裴夢然，鄭寰宇，趙秀蘭

（1.華北理工大學(xué)研究生院，河北 唐山 063000；2唐山市工人醫(yī)院婦二科，河北 唐山 063000）

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，嚴重威脅著女性健康，其發(fā)病率僅次于乳腺癌[1]。對于及時發(fā)現(xiàn)以及確認宮頸癌，將其在發(fā)病初期給予最好的治療是目前減少宮頸癌危害的一個關(guān)鍵性問題[2]。宮頸上皮內(nèi)瘤變作為宮頸癌前病變的主要疾病狀態(tài)，在宮頸癌的發(fā)生和進展過程中具有重要的推動作用。目前，我國宮頸癌篩查細胞學(xué)檢測敏感度較低、檢查結(jié)果受主觀影響大，HPV檢測敏感性高，但特異性較差，所以尋找新的標(biāo)志物便成為有效的分流手段。故本文對比研究TCT、HPV檢查與宮頸脫落細胞P16、Ki67、CK14檢測在宮頸上皮內(nèi)瘤變篩查中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年9月～2017年9月我院婦科門診行宮頸癌篩查患者，年齡22～76歲。為了確保實驗數(shù)據(jù)的正確性以及合理性，將有宮頸、腫瘤、妊娠以及子宮手術(shù)的群體排除在外。并且所有接受調(diào)查的患者均有知情權(quán)，所有患者均分別行TCT與HR-HPV檢查。對陽性結(jié)果或臨床癥狀高度可疑的患者行陰道鏡活檢，經(jīng)組織學(xué)病理診斷篩選宮頸上皮內(nèi)瘤變91例，將其分為3個實驗組，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級34例；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級25例；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級32例。另選取同期在我院因子宮良性病變行手術(shù)切除的非宮頸病變患者的子宮頸脫落細胞30例為對照組。

1.2 方法

1.2.1 TCT、HPV-NDA標(biāo)本采集及檢查方法

（1）TCT檢查。充分暴露宮頸，使用TCT細胞采集毛刷取樣器緩慢的深插入宮頸的通道內(nèi)，以確保前端采樣器可以完全采集到宮頸中老化脫落的上皮細胞，將采樣器沿著同一時針方向采樣3～6周，在采樣過程中禁忌來回左右搖動采樣器，然后將采集之后的刷頭采集器緩慢的推進還有液基細胞夜的小瓶的低端。當(dāng)標(biāo)本采集完畢，使用離心法將其制作成薄片細胞涂片，病理科的醫(yī)師通過對細胞的分析研究，采取TBS分類的方法對其進行分級。（2）HPV檢查。使用專項的采樣刷緩慢的進入宮頸口，在其內(nèi)部輕旋轉(zhuǎn)3～6周，禁止使用不同向或者左右刷的方法，然后把采樣器放入特定的小瓶內(nèi)進行保存 。而后使用PCR技術(shù)檢測14種高危HPV，分別為HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68。其中任意一種類型的HPV結(jié)果陽性，即判定為HPV陽性。

1.2.2 陰道鏡檢查

對TCT或（和）HPV呈陽性的患者或臨床癥狀高度可疑的患者采取陰道鏡檢查的措施，通過陰道鏡下的觀察，將可能存在問題的部位取活檢，而后通過活體檢查得出病例報告來進一步確診。

1.3 評定標(biāo)準

（1）P16存在于細胞核或者細胞質(zhì)之中，如果其呈現(xiàn)黃色或者棕黃色，可以斷定為陽性，通過對其占比可以劃分為四種級別，當(dāng)其占據(jù)境內(nèi)細胞總數(shù)的0%～5%為（-）；5%～25%為（+）；26%～75%為（++）；＞75%為（+++）[3]。

（2）Ki67通常在細胞核內(nèi)進行表達，當(dāng)細胞核呈現(xiàn)棕黃色的時候，可判定其為陽性，選擇具有代表性質(zhì)的1000個視野細胞，通過著色鱗狀上皮細胞占比可以評判一下幾個級別：＜5%（-）；5%-25%(+)；＞25%而≤50%(++)；＞ 50%(+++)[4]。

（3）CK14的陽性表達部位為細胞質(zhì)。染色的評分標(biāo)準：細胞細胞數(shù)＜5%為0分，6%～25%為1分，26% ～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；染色不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。評定結(jié)果由陽性率和染色強度積分相加而得，1～2分計為“+”，3～4 分計為“++”，5 ～ 7 分計為“+++”[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，計數(shù)資料以例數(shù)（n）、百分數(shù)（%）表示，采用x2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCT及HR-HPV篩查結(jié)果

TCT檢查結(jié)果根據(jù)TBS分類法標(biāo)準診斷：陰性 未見上皮內(nèi)細胞病變（NILM）51例；陽性 意義不明的非典型鱗狀細胞（ASC-US）25例2.1%，低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變（LSIL）9例0.9%，高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變（HSIL）5例0.7%。陽性篩查率為42.86%（39/91）。HR-HPV檢查，CIN1～3級各組間陽性患者分別為29、24、30例，陽性篩查率為91.21%；陰性患者分別為5、1、2例。

2.2 P16、Ki67、CK14在各組中表達結(jié)果

由表1可見，P16、Ki67、CK14在實驗組陽性表達率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。P16、Ki67、CK14在實驗組各組中陽性表達率組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 P16、Ki67、CK14聯(lián)合檢測在各組中表達結(jié)果

3 展 望

根據(jù)統(tǒng)計的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)每年我國因?qū)m頸癌而喪失的生命在呈現(xiàn)不斷上升的趨勢，這就需要我們不斷的去研究更高效的篩查方法。在CIN向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變過程中，精確診斷對患者及時有效治療、阻斷向?qū)m頸癌發(fā)展進程、改善療效等方便尤為重要。但目前關(guān)于CIN的診斷方法仍存在一定不足，缺少靈敏度、準確度、特異度均較高的診斷指標(biāo)[6]。如若僅僅使用TCT檢查，并不能萬全保證機體的正常，可能會有少部分假性的宮頸癌被忽略掉。HPV在檢測的敏感度比TCT高，但特異性較低，因而易增加假陽性。因此將TCT和HPV聯(lián)合檢查可以有效提高CIN早期診斷的檢出率和準確率。

本研究結(jié)果中P16在觀察組和對照組表達陽性率有明顯差別，且在CIN患者的中病情越重陽性表達率越高，因此推測P16表達情況與其病情嚴重程度存在正相關(guān)關(guān)系，可將其作為患者臨床分級的輔助指標(biāo)。 Ki67主要功能與細胞合成代謝有關(guān)，可以表示細胞的增殖活躍程度。本研究中，Ki67在觀察組中幾乎不表達，在CIN中陽性表達率顯著升高，且隨病變級別升高表達增加，組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示Ki67表達與CIN患者病理分級存在正相關(guān)性。CK14廣泛存在于上皮組織細胞中，其通常被認為與上皮源性腫瘤有著密切的關(guān)系，通過對機體的CK14細胞的測定研究分析，對今后人們認識癌細胞的產(chǎn)生、發(fā)作、增值，以及對于腫瘤細胞的擴散、治療、預(yù)防都有這非常重要的實用價值。

綜上所述，本研究所取標(biāo)本為患者宮頸脫落細胞，取材簡單易行，為無創(chuàng)檢查。P16、Ki67、CK14作為生物學(xué)標(biāo)志物，幫助檢出真正的病變細胞，且不依賴于形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果，因此采用本方法具有對患者創(chuàng)傷小、恢復(fù)快、并且操作簡單、效率較高等優(yōu)點，為今后早期的預(yù)防和發(fā)現(xiàn)宮頸癌體提供了一種新的方向。本方法還應(yīng)當(dāng)多應(yīng)用與臨床實踐，通過實際的操作將其所具有的優(yōu)點進一步擴大化，同時采用此方法可以避免因醫(yī)師的錯誤診斷而使得患者遺失了最佳的治療時機，減少了治療過程中存在的的潛在威脅。

參考文獻

[1] Jemal A,Simard E P,Dorell C,et al.Annual Report to the Nation on the Status of Cancer,1975-2009,featuring the burden and trends in human papillomavirus(HPV)-associated cancers and HPV vaccination coverage levels.[J].Journal of the National Cancer Institute,2013,105(3)：175-201.

[2] Santesso N,Mustafa R A,Schünemann H J,et al.World Health Organization Guidelines for treatment of cervical intraepithelial neoplasia 2-3 and screen-and-treat strategies to prevent cervical cancer[J].International Journal of Gynecology & Obstetri cs,2015,132(3)：252-258.

[3] 李 萱,劉穎群,方兆武.P16、Ki67和cyclinD1在宮頸癌中的表達及TCT與HPV-DNA檢查在宮頸癌早期診斷中的研究[J].中國婦幼保健,2016,31(4)：829-831.

[4] 韓全貴,馬婷婷,馮小莉,等.宮頸液基薄層細胞學(xué)檢查3251例結(jié)果分析[J].山西醫(yī)藥雜志,2013,42(11)：668-669.

[5] 肖艷景,張全武,婁 欣,等.CK10、CK14、CK17、P16在宮頸不成熟鱗狀化生及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達[J].醫(yī)藥論壇雜志,2010(22)：132-134.

[6] 雷 明.P16、Ki67細胞學(xué)檢測在宮頸上皮內(nèi)瘤變分級診斷中的應(yīng)用[D].吉林大學(xué),2016.