陶佩琳 李志強 沈蘇婷 董帆

摘要[目的]通過組織培養(yǎng)技術(shù)建立佛甲草快繁體系，為更好滿足市場需要、實現(xiàn)其生態(tài)景觀效益提供材料。[方法]以佛甲草莖段為外植體，研究不同濃度配比的激素對組培過程中不定芽誘導(dǎo)、叢生芽增殖及生根的影響，篩選出各階段最適培養(yǎng)基。[結(jié)果]佛甲草不定芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L；叢生芽增殖最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg/L。[結(jié)論]以莖段為途徑建立佛甲草快繁體系，能夠高效穩(wěn)定地獲得組培苗。

關(guān)鍵詞佛甲草；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號S604+.3文獻標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）08-0145-03

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Sedum lineare Thunb.

TAO Peilin， LI Zhiqiang， SHEN Suting et al（Xuzhou Vocational College of Bioengineering，Xuzhou，Jiangsu 221006）

Abstract[Objective]To establish rapid propagation system of Sedum lineare Thunb.using tissue culture technology for meeting the needs of the market and provide materials for the realization of the ecological landscape. [Method]Taking the new stem segments of S. lineare Thunb.as explants， the effects of different concentrations of hormone combinations on adventitious bud induction，proliferation and root induction were studied， in the hope of screening out the most suitable medium of each stage. [Result] The optimal medium for adventitious bud induction was MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AC 1.6 g/L； the optimal medium for adventitious bud proliferation was MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AC 1.6 g/L； the optimal medium for root induction was 1/2MS+NAA 0.2 mg/L. [Conclusion]Its feasible to obtain plantlets of S. lineare Thunb.efficiently and stably by using the stem as the material to establish the rapid propagation system.

Key wordsSedum lineare Thunb.；Tissue culture；Rapid propagation

佛甲草（Sedum lineare Thunb.），又名萬年草、佛指甲、半支蓮等，為景天科景天屬多年生草本植物，莖高10～20 cm，肉質(zhì)多汁；葉呈線狀或披針形，葉色碧綠，常3葉輪生；聚傘花序頂生，花莖直立，花小，黃色，花期5—6月。佛甲草具有生長適應(yīng)性強、耐寒、耐旱、耐瘠薄等特點，是優(yōu)良的地被植物，且被視為屋頂綠化佳品[1]，具有良好的景觀及生態(tài)效益。

佛甲草成活率高，其栽培繁殖已逐步進入市場化，繁殖方式以分株、扦插為主。但上述方法存在耗時耗力、前期生長較慢[2]、受季節(jié)限制、質(zhì)量參差不齊等問題。通過組織培養(yǎng)技術(shù)建立佛甲草快繁體系，對滿足市場需求、實現(xiàn)其在城市綠化中的規(guī)?；瘧?yīng)用具有重要意義。筆者初步建立了佛甲草的組織培養(yǎng)與快速擴繁體系，以期為佛甲草工廠化育苗提供一定的技術(shù)支持。

1材料與方法

1.1材料供試植物材料為佛甲草，購于徐州市植物園，外植體選擇健康的幼嫩莖段。

1.2方法

1.2.1無菌材料的獲得。選擇健壯、無病蟲害的佛甲草作為母株，剪取3～5 cm長的嫩梢。用洗衣粉水洗凈后再用流水沖洗20 min，之后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺上進行表面消毒。先用75%酒精浸泡30 s，再用0.1%升汞消毒6 min，隨后用無菌水沖洗3～5遍。將消毒后的材料置于無菌濾紙上，剪成1～2 cm、帶1～2個腋芽的小莖段，備用。

1.2.2培養(yǎng)條件。

該試驗所用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，其中加入蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，根據(jù)需要添加不同濃度的6-BA、NAA和活性炭1.6 g/L，pH為5.8。在培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)，光照強度1 600～2 000 lx，光照時間12 h/d，培養(yǎng)溫度24～26 ℃。

1.2.3不定芽的誘導(dǎo)。

將消毒好的1～2 cm帶節(jié)莖段分別接種在添加不同濃度的6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）和NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L）的培養(yǎng)基上。每種處理接入30個外植體，3次重復(fù)。培養(yǎng)約30 d后統(tǒng)計不定芽誘導(dǎo)率及生長狀態(tài)。不定芽誘導(dǎo)率=出芽數(shù)/接種外植體數(shù)×100%。

1.2.4芽的增殖。當(dāng)誘導(dǎo)出的新芽長至3 cm高時，將其剪下轉(zhuǎn)接至芽增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)。培養(yǎng)基中添加不同濃度6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）和NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L）。每種處理30瓶，每瓶接1株。培養(yǎng)約30 d后觀察并記錄增殖結(jié)果。叢生芽增殖系數(shù)=叢生芽數(shù)/接種芽數(shù)。

1.2.5壯苗及生根。

待叢生芽長至一定階段時，將其切成單苗，轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)。選取高2～3 cm、帶2～3輪真葉的不定芽，分別接種到不同濃度NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L）的1/2 MS培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)約30 d后統(tǒng)計生根率，記錄根的特征。生根率=生根苗數(shù)/接種苗數(shù)×100%。

1.2.6試管苗的移栽，當(dāng)試管苗長至 3～4 cm，具有3～4輪真葉時，便可出瓶移栽，30 d后統(tǒng)計成活率。

2結(jié)果與分析

2.1不定芽的誘導(dǎo)在不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)配比的培養(yǎng)基中，外源激素的種類和濃度是影響組培試驗結(jié)果的關(guān)鍵。將佛甲草莖段外植體接種于添加不同濃度6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基上，設(shè)計正交試驗，進行初代培養(yǎng)，以便篩選出最佳不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基。外植體培養(yǎng)30 d后，試驗結(jié)果見表1和圖1。

外植體莖段接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中10 d左右，芽逐漸開始分化。由表1可知，當(dāng)6-BA濃度為1.0 mg/L，不定芽的誘導(dǎo)率最高，平均達50.45%。另外，高濃度的NAA往往會抑制腋芽的發(fā)生。在一定濃度范圍內(nèi)，隨著NAA濃度上升，叢生芽的誘導(dǎo)率也明顯升高，而當(dāng)NAA濃度繼續(xù)升高至0.5 mg/L時，3個6-BA濃度水平（0.5、1.0、2.0 mg/L）下的誘導(dǎo)率分別較NAA 0.2 mg/L處理降低了9.06百分點、41.15百分點和35.63百分點。綜合誘導(dǎo)率、生長狀態(tài)及健壯程度等因素，MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L是不定芽誘導(dǎo)的最佳配方。

2.2芽的增殖

將初代培養(yǎng)得到的不定芽剪成1～2 cm長的帶芽莖段，接種在以MS為基本培養(yǎng)基添加不同激素的增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，7 d后腋芽明顯膨大，30 d后增殖情況見表2。試驗結(jié)果表明，6-BA的濃度越高，誘導(dǎo)出的叢生芽就越多，且在部分培養(yǎng)基上，愈傷組織可以直接分化出完整植株，但根細弱纏繞，植物間不易分離。NAA濃度對芽增殖的影響較大，當(dāng)NAA濃度為0.1或0.2 mg/L時，

芽增

殖后發(fā)育成帶根的叢生幼苗；而當(dāng)濃度為0.5 mg/L時，增殖苗無根或僅有少量根。綜合比較，確定以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L為芽增殖最適培養(yǎng)基，增殖系數(shù)為8.7，苗健壯發(fā)達，大小適宜（圖2）。

2.3壯苗、生根培養(yǎng)

將繼代增殖的試管苗轉(zhuǎn)接于MS基本培養(yǎng)基上進行壯苗培養(yǎng)[3]，為順利生根移栽做準(zhǔn)備。培養(yǎng)21 d后，可見試管苗莖芽長高，莖變粗，葉片增大，葉色濃綠，同時有少量粗根形成（圖3）。將壯苗后的組培苗切分成2～3 cm的莖段，分別接入不同NAA濃度的1/2MS培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)。由表3可知，在供試的3個不同NAA濃度中，以0.2 mg/L NAA誘導(dǎo)出的根量及狀態(tài)最佳；當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時，根量最多，但太細弱；當(dāng)NAA濃度為0.5 mg/L時，根最長，但量少且細。選擇1/2MS+NAA 0.2 mg/L為最佳生根培養(yǎng)基。

2.4試管苗的移栽

選擇生長健壯的試管苗，在自然光下煉苗3～4 d后取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用1 000倍多菌靈浸泡30 s后移栽至已滅菌的基質(zhì)中，基質(zhì)配方為珍珠巖∶草炭土=1∶3。常規(guī)養(yǎng)護下，30 d后的移栽成活率為85%以上。

3結(jié)論與討論

該研究以幼嫩莖段作為外植體，初步建立了佛甲草離體植株再生體

系。試驗發(fā)現(xiàn)佛甲草試管苗的形成不需經(jīng)過脫

分化誘導(dǎo)，直接由離體莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，通過以芽繁芽的形式進行快速繁殖，縮短了體外繁殖周期，并有利于保持母株基因型的穩(wěn)定性。

該研究采用不同培養(yǎng)基和激素配比，篩選出離體培養(yǎng)各階段最適的培養(yǎng)基配方。試驗結(jié)果表明，佛甲草不定芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L，誘導(dǎo)率達75.57%，形成的叢生芽大而健壯。MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L為芽增殖最適培養(yǎng)基，增殖系數(shù)達8.7。該研究發(fā)現(xiàn)，NAA的濃度對于芽的分化及增殖影響較大。高濃度的NAA往往會抑制腋芽的發(fā)生和增殖過程中根的形成，這與前人的研究結(jié)果相一致[4-5]。

在生根培養(yǎng)時，大多數(shù)試驗已得出結(jié)論，以1/2MS作為生根基本培養(yǎng)基效果較好[6]。以1/2MS搭配不同濃度的NAA來進行生根試驗，結(jié)果表明不同濃度的NAA生根培養(yǎng)基中均可分化出根，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg/L，誘導(dǎo)的根量大且較粗。另外試驗還發(fā)現(xiàn)，在不定芽誘導(dǎo)及增殖過程中，均有根的發(fā)生，表明佛甲草屬于易生根植物。

在國家大力倡導(dǎo)節(jié)能減排的今天，屋頂綠化在我國南方地區(qū)已被廣泛應(yīng)用，但在地處暖溫帶南緣的徐州地區(qū)仍需進一步推廣[7]。該研究建立了佛甲草的離體快繁體系，為實現(xiàn)其工廠化生產(chǎn)提供了一定的技術(shù)支持，對滿足市場需求、實現(xiàn)其生態(tài)景觀效益具有現(xiàn)實意義。

45卷8期陶佩琳等佛甲草的組培快繁技術(shù)研究

參考文獻

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