董學颯，孟慶磊，安麗，王錫榮，劉羽清，趙波，張廣新(山東省淡水水產(chǎn)一次育種重點實驗室，山東省淡水漁業(yè)研究院，山東 濟南 250117)

陳鵬 (山東省高青縣鵬宏水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，山東 高青 256300)

黃河翹嘴鲌胚胎發(fā)育觀察

董學颯，孟慶磊，安麗，王錫榮，劉羽清，趙波，張廣新
(山東省淡水水產(chǎn)一次育種重點實驗室，山東省淡水漁業(yè)研究院，山東 濟南 250117)

陳鵬
(山東省高青縣鵬宏水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，山東 高青 256300)

將黃河水域收集的野生翹嘴鲌(Culteralburnus)，經(jīng)促熟培育、人工催產(chǎn)、人工授精獲得受精卵，對其胚胎發(fā)育過程進行了系統(tǒng)觀察。結果表明，黃河翹嘴鲌成熟卵呈淡黃色或黃綠色，為黏性卵，平均卵徑約0.9mm，卵內無油球。胚胎發(fā)育過程可分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官發(fā)生和孵化7個階段21個發(fā)育時期。24～26℃水溫下，受精卵經(jīng)25h左右孵出仔魚。初孵仔魚全長平均4.1～4.7mm。

翹嘴鲌(Culteralburnus)；胚胎發(fā)育；人工授精

翹嘴鲌(CulteralburnusBasilewsky,1855)又稱翹嘴紅鲌、大白魚、噘嘴鰱子等，隸屬于硬骨魚綱(Osteichthyes)鯉形目(Cypriniformes)鯉科(Cyprinidae)鲌亞科(Cultrinae)鲌屬(Culter)，其分布范圍較廣，在我國黑龍江、黃河、長江、珠江等水系均有分布。

翹嘴鲌生長速度快、抗病抗逆性強，單養(yǎng)可馴食人工配合飼料，套養(yǎng)可清除低值雜魚，具有重要的養(yǎng)殖開發(fā)潛力。目前，已有學者對國內諸多水域翹嘴鲌的生長[1]、繁殖[2]、營養(yǎng)[3]、肌肉生化成分[4]等方面進行了研究，其中，翹嘴鲌種質資源的開發(fā)利用及基礎研究以長江水系和黑龍江水系為多[5～8]，而黃河翹嘴鲌養(yǎng)殖開發(fā)和基礎研究[9]相對薄弱。為此，本研究對黃河翹嘴鲌胚胎發(fā)育過程進行了觀察，以摸清其胚胎發(fā)育規(guī)律，為其規(guī)模化人工繁育提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

于2014年5月從黃河水域捕撈野生翹嘴鲌親魚，在山東省淡水漁業(yè)研究院西郊基地進行池塘養(yǎng)殖和促熟培育。雌魚體質量為600～850g;雄魚體質量為550～750g。雌雄比例約1︰1。

2015年6月上旬，對成熟親魚進行1次胸鰭基部體腔注射，雌魚注射量為(LRH-A 10μg+HCG 1000IU)/kg,雄魚注射量減半。本研究采用干法授精，精、卵分別取自5尾雌雄魚。受精卵用清水漂洗2～3次，然后將粘附有受精卵的培養(yǎng)皿移入實驗室水箱內連續(xù)充氣孵化。水溫控制在24～26℃。參照其他鲌亞科魚類的胚胎發(fā)育情況，按預設時間取樣進行胚胎發(fā)育觀察。

全部發(fā)育過程均用徠卡DM2500正置熒光顯微鏡觀察、測量記錄和照相。記錄時間以同批次樣品中有50%以上表現(xiàn)出相應發(fā)育期特征為準，照相記錄典型時期。

2 結果與分析

在水溫24～26℃范圍內，黃河翹嘴鲌受精卵27min開始第1次卵裂，受精后9h開始形成器官，受精后約25h，開始岀膜，剛岀膜的仔魚全長平均4.1～4.7mm。孵化后約70h,腰點出現(xiàn)，此時即可下塘培育。黃河翹嘴鲌整個胚胎發(fā)育過程可分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官發(fā)生和孵化7個階段。根據(jù)外部形態(tài)特征可將胚胎發(fā)育過程分為21期(表1)。

表1 黃河翹嘴鲌的胚胎發(fā)育時序

A.受精卵；B.胚盤期；C.2細胞期；D.4細胞期；E.8細胞期；F.16細胞期；G.桑椹胚期；H.囊胚早期：I.囊胚中期；J.囊胚晚期；K.原腸初期；L.原腸中期；M.原腸晚期；N.神經(jīng)胚期；O.胚孔封閉期；P.肌節(jié)出現(xiàn)期；Q.視泡出現(xiàn)期；R.尾鰭出現(xiàn)期；S.尾泡出現(xiàn)期；T.肌肉搏動期；U.出膜前期；V.仔魚期。圖1 黃河翹嘴紅鲌胚胎發(fā)育過程

2.1 受精卵階段

成熟卵卵粒飽滿，淡黃色或黃綠色，呈圓形，微透明，有黏性。平均卵徑為0.9mm(0.7～1.1mm),卵內無油球。受精后3～5min,卵膜舉起，出現(xiàn)卵間隙，且卵間隙不均勻(圖1-A)。受精后18min，卵膜吸水膨脹，原生質由均勻分布狀態(tài)逐漸向動物極集中，形成胚盤并逐漸隆起，為胚盤期(圖1-B)。

2.2 卵裂階段

受精后27min開始第1次卵裂,方向從動物極向植物極。胚盤中央凹陷，頂端中間開始經(jīng)裂成大小相近的2個細胞，為2細胞期(圖1-C)。第2次卵裂，胚盤上出現(xiàn)與第一次經(jīng)裂溝相垂直的第二條經(jīng)裂溝，將胚盤分裂成大小相等的4個分裂球，為4細胞期(圖1-D)。分裂球呈2行4列，為8細胞期(圖1-E)。分裂球呈4行4列，為16細胞期(圖1-F)。分裂球呈4行8列，為32細胞期。分裂球越來越小，細胞團隆起呈桑葚狀，為桑葚胚期(圖1-G)。黃河翹嘴鲌受精卵的卵裂為典型的盤狀卵裂，即卵裂僅局限于胚盤部分，卵黃部分始終不參加分裂。

2.3 囊胚階段

此階段又可細分為早、中、晚3期。胚盤卵裂球數(shù)目不斷增加，細胞界限漸變模糊，胚胎表面顯得平滑，胚盤高度隆起于卵黃上。在解剖鏡下能觀察到一較“平坦”的區(qū)域即卵黃合胞體層，為囊胚早期(圖1-H)。細胞界限消失，細胞數(shù)目逐增，原胚盤高度有所下降，為囊胚中期(圖1-I)。囊胚表面細胞進一步擴散，胚盤明顯變低呈扁平而寬狀，向卵黃部分下包，約達整個胚胎的1/3,卵黃合胞體層變?yōu)殓娦位驁A頂形，為囊胚晚期(圖1-J)。

2.4 原腸胚階段

此階段又可細分為初、中、晚3期。

胚盤繼續(xù)下延、外包約達1/2，月牙狀胚環(huán)出現(xiàn)，胚盤邊緣內卷成為背唇，為原腸初期(圖1-K)。胚盤下包約2/3，胚環(huán)增厚，胚盾出現(xiàn)，為原腸中期(圖1-L)。胚盤下包約3/4，部分卵黃外露形成卵黃栓，胚盾增厚，背唇明顯，為原腸晚期(圖1-M)。

2.5 神經(jīng)胚階段

胚盤下包約4/5，胚體側臥，胚環(huán)變小，留有很小卵黃栓，出現(xiàn)神經(jīng)板雛形，胚體前端膨大，出現(xiàn)腦泡(圖1-N)。胚層完全包圍卵黃囊，卵黃栓消失，神經(jīng)板中線略下凹，但胚孔位置仍留有凹陷,為胚孔封閉期(圖1-O)。

2.6 器官發(fā)生階段

受精后9h,胚體頭部增大，中部出現(xiàn)2～3對體節(jié)，為肌節(jié)出現(xiàn)期(圖1-P)。受精后11h，胚體前端兩側出現(xiàn)視泡，為視泡出現(xiàn)期(圖1-Q)。受精后12h，體節(jié)17～23對，眼杯出現(xiàn)，尾牙隆起并末端具紹榴，為尾鰭出現(xiàn)期(圖1-R)。受精后13h20min，體節(jié)12～14對，胚體后部腹面出現(xiàn)尾芽，呈圓錐狀，尾泡形成，為尾泡出現(xiàn)期(圖1-S)。受精后15h，體節(jié)24對，肌肉有規(guī)律的開始抽動，為肌肉搏動期(圖1-T)。

2.7 孵化階段

受精后24h 30min，胚體伸展，胚胎在卵膜內開始不斷搏動，尾部屈于體側，富有張力，各器官發(fā)育趨于完善，為岀膜前期(圖1-U)。相繼岀膜，大部分為尾部先岀膜，也有部分頭部先岀膜。初孵仔魚全長平均4.1～4.7mm，軀體透明，體節(jié)43～44對，卵黃囊前粗后細；初孵仔魚鰭發(fā)育不完全，只能間歇進行上下垂直游動，為仔魚期(圖1-V)。

3 討論

目前，翹嘴鲌的人工養(yǎng)殖正在全國范圍內興起，了解其胚胎發(fā)育規(guī)律對于大規(guī)模人工繁育具有重要意義。本研究采用人工授精的方法批量獲取受精卵，保證了受精的同步性。翹嘴鲌的卵為黏性卵，不具有油球，這一特征與大多數(shù)淡水魚類相同。受精卵的卵裂方式為盤狀分裂,與其他硬骨魚類的卵裂方式相同，而且是以下包的方式形成原腸胚[10]。受精卵的發(fā)育時序和形態(tài)特點基本符合“卵裂—胚體形成—器官分化—孵出”的基本順序[11]。胚胎發(fā)育過程可分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經(jīng)胚、器官發(fā)生和孵化7個典型階段和21個連續(xù)的典型發(fā)育時期，水溫24～26℃，受精卵約25h孵出仔魚，孵化后約70h,腰點出現(xiàn)，與已報道的太湖翹嘴紅鲌相似[12]。其原因可能是翹嘴鲌是一個廣布種，不同的地理種群間可能存在自己的特征，而本研究對象取自黃河流域，與太湖地區(qū)距離較近，因此研究結果也相近。

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[編輯] 余文斌

2016-11-28

山東省農業(yè)良種工程項目；山東省現(xiàn)代農業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系魚類創(chuàng)新團隊(SDAIT-14-011-01)。

董學颯(1987-)女，助理研究員，主要從事水產(chǎn)遺傳育種研究。通信作者：孟慶磊, qingleimeng@126.com。

S961.1+4;Q959.46+8

A

1673-1409(2017)06-0036-04

[引著格式]董學颯，孟慶磊，安麗，等.黃河翹嘴鲌胚胎發(fā)育觀察[J].長江大學學報(自科版)，2017，14(6)：36～39.