李月秋，竇海洋，吳錦濤，齊暢，邸科前，韓媛媛，韓艷梅，*

（1.河北大學(xué) 醫(yī)學(xué)綜合實驗中心，河北保定071000；2.河北大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河北保定071000；3.河北大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)與衛(wèi)生事業(yè)管理系，河北保定071000）

堿解增敏同步熒光測豬肌肉及腎中頭孢噻呋殘留

李月秋1，3，竇海洋2，吳錦濤3，齊暢3，邸科前1，韓媛媛1，韓艷梅1，*

（1.河北大學(xué) 醫(yī)學(xué)綜合實驗中心，河北保定071000；2.河北大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河北保定071000；3.河北大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)與衛(wèi)生事業(yè)管理系，河北保定071000）

基于頭孢噻呋堿性條件降解產(chǎn)物熒光強度更強，吐溫－80能提高其降解產(chǎn)物熒光強度，建立測定豬肌肉及腎中頭孢噻呋殘留的同步熒光分光光度法。優(yōu)化了降解條件（加熱時間、氫氧化鈉濃度與體積），討論了緩沖溶液、表面活性劑種類及用量對降解產(chǎn)物熒光強度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：4 mL 2.0 mol/L氫氧化鈉溶液，加熱150 min，加3 mL檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液（pH 4.2）和6 mL吐溫－80溶液（0.023 3 mol/L），在1 cm熒光比色皿中，于發(fā)射波長λem 415 nm～550 nm內(nèi)，△λ為85 nm條件下掃描測定，440.0 nm處讀出熒光強度。應(yīng)用加乙腈沉淀蛋白的方法對動物性食品進行預(yù)處理。在0.625 μg/mL～62.5 μg/mL范圍內(nèi)，頭孢噻呋濃度與降解產(chǎn)物熒光強度線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 3，檢出限為270 μg/kg。加標(biāo)水平在144 μg/kg～2 160 μg/kg范圍內(nèi)，回收率為85.09%～87.83%，RSD為0.93%～1.54%（n=3）。建立的新方法可用于動物食品中頭孢噻呋殘留量檢測。

頭孢噻呋；同步熒光法；吐溫－80；堿性降解；豬肌肉及腎

隨著全球化、工業(yè)化高速發(fā)展，人們生活水平不斷提高，日益彰顯的食品安全問題也得到了世界各國的廣泛關(guān)注。在我國，食品安全現(xiàn)狀不容樂觀，獸藥殘留是其中一個重要方面。

頭孢噻呋（Ceftiofur）又名賽得福，是第3代頭孢菌素類抗生素[1]，具有廣譜高效殺菌作用?，F(xiàn)在臨床上常用于肉牛、奶牛、馬、豬、綿羊、山羊的呼吸道及1日齡肉雞細菌感染的治療。由于其經(jīng)過腎臟排出，具有腎毒性，殘留在食品中會對人體健康造成損害。

近年來，國內(nèi)外不斷探索頭孢噻呋殘留的檢測方法。農(nóng)業(yè)部公布的動物性食品中頭孢噻呋殘留的檢測方法[2]即為高效液相色譜法（HPLC），另有牛奶[3]、牛組織中[4]頭孢噻呋殘留量HPLC檢測方法的報道。液相色譜法重現(xiàn)性好，易于推廣，但存在靈敏度不如聯(lián)用技術(shù)，有機溶劑用量多，前處理過程繁瑣等缺點。

其他方法還有超高效液相色譜法（UPLC）[5]、電分析法[6]、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[7-9]、免疫分析法（IAS）[10-12]、紫外分光光度法（UV）[13-14]、生物傳感器法[15-16]等。UPLC法存在泵的使用壽命縮短，儀器部件容易出現(xiàn)問題等弊端。電分析方法具有消除樣品中蛋白質(zhì)干擾的優(yōu)勢，但是應(yīng)用不是十分普遍。聯(lián)用技術(shù)靈敏度有了極大提高，特異性更佳，但該技術(shù)儀器昂貴，樣品處理過程復(fù)雜，對分析人員技術(shù)水平要求較高，不便應(yīng)用于日常的跟蹤檢測。IAS法具有諸多優(yōu)點，但美中不足的是假陽性率較高。生物傳感器法具有攜帶方便、分析速度快、樣品前處理簡單等特點，能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測，但存在穩(wěn)定性差的缺點。

熒光分析法，尤其是同步熒光法[17]具有譜圖簡化、峰形改善、選擇性高、光散射干擾少等特點。恒（固定）波長同步熒光法在日常檢測中最為常用，有利于進一步提高檢測靈敏度，減少組分干擾。

有些有機物本身無熒光或熒光強度較弱，可通過一定條件水解使其轉(zhuǎn)換成[18]有熒光的物質(zhì)，進一步應(yīng)用表面活性劑可提高熒光物質(zhì)的熒光強度[19]。目前，國內(nèi)外鮮見在一定條件下水解頭孢噻呋，采用增敏方法提高水解產(chǎn)物熒光強度，并應(yīng)用同步熒光法檢測動物性食品中頭孢噻呋殘留量的報道。本研究首先篩選頭孢噻呋降解反應(yīng)條件，以獲得熒光強度更高的水解產(chǎn)物。隨后，應(yīng)用表面活性劑對降解產(chǎn)物增敏，采用同步熒光法對動物性食品中頭孢噻呋殘留量進行測定，使其檢測限能滿足最大殘留限量要求，建立一種能用于日常跟蹤監(jiān)測的方法，為更多種類藥物殘留的檢測研究開拓新思路，指出新的研究方向。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

RF-5301PC熒光分光光度計、AUW120D電子天平：日本島津；Milli-Q Advantage A10超純化水機：法國默克密里博公司；FE20 PH計：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；SK-1快速混勻器：中國常州國華電器有限公司；TGL-20B高速臺式離心機：中國上海安亭科技儀器廠；RQ5200E超聲波清洗器：中國昆山市超聲儀器有限公司；YQD-37A氮氣吹干儀：中國雷爾達儀表有限公司；HDM-3000B電熱恒溫水浴鍋：中國江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司。

1.0 mg/mL頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取頭孢噻呋對照品（中國藥品生物制品檢定所）0.1 g溶于水中，定容至100 mL棕色容量瓶中，并置于冰箱中避光冷藏保存。

硫酸、鹽酸（分析純）：北京化工廠；氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、醋酸、醋酸鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉（分析純）：天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；十二烷基硫酸鈉（SDS）、聚乙二醇辛基苯基醚（Triton-X）、十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、十六烷基三甲基氯化銨（CTAC）、氯化十六烷基吡啶（CPC）、吐溫-20、吐溫-80（分析純）：上海麥克林生化科技有限公司；試驗用水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 豬肌肉、豬腎樣品預(yù)處理

稱取5.0 g樣品，將其切碎勻漿，置于10 mL離心管中，加入3 mL乙腈渦旋混勻1 min，超聲5 min，5 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中；再向原離心管沉淀內(nèi)加入3 mL乙腈，渦旋混勻1 min，超聲5 min，5 000 r/min離心5 min，上清液合并至10 mL離心管中，氮吹濃縮至1 mL。移取至10 mL試管內(nèi)作為待測樣品。

1.2.2 樣品測定

將處理好的樣品置于具塞比色管中，在各管中依次加入4 mL 2.0 mol/L的NaOH溶液，沸水浴中加熱150 min后取出，冷卻至室溫后，加入3 mL檸檬酸鈉－檸檬酸緩沖液（pH 4.2）和6 mL吐溫－80溶液，渦旋混勻1 min，將樣品溶液分別置于1 cm熒光比色皿中，在發(fā)射波長λem 415 nm～550 nm范圍內(nèi)，發(fā)射波長和激發(fā)波長的波長差為85 nm（△λ=85 nm）條件下分別掃描樣品，在440 nm處讀出熒光強度。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

配置一系列不同濃度頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.2.2試驗方法測定，以頭孢噻呋濃度為橫坐標(biāo)（x），降解產(chǎn)物熒光強度為縱坐標(biāo)（y），作圖建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=6.772 9x+69.119（r=0.999 3）。結(jié)果表明：在0.625 μg/mL～62.5 μg/mL范圍內(nèi)，頭孢噻呋濃度與降解產(chǎn)物熒光強度呈良好線性關(guān)系。

根據(jù)IUPAC（3δ）[19]規(guī)定，由公式：D=3×δ/k，求得檢測限為270 μg/kg。

式中：D為檢出限；k為工作曲線斜率；δ為11份空白溶液熒光強度標(biāo)準(zhǔn)差。

1.2.4 精密度和回收率

取市售豬肌肉樣品9份，每份5 g，按其濃度80%、100%、120%分別加入頭孢噻呋對照品各3份，按照1.2.1方法處理，按照1.2.2的試驗條件測定，測定平均回收率和精密度。

1.2.5 穩(wěn)定性

將按照1.2.1及1.2.2方法處理好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液在避光條件下，分別在0、0.5、1、2、4、8、12、24 h內(nèi)進行測定。樣品熒光強度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.907 6%。結(jié)果表明，頭孢噻呋酸解產(chǎn)物在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2 結(jié)果與分析

2.1 同步熒光分光光度法條件選擇

2.1.1 降解介質(zhì)選擇

探討不同介質(zhì)中頭孢噻呋降解后，降解產(chǎn)物熒光強度大小。結(jié)果見圖1。

圖1 不同介質(zhì)中頭孢噻呋降解產(chǎn)物熒光強度Fig.1 Fluorescence intensities of ceftiofur’s degradation product in different degradation medium

試驗表明：頭孢噻呋在水、鹽酸、硫酸、氫氧化鈉溶液中加熱，均有熒光物質(zhì)產(chǎn)生，其中在氫氧化鈉溶液中降解產(chǎn)物熒光強度顯著高于其他介質(zhì)降解產(chǎn)物熒光強度，因此本試驗選用堿性水解產(chǎn)物做為測定對象。

2.1.2 波長差（△λ）選擇

將兩波長差（Δ λ）保持為固定值，分別在Δλ為70、75、80、85、90、100、110 nm條件下測定頭孢噻呋堿性水解產(chǎn)物熒光強度。測定結(jié)果顯示，隨著波長差△λ增加，頭孢噻呋堿性水解產(chǎn)物熒光強度呈先增長后降低趨勢，在△λ=85 nm處，熒光強度最大。故以△λ= 85 nm開展后續(xù)研究。熒光與同步熒光的比較見圖2。

圖2 熒光與同步熒光光譜Fig.2 Fluorescence and synchronous fluorescence spectrum

由圖2可知，同步熒光掃描后峰形變窄，能有效減少干擾，適當(dāng)提高靈敏度。

2.1.3 加熱時長選擇

取頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)溶液置具塞比色管中，依已建立方法，考察不同加熱時間（60、90、120、150、180 min）下，降解產(chǎn)物熒光強度。結(jié)果表明：隨反應(yīng)時間增加，降解產(chǎn)物熒光強度增強；當(dāng)反應(yīng)時間大于150 min時，頭孢噻呋堿性介質(zhì)中降解產(chǎn)物熒光強度達到平衡，可認為頭孢噻呋已完全降解。綜上，選加熱時間為150 min。

2.1.4 NaOH濃度選擇

取頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)溶液置于具塞比色管中，依照已建立的試驗方法，考察NaOH濃度（1、2、3、4、5、6 mol/L）對降解產(chǎn)物熒光強度影響。結(jié)果見圖3。

結(jié)果表明：隨NaOH溶液濃度增加，體系熒光強度不斷增強，當(dāng)NaOH溶液濃度為2 mol/L時，體系熒光強度達到最大，所以試驗選擇加入2 mol/L NaOH溶液。

2.1.5 NaOH加入量選擇

取頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)溶液置于具塞比色管中，依照已建立試驗方法，考察2 mol/L NaOH體積（1、2、3、4、5、6、7 mL）對降解產(chǎn)物熒光強度影響。NaOH加入量對頭孢噻呋降解產(chǎn)物熒光強度影響見圖3。

圖3 NaOH加入量對頭孢噻呋降解產(chǎn)物熒光強度影響Fig.3 Effect of the volume of NaOH on fluorescence intensities of ceftiofur’s degradation product

結(jié)果如圖3所示：隨NaOH溶液用量增加，體系熒光強度不斷增強，當(dāng)NaOH溶液加入量達到4 mL時體系熒光強度最大，隨后再加入則呈下降趨勢，所以試驗選擇加入4 mL 2.0 mol/L NaOH溶液。

2.1.6 緩沖液選擇

2.1.6.1 緩沖液pH值選擇

按照已建立方法，考察了磷酸氫二鈉-檸檬酸、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液不同pH值（2.2、3.3、4.2、5.2、6.2、7.0、8.0、9.16、10.14、10.83）對降解產(chǎn)物熒光強度的影響。結(jié)果表明，隨著所用緩沖對pH值增大，體系熒光強度不斷增強，當(dāng)pH值為4.2時熒光強度最大；當(dāng)pH值均為4.2時，檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖對對熒光強度增強的效果明顯好于碳酸氫二鈉-檸檬酸鈉。因此，試驗選擇加入檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液將pH值調(diào)到4.2。

2.1.6.2 緩沖液加入量選擇

考察了pH值為4.2的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液不同加入量（1、3、5mL）對降解產(chǎn)物熒光強度影響。結(jié)果表明，隨著所用緩沖液體積增大熒光強度有先增大后減小趨勢，當(dāng)體積為3mL時熒光強度最大。所以，試驗選擇加入3 mL pH值為4.2的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。

2.1.7 表面活性劑選擇

表面活性劑濃度達到臨界膠束濃度（CMC）以上時，能發(fā)生聚合而形成膠束，形狀一般為球形，將熒光物質(zhì)屏蔽其中以使熒光增敏穩(wěn)定，發(fā)揮提高熒光強度的作用。試驗考察了不同表面活性劑（SDS、CPC、Triton100、CTAB、CTAC、吐溫-20、吐溫-80）對頭孢噻呋降解產(chǎn)物熒光強度的影響。未增敏及吐溫-80增敏的頭孢噻呋酸解產(chǎn)物同步熒光掃描情況見圖4。

結(jié)果表明：向反應(yīng)體系中加入表面活性劑可增大熒光強度；試驗中發(fā)現(xiàn)吐溫-80、CTAB、SDS對頭孢噻呋降解產(chǎn)物熒光強度的提高較為明顯，且吐溫-80稍高。故選擇吐溫-80作為體系增敏劑。

2.1.8 吐溫-80加入量對熒光強度影響

圖4 未增敏及吐溫-80增敏的頭孢噻呋酸解產(chǎn)物同步熒光光譜圖Fig.4 Synchronous fluorescence Spectrum of ceftiofur’s degradation product in alkaline medium added Twain-80 and not

表面活性劑對熒光強度的增強作用與表面活性劑的濃度有關(guān)。因此，考察吐溫-80不同體積（2、4、6、8 mL）對頭孢噻呋降解產(chǎn)物增敏效果。結(jié)果顯示：當(dāng)吐溫-80加入量為6 mL時，頭孢噻呋堿性水解體系熒光強度達到最大值。所以試驗選用吐溫-80溶液的體積為6 mL。

綜上，選擇4 mL 2.0 mol/L氫氧化鈉溶液，加熱150 min，加3 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH 4.2）和6 mL吐溫-80溶液，在△λ為85 nm條件下采用同步熒光法對樣品進行測定。

2.2 樣品測定

2.2.1 樣品預(yù)處理條件選擇

稱取豬肌肉樣品5.0 g，將其切碎勻漿，置于10 mL離心管中，分別加入3 mL乙腈、三氯乙酸渦旋混勻1 min，超聲5min，分別在3000、5000、6 000、8 000r/min的轉(zhuǎn)速下離心各3、5、10、15、30 min。上清液轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中；再向原離心管沉淀內(nèi)加入3 mL乙腈、三氯乙酸，渦旋混勻1 min，超聲5 min分別在3 000、5 000、6 000、8 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心各3、5、10、15、30 min，上清液合并至10 mL離心管中，氮吹濃縮至1 mL。移取至10 mL試管內(nèi)作為待測樣品。豬腎樣品處理方法同上。結(jié)果表明：加入乙腈，轉(zhuǎn)速5 000 r/min，離心5 min時，并對沉淀再次離心沉淀，合并上清液，肌肉中的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)幾乎完全沉淀，不會對測定造成干擾，且回收率較好。

2.2.2 精密度和回收率

根據(jù)樣品實際測定值，按照1.2.4節(jié)中精密度和回收率的測定方法，平均回收率及精密度的結(jié)果見表1。

2.2.3 穩(wěn)定性

按照1.2.5方法進行穩(wěn)定性測定，樣品熒光強度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.907 6%。結(jié)果表明，頭孢噻呋堿解產(chǎn)物在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4 測定結(jié)果

按照1.2.1節(jié)中樣品預(yù)處理方法對樣品進行處理，按照1.2.2試驗條件對樣品進行測定，結(jié)果見表2。

表1 平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=3）Table 1 Average recovery and RDS（n=3）

表2 樣品測定結(jié)果Table 2 Results of sample determination

3 結(jié)論

本研究探索建立堿性條件下降解，吐溫-80增敏，豬肌肉及腎中頭孢噻呋殘留的同步熒光檢測方法。此法具有穩(wěn)定性好、精密度高、選擇性好、儀器設(shè)備簡單等特點，其檢出限低于歐盟、加拿大等發(fā)達國家規(guī)定的頭孢噻呋在動物性食品中的最大殘留限量（肌肉1 000 μg/kg，腎6 000 μg/kg）[20]。此法可做為動物性食品中頭孢噻呋殘留檢測的新方法，也可為動物性食品中獸藥殘留檢測研究拓展新思路。

[1] 李麗,李德福.復(fù)配頭孢噻呋可溶性粉的制備及質(zhì)量檢查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2010(21):141-143

[2]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部1025號公告-13-2008動物性食品中頭孢噻呋殘留檢測高效液相色譜法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008

[3] Eftichia G Karageorgou,Victoria F Samanidou,Ioannis N.Papadoyannis.Ultrasound-assisted matrix solid phase dispersive extraction for the simultaneous analysis of β-lactams(four penicillins and eight cephalosp-orins)in milk by high performance liquid chromatography with photodiode array detection[J].J Sep Sci,2012,35:2599-2607

[4] Palur K,Archakam S C,Lingasani N,et al.RP-HPLC method for the estimation of ceftiofur hydrochloride in bulk form[J].Journal of Pharmacy Research,2013,7(3):246-251

[5] 王煉,黎源倩,張禮春.超高效液相色譜同時測定奶粉和牛奶中β-內(nèi)酰胺、喹諾酮和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留[J].分析試驗室, 2011,30(6):23-27

[6]Antonio Marcos Jacques Barbosa,Tatiane Alfonso de Araujo,Magno Aparecido Goncalves Trindade,et al.A new inditect method based on square-wanve voltammetry for ceftiofur determination in bovine milk using an alkaline degradation product[J].Microchemical Journal,2011,98:297-302

[7] Mompelat S,Fourmond M P,Laurentie M,et al.Validation of a liquid chromatography-high resolution mass spectrometry method for the analysis of ceftiofur in poultry muscle,kidneys and plasma:A unique accuracy profile for each and every matrix[J].Journal of Chromatography A,2015,1407:119-129

[8] Jank L,Martins M T,Arsand J B,et al.High-throughput method for the determination of residues of β-lactam antibiotics in bovine milk by LC-MS/MS[J].Food Additives&Contaminants Part A Chemistry Analysis Control Exposure&Risk Assessment,2015,32(12):1992-2001

[9] Tina Van den Meersche,Els Van Pamela,Christof Van Pouckea,et al.Development,validation and applicatio-n of an ultra high performance liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method for the simulta-neous detection and quantification of five different classes of veterinary antibiotics in swine manure[J].Journal of Chromatography A,2016,1429:248-257

[10]Juan P,Guyue C,Lingli H,et al.Development of a direct ELISA based on carboxy terminal of penicillin-binding protein BlaR for the detection of β-lactam antibiotics in foods[J].Analytical&Bioanalytical Chemistry,2013,405(27):8925-8933

[11]Oruc Hasan H,Rumbeiha Wilson K,Ensley Steve,et al.Simultaneous Detection of Six Different Groups of Antimicrobial Drugs in Porcine Oral Fluids Using A Biochip Array-Based Immunoassay[J]. Kafkas Universitesi Veteriner Fakultesi Dergisi,2013,19(3):407-412

[12]Chen Y,Wang Y,Liu L,et al.A gold immunochromatographic assay for the rapid and simultaneous detect-ion of fifteen β-lactams[J]. Nanoscale,2015,7(39):445-453

[13]李振.紫外分光光度法測定注射用頭孢噻呋鈉的含量[J].光譜實驗室,2012(1):541-543

[14]程瑤,商軍,曹建東.紫外分光光度法快速測定鹽酸頭孢噻呋注射液的含量[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2011(5):10-11

[15]Valérie Gaudin,Celine Hedou,ChristopHe Soumet,et al.Evaluation and validation of biochip multi-array technology for the screening of six families of antibiotics in honey according to the European guideline for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines[J].Food Additives&Contaminants:Part A,2014,31(10): 1699-1711

[16]Gaudin V,Hedou C,Soumet,et al.Evaluation and validation of a multi-residue method based on biochip technology for the simultaneous screening of six families of antibiotics in muscle and aquaculture products[J].Food Addit Contam Part A Chem Anal Control Expo Risk Assess,2016,33(3):403-419

[17]許金鉤,王尊本.熒光分析法[M].3版.北京:科學(xué)出版社,2006: 317-318

[18]何文亮,羅濤,周璇,等.表面活性劑增敏熒光分光光度法測定牛奶中頭孢拉定[J].分析試驗室,2014,33(1):92-95

[19]趙燕燕,耿成光,白潔,等.膠束增敏同步熒光-雙波長法同時測定血漿中兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì) [J].河北大學(xué)學(xué)報 (自然科學(xué)版), 2010,30(3):264-270

[20]姜維,方曉明,唐毅鋒,等.液相色譜法對牛、豬肌肉和腎臟中頭孢噻呋殘留量的測定研究[J].分析測試學(xué)報,2008,27(2):178-180

Synchronous Fluorimetric Determination of Residue Ceftiofur in Pig Muscel and Kidney by Alkaline Degradation and Sensibilization

LI Yue－qiu1,3，DOU Hai－yang2，WU Jin－tao3，QI Chang3，DI Ke－qian1，HAN Yuan－yuan1，HAN Yan－mei1，*
（1.Center of Medical Comprehensive Experimental，Hebei University，Baoding 071000，Hebei，China；2.School of Medicine，Hebei University，Baoding 071000，Hebei，China；3.Preventive Medicine and Health Management，Hebei University，Baoding 071000，Hebei，China）

A new synchronous fluorimetric method was developed for the determination of trace ceftiofur in pig muscel and kidney，which was based on the stronger fluorescence intensity of ceftiofur′s degradation product in the alkaline condition and the fluorescence intensity was improved by Tween－80.The degradation conditions（such as heating time，the volume and concentration of sodium hydroxide）were optimized.The effect of types and amounts of surface active agent and buffer on the fluorescence intensity of degradation product was discussed.The results showed that the optimum conditions were 4 mL 2.0 mol/L sodium hydroxide，heating time of 150 min，the buffer of 3 mL citric acid－sodium citrate（pH 4.2）and 6 mL Tween－80 solution（0.023 3 mol/L）. The standard and sample solutions were added into 1cm fluorescence cuvette，Synchronous fluorescence spectrums were scanned from 415 nm to 550 nm，△λ was 85 nm and then the fluorescence intensities were read at 440 nm.The proteins in food sample were precipitaded by acetonitrile.The results showed that in the range of 0.625 μg/mL－62.5 μg/mL，the concentration of ceftiofur and the fluorescence intensity of its degradation product had a good linearity with the correlation coefficients of 0.999 3.The detection limit was 270 μg/kg.At spikedlevels of 144 μg/kg to 2 160 μg/kg，the sample recovery ranges from 85.09%to 87.83%，the relative standard deviation was 0.93%to1.54%（n=3）.The results demonstrated that the new method proposed in this work could be used for the determination of residue ceftiofur in animal food.

ceftiofur；synchronous fluorescence spectrophotometry；Tween-80；alkaline degradation；pig muscel and kidney

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.10.027

2016-09-03

河北省省級科技計劃自籌經(jīng)費項目（15275511）；河北省自然科學(xué)青年基金（B2016201002）；河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究青年基金項目（QN201608）；河北省2016醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題（20160048）；保定市科學(xué)研究與發(fā)展計劃項目（15ZG049）；2016年國家級創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201610075017）

李月秋（1977—），女（漢），講師，碩士，研究方向：食品有害污染物殘留分析。

*通信作者：韓艷梅（1964—），女（漢），教授，碩士，研究方向：生理與病理生理。