李彥飛，范東升，黃華樹，張小軍*

（1.中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052；2.中國(guó)農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會(huì)，北京 100723）

20%噻呋·吡唑酯懸浮劑高效液相色譜分析

李彥飛1，范東升2，黃華樹2，張小軍1*

（1.中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052；2.中國(guó)農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會(huì)，北京 100723）

采用高效液相色譜法，以甲醇＋水為流動(dòng)相，在235 nm波長(zhǎng)下對(duì)20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中有效成分進(jìn)行定量分析。吡唑醚菌酯和噻呋酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.045和0.030，變異系數(shù)分別為0.45%和0.30%，平均回收率均為99.7%，線性相關(guān)系數(shù)分別為0.999 9和1.000 0。

吡唑醚菌酯；噻呋酰胺；高效液相色譜；分析

Abstract:A method for separation and quantitative analysis of thifluzamide+pyraclostrobin 20%SC by HPLC was established,using methanol and water as mobile phase,with UV wavelength detector at 235 nm.The results showed that the standard deviations of pyraclostrobin and thifluzamide were 0.045 and 0.030,the coefficients of variation were 0.45%and 0.30%,the average recoveries were both 99.7%,the linear correlation coefficients were 0.999 9 and 1.000 0.

Key words:pyraclostrobin;thifluzamide;HPLC;analysis

吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是巴斯夫公司于2002年上市的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑。其殺菌譜廣，對(duì)由子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌以及卵菌引起的病害均有效。但與其他甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑品種一樣，吡唑醚菌酯作用位點(diǎn)單一，屬于高抗性風(fēng)險(xiǎn)品種[1]。噻呋酰胺（thifluzamide）為琥珀酸脫氫酶抑制劑（SDHI）。其具有內(nèi)吸性和傳導(dǎo)性，對(duì)絲核菌屬、柄銹菌屬、黑粉菌屬、腥黑粉菌屬等引起的病害有效，對(duì)紋枯病、立枯病有特效[2]。吡唑醚菌酯和噻呋酰胺二者復(fù)配，擴(kuò)大了殺菌譜，能有效防治炭疽病、紅點(diǎn)病、黑星病、銹病、白絹病等眾多病害。目前尚未見吡唑醚菌酯、噻呋酰胺復(fù)配懸浮劑的高效液相色譜分析方法報(bào)道[3-5]。

本文采用高效液相色譜，對(duì)20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中有效成分進(jìn)行定性和定量分析。方法簡(jiǎn)便、快速，靈敏度高，分離效果好，可以用于企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量檢測(cè)。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1220 Infinity液相色譜儀（具紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器）、Agilent1220工作站，美國(guó)安捷倫公司；TU-1901紫外分光光度儀。

甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、新蒸2次蒸餾水；吡唑醚菌酯標(biāo)樣（≥98%）、噻呋酰胺標(biāo)樣（≥98%），北京勤誠(chéng)亦信科技開發(fā)有限公司提供；20%噻呋·吡唑酯懸浮劑（10%噻呋酰胺＋10%吡唑醚菌酯），中農(nóng)立華生物科技股份有限公司制。

1.2 色譜條件

ODS-Cl8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm；流動(dòng)相：甲醇＋水（體積比70∶30）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：5.0 μL；柱溫：30℃。在該色譜操作條件下，噻呋酰胺的保留時(shí)間約為5.2 min，吡唑醚菌酯的保留時(shí)間約為6.8 min。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取0.05 g吡唑醚菌酯標(biāo)樣、0.05 g噻呋酰胺標(biāo)樣，均精確至0.000 2 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，在超聲波清洗器上超聲30 min后脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，用0.2 μm濾膜過(guò)濾，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取0.5 g 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑試樣，精確至0.000 2 g，置于100 mL容量瓶中配制試樣溶液。配制方法同標(biāo)樣溶液的配制。

1.4 測(cè)定

在1.2色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值。待相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.2%時(shí)，按一定順序進(jìn)樣測(cè)定。標(biāo)樣和試樣的高效液相色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 吡唑醚菌酯及噻呋酰胺標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑高效液相色譜圖

試樣中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺峰面積平均值；A2為試樣溶液中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺峰面積平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量（g）；m2為試樣的質(zhì)量（g）；P為標(biāo)樣中吡唑醚菌酯或噻呋酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

采用不同比例的甲醇＋水、乙腈＋水作為流動(dòng)相對(duì)試樣中的有效成分進(jìn)行分離檢測(cè)。甲醇＋水作為流動(dòng)相，在體積比為70∶30時(shí)，有效成分分離效果較好，出峰時(shí)間短，且色譜峰峰形尖銳。

對(duì)標(biāo)樣溶液進(jìn)行紫外掃描，確定檢測(cè)波長(zhǎng)。當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm時(shí)，吡唑醚菌酯及噻呋酰胺吸收峰均較強(qiáng)，同時(shí)雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動(dòng)相無(wú)吸收。

2.2 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取不同質(zhì)量的吡唑醚菌酯、噻呋酰胺標(biāo)樣于5個(gè)100 mL容量瓶中，配制不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，按1.2色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。以吡唑醚菌酯或噻呋酰胺的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得吡唑醚菌酯和噻呋酰胺的線性相關(guān)曲線。吡唑醚菌酯線性方程為y=1 573.6 x-26.838，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；噻呋酰胺線性方程為y=2 590.1 x-38.200，相關(guān)系數(shù)為1.000 0。該方法在測(cè)定范圍內(nèi)線性相關(guān)性良好。

表1 線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

2.3 方法的精密度

在1.2色譜操作條件下，對(duì)20%噻呋·吡唑酯懸浮劑同一試樣平行測(cè)定5次，計(jì)算吡唑醚菌酯及噻呋酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見表2。吡唑醚菌酯變異系數(shù)為0.45%，噻呋酰胺變異系數(shù)為0.30%。方法精密度較高。

表2 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑精密度測(cè)定結(jié)果

2.4 方法的準(zhǔn)確度

在已知含量的20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中分別加入一定量的吡唑醚菌酯和噻呋酰胺標(biāo)樣，在上述操作條件下測(cè)定，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。兩者平均回收率均為99.7%。方法具有較好的準(zhǔn)確度。

表3 20%噻呋·吡唑酯懸浮劑回收率測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本文提出的測(cè)定20%噻呋·吡唑酯懸浮劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的高效液相色譜分析方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，且線性關(guān)系良好，適合用于產(chǎn)品質(zhì)量分析。

[1]楊麗娟,柏亞羅.甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑——吡唑醚菌酯[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2012,11(4):46-50;56.

[2]劉長(zhǎng)令.世界農(nóng)藥大全:殺菌劑卷 [M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2006:90-92.

[3]陳雅潔,王勇,謝健楊,等.25%呋蟲胺·吡唑醚菌酯懸浮種衣劑的HPLC分析[J].農(nóng)藥,2017,56(2):119-121.

[4]王芳,成妙金,李歐燕.45%唑醚·氟啶胺懸浮劑的高效液相色譜分析[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2015,14(2):37-39.

[5]郭利豐,丁佩,徐永.噻呋酰胺原藥的高效液相色譜分析[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2014,13(4):28-29.

（責(zé)任編輯：柏亞羅）

Analysis of Thifluzamide＋Pyraclostrobin 20%SC by HPLC

LI Yan-fei1,FAN Dong-sheng2,HUANG Hua-shu2,ZHANG Xiao-jun1*
(1.Sino-Agri Leading Biosciences Co.,Ltd.,Beijing 100052,China;2.China Crop Protection Industry Association,Beijing 100723,China)

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.05.009

2017-06-22

李彥飛（1985—），男，呼和浩特市人，工程師，主要從事農(nóng)藥劑型研發(fā)與分析工作。E-mail：liyanfei@sino-agri-sal.com

張小軍（1977—），男，山西省交口縣人，博士，高級(jí)工程師，主要從事農(nóng)藥劑型研發(fā)及使用技術(shù)研究。E-mail：zhangxj369@sina.com