廖桂周

（廣東省汕頭市潮陽區(qū)大峰醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 汕頭515154）

HPV在鼻息肉的表達(dá)水平及其臨床意義

廖桂周

（廣東省汕頭市潮陽區(qū)大峰醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 汕頭515154）

目的 探討HPV在鼻息肉的表達(dá)水平及其臨床意義。方法 選取210例鼻息肉石蠟包埋組織標(biāo)本作為鼻息肉組，并采用GP5＋／6＋PCR通用引物進(jìn)行HPV分型，另選20例正常鼻腔黏膜組織作為對(duì)照組。結(jié)果 鼻息肉組的HPV總陽性率為40.95% （86／210），顯著高于對(duì)照組的0.00% （0／20），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。HPV病毒分型以HPV11亞型為主。鼻息肉患者中，不同性別、年齡及其高、低危亞型分布的感染率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。結(jié)論 鼻息肉的發(fā)病與HPV感染密切相關(guān)。HPV高、低危亞型均可感染致病，但以低危亞型 （HPV11亞型）為主，這對(duì)臨床治療鼻息肉及相關(guān)疫苗的研制開發(fā)有一定意義。

鼻息肉；HPV感染；臨床意義

鼻息肉是常見的鼻部疾病，臨床特征是以高度水腫的鼻黏膜在鼻道形成的單發(fā)或多發(fā)的息肉的常見疾病群，在普通人群中約有1%～4%的人患有鼻息肉，其具有較高的發(fā)病率和復(fù)發(fā)率，但對(duì)其發(fā)病和復(fù)發(fā)的確切原因存在爭(zhēng)議，目前，感染和過敏因素是較為認(rèn)可的病因［1］， 而主要因素則是感染［2］。 但過去的多數(shù)報(bào)道主要集中在細(xì)菌性感染，而對(duì)病毒性感染鮮有報(bào)道。臨床上有部分鼻息肉患者經(jīng)長(zhǎng)期抗生素、鼻噴激素及多次手術(shù)治療仍無法治愈，易反復(fù)，其發(fā)病原因尚不明確。本研究采用GP5＋／6＋PCR法對(duì)210例鼻息肉石蠟包埋標(biāo)本組織進(jìn)行HPV檢測(cè)及分型，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究中210例鼻息肉石蠟包埋組織標(biāo)本來自我院2014年5月至2016年2月經(jīng)病理確診且臨床資料完整的鼻息肉患者，作為鼻息肉組。其中男139例，女 71例；平均年齡36.51歲；平均病程8.13年；1次性手術(shù)36例，≥2次手術(shù)10例。另選取20例健康志愿者的鼻腔黏膜組織作為對(duì)照組，其中男13例，女7例；平均年齡44.62歲。所有對(duì)象均對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑 PCR擴(kuò)增儀，PCR試劑盒，DNA提取試劑盒，HPV核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑。

1.2.2 檢測(cè)方法 ①石蠟樣本DNA提?。簩⑹灅颖居谝旱醒心ズ?，采用QIAGEN BLOOD KIT試劑盒，按照試劑盒說明書相應(yīng)的步驟來提取石蠟包埋組織中的DNA。②新鮮冷凍組織樣本DNA提?。菏覝叵氯?.1 g的冷凍組織于1.5 mL EP管中解凍，然后用獨(dú)立剪刀將組織剪碎，避免樣品間的交叉污染，將0.5 mL磷酸鹽緩沖液加入EP管中，經(jīng)振蕩、離心對(duì)細(xì)胞進(jìn)行沉淀。然后按照DNA試劑盒說明書的相應(yīng)步驟提取DNA。③GP5＋／6+PCR擴(kuò)增：按照樣本數(shù)量，分別取PCR premix、Taq酶23.25 μL、0.75 μL混勻，按編號(hào)分別取1 μL提取DNA加入PCR混合液中，總反應(yīng)液體積25 μL。將反應(yīng)液置于預(yù)先設(shè)定好PCR反應(yīng)程序的PCR擴(kuò)增儀中進(jìn)行擴(kuò)增，同時(shí)將蒸餾水作為陰性對(duì)照，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。

1.3 HPV分型檢測(cè)采用一對(duì)通用引物 GP5＋／6＋PCR實(shí)驗(yàn)以確認(rèn)HPV-DNA全長(zhǎng)是否存在，HPV陽性結(jié)果者的具體型別將用2個(gè)混合HPV寡聚探針做酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)來確定，本研究檢測(cè)HPV37亞型分別為 HPV6、11、16、18、26、31、33、34、35、 39、 40、 42、 43、 44、 45、 51、 52、 53、 54、 55、 56、57、 58、 59、 61、 66、 67、 68、 69、 70、 71、 72、 73、 82、83、84、cp8304。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HPV陽性表達(dá)情況比較鼻息肉組210例鼻息肉石蠟包埋組織標(biāo)本中有86例感染HPV，陽性率為40.95%；對(duì)照組20例標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果均為陰性；兩組的陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.08，P＜0.05）。

2.2 鼻息肉中HPV亞型分布情況本研究檢測(cè)HPV37亞型，其中 HPV16、18、 31、33、35、 39、45、51、52、53、56、58、59、66、68亞型為HPV高危型，其他亞型為低危型。鼻息肉組感染HPV的86例標(biāo)本中檢出HPV病毒113株，有10個(gè)HPV亞型分布，其中 4個(gè)低危亞型檢出 HPV病毒 60株（53.10%），主要以HPV11亞型為主，占42.48%；6個(gè)高危型檢出53株 （46.90%），主要以HPV52和HPV58亞型為主，分別占11.50%和15.04%。

2.3 鼻息肉組性別與HPV感染及其高、低危亞型的關(guān)系鼻息肉組210例患者中，男139例，陽性率為37.41% （52／139）；女71例，陽性率為47.89% （34／71）。52例男性HPV陽性患者中，高危亞型24例，低危亞型28例；34例女性HPV陽性患者中，高危亞型20例，低危亞型例14例；差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.32，P＞0.05）。

2.4 鼻息肉組年齡與HPV感染的關(guān)系本研究按患者年齡間隔10年為一組，分成5組：20～29歲，30～39歲，40～49歲，50～59歲，60～69歲。HPV陽性率分別為42.42% （14／33）、40.00% （10／25）、48.72% （19／39）、39.34% （24／61），36.54%（19／52），年齡與HPV感染無顯著性關(guān)系。見圖1。

圖1 年齡與HPV陽性率的關(guān)系

3 討論

鼻息肉與HPV關(guān)系的研究在國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道，但在現(xiàn)有的報(bào)道［3-4］中，因其標(biāo)本病例數(shù)相對(duì)較少且檢測(cè)方法不同，故檢出率為0.0%～92.3%。目前，鼻息肉的發(fā)病與HPV感染是否有關(guān)系尚無定論。周玉英等［3］應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)13例復(fù)發(fā)鼻息肉患者標(biāo)本，其HPV陽性率為 92.3%；Ioannidis等［4］在鼻息肉病皰疹病毒和人類乳頭狀瘤病毒的研究中對(duì)91例標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，HPV陽性率為14.29%。本研究對(duì)鼻息肉組210例組織標(biāo)本進(jìn)行HPV檢測(cè)，陽性率為40.95% （86／210），對(duì)照組的組織標(biāo)本均為陰性，可認(rèn)為鼻息肉與HPV感染密切相關(guān)。且本研究采用GP5＋／6＋PCR法擴(kuò)增DNA產(chǎn)物構(gòu)建的金磁微粒層析裝置進(jìn)行檢測(cè)，以目視化方式讀取結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果更清晰。

目前，已發(fā)現(xiàn)的HPV亞型有120余種，而國(guó)內(nèi)有關(guān)鼻息肉中HPV亞型的相關(guān)報(bào)道［3］以低危亞型HPV5、HPV6為主。本研究鼻息肉感染以低危亞型HPV11為主，檢出48株，占總檢出株數(shù)的42.48%；而高危亞型HPV52、HPV58次之，分別檢出13、17株，分別占總檢出株數(shù)的11.50%、15.04%，該結(jié)果符合鼻息肉為黏膜水腫性良性病變，但與以往研究結(jié)果存在差異，這可能與HPV感染存在地域性差異有關(guān)。相關(guān)報(bào)道［5］稱女性HPV感染隨年齡的增長(zhǎng)呈 “U”型分布或具有降低的趨勢(shì)；也有研究［6］表明未發(fā)現(xiàn)女性HPV感染與年齡存在相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，年齡與HPV感染未見顯著相關(guān)性。有研究［7-9］表明，鼻內(nèi)翻性乳頭瘤向不典型增生進(jìn)一步發(fā)展與HPV高危亞型感染密切相關(guān)，但本研究結(jié)果表明鼻息肉復(fù)發(fā)與HPV感染高、低危亞型無顯著相關(guān)性。

綜上所述，鼻息肉組織中的HPV陽性率較高，提示鼻息肉與HPV感染的關(guān)系較正常鼻腔黏膜更為密切，這可能因?yàn)楸乔火つさ挚沽档透赘腥綡PV病毒，對(duì)臨床治療鼻息肉、預(yù)防復(fù)發(fā)及相關(guān)疫苗的研制開發(fā)有一定意義。

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（責(zé)任編輯：何華）

Expression Level of HPV in Nasal Polypsxand Its Clinical Significance

LIAO Guizhou
(Clinical Laboratory,Dafeng Hospital of Chaoyang District,Shantou 515154,China)

Objective To explore the expression level of HPV in nasal polyps and its clinical significance.Methods 210 cases of paraffin-embedded tissue specimens of nasal polyps were selected as nasal polyps group and given HPV typing by GP5+/6+universal PCR primers.Another 20 cases of normal nasal mucosa tissue were selected as control group.Results The total positive rate of HPV of nasal polyps group was 40.95%(86/210),significantly higher than 0.00%(0/20)of control group,with statistical difference(P＜0.05).HPV virus was mainly HPV11 subtype.No statistical difference was found in the infection rates among different genders,age and distribution of high or low-risk subtypes in nasal polyps(P＞0.05).Conclusions The pathogenesis of nasal polyps is closely related to HPV infection.Both high and low-risk subtypes of HPV can be infected,but low-risk subtype(HPV11 subtype)is main,which has a certain significance for the clinical treatment of nasal polyps and development of relative vaccine.

Nasal polyps;HPV infection;Clinical significance

R765.25

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.03.0383

2016-11-06

廖桂周 （1978-），男，廣東汕頭人，本科學(xué)歷，主管技師，研究方向：臨床免疫學(xué)。