xué)， 2015， 34（6）： 182-187.

[28] 趙智穎， 張鮮姣， 譚志遠(yuǎn)， 等. 藥用植物根系土壤可培養(yǎng)粘細(xì)菌的分離鑒定[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2013， 53（7）： 657-668.

[29] Chieko T， Yuriko Y， Masayoshi A， et al. Peperomins as anti-inflammatory agents that inhibit the NF-κB signaling pathway[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters， 2009， 19： 4 084-4 087.