潘靜++徐惠++張小蒙++李鳳++王庭之++卓微偉

摘 要：文蛤活性肽是一類小分子多肽，它具有被腸道直接吸收的營養(yǎng)特性，且具有較強(qiáng)的腫瘤抑制作用、抗氧化活性等，成為當(dāng)前研究的熱門課題之一。該文綜述了文蛤活性肽的制備、分離純化及功能活性方面的研究進(jìn)展，并闡明文蛤活性肽在醫(yī)藥、食品及化妝品等領(lǐng)域中的潛在應(yīng)用價值，為進(jìn)一步開發(fā)利用文蛤活性肽提供一定的參考。

關(guān)鍵詞：文蛤 活性肽 酶水解法 分離純化 應(yīng)用

中圖分類號：G420 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-3791（2017）04（a）-0239-02

海洋軟體動物文蛤（Meretrix Meretrix Linnaeus）不僅肉嫩味鮮、營養(yǎng)豐富，而且具有很高的藥用價值?！侗静菥V目》上說，它能治“瘡、癤腫毒，消積塊，解酒毒”等病。近年來的研究表明，文蛤具有多種天然活性物質(zhì)，其中文蛤活性肽是一種小分子物質(zhì)，具有可以被腸道直接吸收的營養(yǎng)特性，且具有較強(qiáng)的腫瘤抑制作用、抗氧化活性等，其天然活性、高效性、安全性一直備受關(guān)注，因此對文蛤活性肽的研究成了當(dāng)前國內(nèi)外研究的熱門課題之一。該文介紹了文蛤活性肽的制備、分離純化及功能活性方面的最新研究進(jìn)展，為進(jìn)一步開展文蛤活性肽的研究應(yīng)用提供參考。

1 文蛤活性肽的制備

文蛤活性肽是從海洋軟體動物文蛤中獲取的一類多肽，目前文蛤活性肽的制備方法主要有微生物發(fā)酵法、溶劑萃取法以及酶水解法這三種方法。微生物發(fā)酵法較多的適用于蛋白質(zhì)含量豐富的原料，從獲取的發(fā)酵液中分離純化活性肽，且在后續(xù)制備過程中需要配合活性肽的化學(xué)合成及基因修飾等技術(shù)。溶劑萃取法是一種直接從文蛤中提取活性肽的方法，在提取過程中可能會造成氨基酸組成或二級結(jié)構(gòu)的破壞，從而影響其活性。酶水解法制備文蛤活性肽是通過適當(dāng)?shù)牡鞍酌杆獾鞍踪|(zhì)來制備活性肽的一種方法，它沒有有機(jī)溶劑和有毒化學(xué)品的殘留，而且酶水解法制備活性肽具有條件溫和、產(chǎn)品安全性高、成本低、條件易于控制等優(yōu)點(diǎn)，成為目前制備活性肽的首選方法。

目前，國內(nèi)外對于酶解法制備文蛤活性肽的研究已經(jīng)從單一的單酶解工藝轉(zhuǎn)化為雙酶復(fù)合酶解和多酶分步定向酶解。李和生等[1]利用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解文蛤蛋白，水解液用Sephadex G-50凝膠層析進(jìn)行分離，用SDS-PAGE凝膠電泳分析出水解產(chǎn)物組分Ⅰ和組分Ⅱ，且抗氧化研究表明組分Ⅱ?qū)αu自由基和氧自由基的清除率高達(dá)74.60%和56.36%。邱春江等[2]的研究也表明，利用胰蛋白酶水解文蛤蛋白，其水解產(chǎn)物對羥自由基的清除率高達(dá)94.02%。何小慶等[3]采用胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶及木瓜蛋白酶等酶類水解新鮮文蛤肉，采用正交試驗和單因素分析對酶解條件進(jìn)行優(yōu)化，酶解3 h后得到平均肽鏈為2.41的小分子肽，表明優(yōu)化條件下的酶解產(chǎn)物為低分子活性肽制品。以上這些研究表明，利用酶水解法可以從文蛤蛋白中獲取小分子肽，且這些小分子肽具有抗氧化等生物活性。

2 文蛤活性肽的分離純化

在利用酶水解法制備文蛤活性肽的工藝中，水解液中的活性多肽組分復(fù)雜，且分子量大小和結(jié)構(gòu)差異很大，為了進(jìn)一步獲得高純度的文蛤活性肽，需要運(yùn)用合適的分離純化方法從水解液中篩選出所需特定成分。

目前，常用的分離純化方法有超濾法、色譜法以及一些方法的聯(lián)用技術(shù)等。超濾法是選擇適當(dāng)孔徑的膜來分離分子量大小不一的肽類，該法操作簡單，分離效率高，因此在文蛤活性肽的分離純化中得到了廣泛的應(yīng)用。在使用色譜法來分離純化文蛤活性肽的實(shí)驗中，離子交換色譜、凝膠色譜以及高效液相色譜等技術(shù)較為常用。張玉艷[4]采用離子交換色譜和凝膠色譜等技術(shù)，結(jié)合MTT比色法對活性組份進(jìn)行追蹤，從文蛤蛋白中分離出分子量為1245Da的多肽。利用酶水解法制備的活性肽中各肽段之間往往具有較大的相似性，要想從中獲取某一活性肽成分，使用單一的分離純化方法往往不夠理想，常需要多種方法進(jìn)行聯(lián)用，一般常用膜分離技術(shù)與幾種色譜技術(shù)進(jìn)行結(jié)合，然后通過SDS-PAGE、質(zhì)譜等來檢測其純度。白仁奧[5]采用超濾法、Sephadex G-25、凝膠柱層析、RP-HPLC等系列純化技術(shù)對文蛤活性肽的酶解產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，最終得到4個目的活性肽。

3 文蛤活性肽的功能活性研究

文蛤具有極高的藥用價值，最早的藥物學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》中收載的6種貝藥，文蛤即為其中之一?，F(xiàn)代的研究也表明文蛤中的活性肽具有多種重要的功能活性。目前，對文蛤活性肽的生理活性研究主要集中在抗氧化作用及腫瘤抑制作用等方面。

白仁奧[5]在酶法制備文蛤活性肽的研究實(shí)驗中測定了復(fù)合蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶5種蛋白酶水解產(chǎn)物在濃度為1 mg/mL時，對DPPH自由基的最大清除率分別達(dá)到了19.65%、20.28%、55.74%、25.09%、21.95%，且在抗腫瘤實(shí)驗中，5種蛋白酶酶解產(chǎn)物對腫瘤細(xì)胞S-180和Bcap-37的增殖有一定的抑制作用。閻欲曉等[6]的研究也表明，文蛤蛋白經(jīng)過酶解后均表現(xiàn)出一定的清除自由基的活性，不同的酶作用于文蛤蛋白可表現(xiàn)出不同的水解特性和清除自由基活性。王翠翠[7]從文蛤體液中分離純化出分子量約為15KDa的活性肽Mere15，并研究發(fā)現(xiàn)Mere15具有較好的抗癌活性，對裸小鼠人肺癌移植瘤的體內(nèi)抑癌作用顯著且不良反應(yīng)不明顯，并在進(jìn)一步的抑癌機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，Mere15抑制腫瘤細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯有關(guān)。范成成等[8]對文蛤低分子多肽Mer2的體外抗癌活性研究表明，Mer2對體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株、宮頸癌細(xì)胞株、膽管癌細(xì)胞株、肺癌細(xì)胞株的生長均有很強(qiáng)的抑制作用，且Mer2細(xì)胞培養(yǎng)液處理后的細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞周期發(fā)生明顯的改變。

4 文蛤活性肽的應(yīng)用前景

目前對文蛤活性肽的研究大多處于實(shí)驗室階段，對其開發(fā)應(yīng)用研究較少，所以今后可以從醫(yī)藥、食品、化妝品等行業(yè)進(jìn)行深入研究及開發(fā)。文蛤活性肽作為醫(yī)藥產(chǎn)品的添加成分具有廣闊空間，但目前對其在體內(nèi)活性和應(yīng)用效果方面的研究尚不全面。文蛤活性肽在人類健康和營養(yǎng)方面起著重要作用，可添加在功能性新食品中，通過日常飲食來預(yù)防和調(diào)節(jié)慢性疾病，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力。另外文蛤活性肽在化妝品行業(yè)也將有更深入的研究及開發(fā)應(yīng)用。如范成成[8]的研究結(jié)果表明，文蛤活性肽Mer1能降低細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶的活性和黑色素的含量，可作為一種安全無毒副作用的美白添加劑。

雖然文蛤活性肽在開發(fā)應(yīng)用方面還有些問題有待解決，但我國文蛤資源豐富，加之依托各高校及科研機(jī)構(gòu)的科研平臺，相信一定能實(shí)現(xiàn)文蛤活性肽在醫(yī)藥、食品及化妝品行業(yè)中的高值化應(yīng)用，增強(qiáng)我國文蛤活性肽開發(fā)利用的國際競爭力。

參考文獻(xiàn)

[1] 李和生，劉智勇，王鴻飛.文蛤多肽組分的分離及其抗氧化活性研究[J].中國食品學(xué)報，2012（6）：30-35.

[2] 邱春江，姚興存，趙培培，等.酶解文蛤小分子肽分離純化及生化特性[J].食品研究與開發(fā)，2010（5）：4-6.

[3] 何小慶，曹文紅，章超樺，等. 酶解文蛤制備低分子肽的研究[J].食品科技，2013（4）：124-129.

[4] 張玉艷.文蛤抗腫瘤多肽的分離純化及其作用機(jī)理的研究[D].中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所），2010.

[5] 白仁奧.酶法制備文蛤活性多肽的研究[D].集美大學(xué)，2013.

[6] 閻欲曉，粟桂嬌，李小梅，等.文蛤蛋白抗氧化活性肽的研究[J].食品工業(yè)科技，2007（12）：121-123.

[7] 王翠翠.文蛤多肽的分離純化及抗腫瘤機(jī)制研究[D].中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所），2011.

[8] 范成成.文蛤多肽的研究與應(yīng)用[D].廈門大學(xué)，2009.