何淑玲 趙墾田 馬令法 楊敬軍 常毓巍

（1西藏農(nóng)牧學(xué)院高原生態(tài)研究所，西藏林芝860000；2甘肅民族師范學(xué)院高寒生態(tài)系統(tǒng)研究所，甘肅合作747000）

羊肚菌（Morchella spp），屬子囊菌亞門（Aseomy?cotina），盤菌綱（Discomycetes），盤菌目（Pezizales），羊肚菌科（Morchellaceae），羊肚菌屬（Morchella）[1]，享有“世界上最珍貴的稀有食用菌”之名，具有很高的滋補(bǔ)效果。它香味獨(dú)特、功能齊全，含有豐富的人體必需氨基酸、多種維生素、碳水化合物及蛋白質(zhì)，因其菌蓋似羊肚而得名[2]。羊肚菌具有提神、醒腦、補(bǔ)腎等功效，并且在醫(yī)療保健領(lǐng)域也有重要的作用[3]，此外羊肚菌，藥性平和、味道甘甜，是很好的中藥材，有消食、益腸道及健脾胃等功效[4]，在食品、藥品、化妝品等方面有很大的開發(fā)利用價(jià)值[5]。目前對(duì)羊肚菌的研究較多，主要集中在對(duì)菌絲和菌核、保健、藥理、生物學(xué)特性、多糖提取等方面[6-12]，有關(guān)培養(yǎng)料配方對(duì)羊肚菌生長(zhǎng)及品質(zhì)的作用鮮有報(bào)道[13-16]。為此筆者對(duì)三級(jí)菌種不同培養(yǎng)料配方對(duì)羊肚菌生長(zhǎng)及品質(zhì)的影響進(jìn)行了全面研究，為進(jìn)一步確定羊肚菌生長(zhǎng)的最佳栽培種培養(yǎng)料配方提供理論依據(jù)，也為提高羊肚菌產(chǎn)量和品質(zhì)提供科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1供試原料與器具（1）原料：石膏、雜木屑、石灰、麩皮、蔗糖、草木灰、Ca（H2PO4）2、催菇劑、KH2PO4、MgSO4、75%酒精及羊肚菌基腳土（取自甘肅民族師范學(xué)院食用菌引種馴化基地采收羊肚菌3潮的0～30 cm的土壤）。

（2）儀器：人工氣候箱、分析天平、恒溫干燥箱、電熱爐、研缽、索氏提取器、全自動(dòng)定氮儀等。

1.2試驗(yàn)配方及三級(jí)種制備

1.2.1 培養(yǎng)料配方 配方1：雜木屑74%，麩皮20%，KH2PO41%，MgSO41%，羊肚菌基腳土1%，石膏1%，石灰1%，Ca（H2PO4）21%。配方2：雜木屑74%，麩皮20%，KH2PO41%，MgSO41%，催菇劑1%，石膏1%，石灰1%，Ca（H2PO4）21%。配方3：雜木屑74%，麩皮20%，KH2PO41%，MgSO41%，草木灰1%，石膏1%，石灰1%，Ca（H2PO4）21%。配方4：雜木屑74%，麩皮20%，KH2PO41%，MgSO41%，蔗糖1%，石膏1%，石灰1%，Ca（H2PO4）21%。

封口料共設(shè)1個(gè)配方：羊肚菌基腳土75%，麩皮15%，木屑10%。

1.2.2 三級(jí)種的制備 按不同配方比例稱好原料后將雜木屑、麩皮、羊肚菌基腳土、石灰、石膏等混合均勻，將蔗糖、KH2PO4、MgSO4、Ca（H2PO4）2一起加少許水溶解后，均勻的灑在已混合的料堆上，加水?dāng)嚢杈鶆?，培養(yǎng)料捏在手里既不會(huì)流出水，又不會(huì)碎成渣為宜；同時(shí)將封口料混合后加水?dāng)嚢杈鶆?，同樣捏在手里既不?huì)流出水，又不會(huì)碎成渣為宜。將拌好的培養(yǎng)料裝入750 mL食用菌專用瓶，上端用封口料封口。再將培養(yǎng)料在0.12 MPa，120℃高溫高壓滅菌60 min。待滅菌后的培養(yǎng)料溫度降低后，將培養(yǎng)料和接種所用器具一起放入超凈工作臺(tái)，紫外線滅菌30 min后開始接種，用接種鏟取蠶豆大小供試二級(jí)菌種，接入到培養(yǎng)料中。每個(gè)配方接種15～20瓶，最后將接種好的培養(yǎng)料瓶置于恒溫培養(yǎng)箱23℃恒溫黑暗培養(yǎng)，等菌核長(zhǎng)滿即可。

1.3栽培方法試驗(yàn)采用田間隨機(jī)區(qū)組法，2016年9月25日將菌種播種于溫室大棚中，小區(qū)面積為3 m×4 m，一個(gè)小區(qū)播種同種配方培養(yǎng)料12瓶種，每個(gè)培養(yǎng)料配方重復(fù)3次。

1.4測(cè)定指標(biāo)與方法（1）菌蓋長(zhǎng)（cm）：用游標(biāo)卡尺測(cè)量被標(biāo)記的10株羊肚菌的菌蓋長(zhǎng)，取其平均值。（2）菌蓋周長(zhǎng)（cm）：用游標(biāo)卡尺測(cè)量被標(biāo)記的10株羊肚菌的菌蓋直徑，算出周長(zhǎng)，取其平均值。（3）菌柄長(zhǎng)（cm）：用游標(biāo)卡尺測(cè)量被標(biāo)記的10株羊肚菌的菌柄長(zhǎng)，取其平均值。（4）菌柄周長(zhǎng)（cm）：用游標(biāo)卡尺測(cè)量被標(biāo)記的10株羊肚菌的菌柄直徑，算出周長(zhǎng)，取其平均值。（5）單株鮮重（g）=三潮菇的總鮮重/采摘的三潮菇的總株數(shù)。（6）單株干重（g）=三潮菇的總干重/采摘的三潮菇的總株數(shù)。（7）小區(qū)鮮產(chǎn)量（kg）=單株鮮重×平均每個(gè)小區(qū)采摘的三潮菇的株數(shù)/1000。（8）小區(qū)干產(chǎn)量（kg）=單株干重×平均每個(gè)小區(qū)采摘的三潮菇的株數(shù)/1000。

（9）灰分（%）=（W2-W0）/（W1-W0）×100

式中：W2-炭化后瓷坩堝加灰分質(zhì)量（g），W0-恒重空瓷坩堝質(zhì)量（g），W1-瓷坩堝加試樣質(zhì)量（g）[17]。

（10）粗纖維（%）=（m1-m0）/m×100

式中：m0-瓷坩堝質(zhì)量（g），m1-瓷坩堝加粗纖維的質(zhì)量（g），m-試樣用量（g）[17]。

（11）粗蛋白質(zhì)、氨基酸及總糖含量測(cè)定[17-18]。

1.5數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用DPS7.05統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1不同配方栽培種對(duì)羊肚菌菌蓋變化的影響表1結(jié)果表明，供試4個(gè)配方栽培種的羊肚菌子實(shí)體菌蓋生長(zhǎng)勢(shì)都較好，至2015年12月17日時(shí)菌蓋長(zhǎng)為2.7～5.1 cm，菌蓋周長(zhǎng)為10.7～15.7 cm?？梢钥闯?，在羊肚菌全生長(zhǎng)發(fā)育期配方1的菌蓋生長(zhǎng)都最快，菌蓋和菌蓋周長(zhǎng)比最慢的配方4的增加了42.10%和46.73%。

表1 不同栽培種配方對(duì)羊肚菌菌蓋變化的影響

2.2不同栽培種配方對(duì)羊肚菌菌柄生長(zhǎng)的影響表2結(jié)果顯示，研究4個(gè)栽培種配方的羊肚菌子實(shí)體菌柄生長(zhǎng)均正常且長(zhǎng)勢(shì)也較好，至2015年12月17日時(shí)菌柄長(zhǎng)為4.0～5.7 cm，菌蓋周長(zhǎng)為6.2～8.1 cm，可以看出，在整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育期配方1的菌柄生長(zhǎng)最快也最粗，配方4的菌柄生長(zhǎng)最慢也最細(xì)。配方1的菌柄長(zhǎng)和菌柄周長(zhǎng)比配方4的增加42.50%和30.65%。

表2 不同栽培種配方對(duì)羊肚菌菌柄變化的影響

2.3不同栽培種配方對(duì)子實(shí)體鮮重變化的影響由表3可見(jiàn)，在同一生長(zhǎng)時(shí)期，羊肚菌鮮子實(shí)體均表現(xiàn)出配方1的最重，配方4的最輕，4個(gè)配方的平均單株鮮重依次為配方1＞配方2＞配方3＞配方4。2015年12月17日時(shí)子實(shí)體達(dá)到采收標(biāo)準(zhǔn)，4個(gè)配方的子實(shí)體單株鮮重都達(dá)到了最大，且配方1的最高為28.28 g，配方4的最低為9.74 g，兩者間差異極顯著，其它各配方之間差異顯著。

表3 不同栽培種配方對(duì)羊肚菌鮮重的影響

表4 不同栽培種配方對(duì)羊肚菌干重的影響

2.4不同栽培種配方對(duì)子實(shí)體干重的影響由表4可見(jiàn)，在同一生長(zhǎng)時(shí)期，羊肚菌子實(shí)體單株干重配方1的最高，配方4的最低，4個(gè)配方的子實(shí)體平均單株干重依次為配方1＞配方2＞配方3＞配方4。2015年12月17日時(shí)子實(shí)體生長(zhǎng)達(dá)到采收標(biāo)準(zhǔn)，4個(gè)配方的子實(shí)體平均單株干重都達(dá)到了最高，且配方1的最高為3.67 g，配方4的最低為1.39 g，兩者之間差異極顯著，配方2與配方3差異不顯著，配方3與配方4差異顯著。

2.5不同栽培種配方對(duì)羊肚菌產(chǎn)量的影響由表5可見(jiàn)，4個(gè)配方中配方1羊肚菌小區(qū)采收數(shù)最多為77.09株，單株鮮、干重也都最高，產(chǎn)量也最高，子實(shí)體每小區(qū)產(chǎn)量（鮮品）為4.47 kg、干品為0.71 kg，配方4小區(qū)采收數(shù)、單株鮮、干重也都最小，產(chǎn)量等都比配方1低。各配方之間小區(qū)采收數(shù)、產(chǎn)量差異均達(dá)極顯著水平。

表5 不同栽培種配方對(duì)羊肚菌產(chǎn)量的影響

表6 不同栽培種配方對(duì)羊肚菌品質(zhì)的影響

圖1 配方1菌霜長(zhǎng)勢(shì)

圖2 配方1子實(shí)體長(zhǎng)勢(shì)

圖3 配方4菌霜長(zhǎng)勢(shì)

圖4 配方4子實(shí)體長(zhǎng)勢(shì)

2.6不同栽培種配方對(duì)羊肚菌品質(zhì)的影響由表6可見(jiàn)，4種培養(yǎng)料配方的羊肚菌灰分和粗纖維含量都是菌蓋＜菌柄，且配方1最低，灰分含量和粗纖維含量菌蓋為6.07%，12.19%，菌柄為7.40%，15.27%。配方4最高，灰分含量和粗纖維含量菌蓋為6.16%，25.24%，菌柄為7.81%，15.91%。其順序?yàn)榕浞?＜配方2＜配方3＜配方4，且配方1與配方4之間差異極顯著。總糖含量、粗蛋白含量和氨基酸總量都是菌蓋＞菌柄，其順序?yàn)榕浞?＞配方2＞配方3＞配方4，且配方1與配方4之間差異極顯著，不同栽培種配方羊肚菌品質(zhì)依次為配方1＞配方2＞配方3＞配方4。

3 小結(jié)與討論

供試的4個(gè)培養(yǎng)料配方中，配方1對(duì)羊肚生長(zhǎng)的影響最大，在形態(tài)特征方面表現(xiàn)為菌蓋和菌柄都最長(zhǎng)、最粗，小區(qū)子實(shí)體采收數(shù)、單株鮮重、單株干重和小區(qū)產(chǎn)量都最高，其順序依次為配方1＞配方2＞配方3＞配方4。在羊肚菌子實(shí)體的品質(zhì)方面配方1的羊肚菌灰分含量、粗纖維含量最少，其順序依次為配方1＜配方2＜配方3＜配方4；而配方1的多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸總量最高，其順序依次為配方1＞配方2＞配方3＞配方4，所以配方1羊肚菌子實(shí)體的品質(zhì)較好，而配方4的羊肚菌灰分含量最多，多糖、蛋白質(zhì)、粗纖維含量最少，品質(zhì)較差。三級(jí)菌種不同培養(yǎng)料配方對(duì)羊肚菌生長(zhǎng)及品質(zhì)的影響依次為配方1＞配方2＞配方3＞配方4。程遠(yuǎn)輝等[19]研究表明每公頃羊肚菌最高干重135 kg，與本研究結(jié)果不一致的原因可能是出菇期的管理和配方中缺少無(wú)機(jī)鹽等因素所致。申時(shí)才等[20]認(rèn)為：種植過(guò)羊肚菌的土壤比沒(méi)種植過(guò)羊肚菌的產(chǎn)量高，這一研究結(jié)果或許可以用來(lái)解釋為何羊肚菌子實(shí)體在栽培種培養(yǎng)料中加入羊肚菌基腳土后其生長(zhǎng)更好、更健壯。

試驗(yàn)表明加入羊肚菌基腳土的配方，羊肚菌子實(shí)體菌蓋、菌柄生長(zhǎng)最好，單株鮮重、單株干重、折合每公頃鮮產(chǎn)量、折合每公頃干產(chǎn)量最高，品質(zhì)也是4個(gè)配方中最好的。因此添加羊肚菌基腳土的栽培種培養(yǎng)料配方為羊肚菌生長(zhǎng)的最佳配方，這為羊肚菌今后的連作研究提供了實(shí)踐依據(jù)。至于為什么在培養(yǎng)料中加入羊肚菌基腳土能提高羊肚菌的產(chǎn)量和品質(zhì)的生理機(jī)理，這將是今后進(jìn)一步深入研究的內(nèi)容和方向。