李雅瀟, 馬 臣, 李靈芝*, 李 霞, 李功甫, 卜 婧, 葛肖健

(1. 武警后勤學(xué)院 藥物化學(xué)教研室，天津 300309； 2. 天津市職業(yè)與環(huán)境危害防制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300309； 3. 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院 藥劑科，天津 300162； 4. 天津中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，天津 300193)

·研究論文·

新型取代苯乙醇葡萄糖氧苷的合成及其抗缺氧活性

李雅瀟1,2, 馬 臣1, 李靈芝1,2*, 李 霞1, 李功甫1, 卜 婧3, 葛肖健4

(1. 武警后勤學(xué)院 藥物化學(xué)教研室，天津 300309； 2. 天津市職業(yè)與環(huán)境危害防制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300309； 3. 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院 藥劑科，天津 300162； 4. 天津中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，天津 300193)

以取代苯甲醛為原料，經(jīng)Wittig反應(yīng)、水解反應(yīng)和NaBH4還原反應(yīng)制得5個(gè)取代苯乙醇衍生物(4a～4e);以4a～4e和其他芳乙醇(4f～4r)為原料，依次與全乙?；宕咸烟墙?jīng)Koenigs- Knorr偶聯(lián)和MeONa/MeOH脫除乙酰保護(hù)基，合成了18個(gè)取代苯乙醇葡萄糖氧苷類(lèi)似物(5a～5r，其中5b～5r為新化合物)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和HR- MS(ESI)表征。采用MTT法研究了5a～5r對(duì)缺氧損傷的內(nèi)皮細(xì)胞(EA.hy926)代謝活力的影響。結(jié)果表明：5e, 5g, 5m, 5p, 5q和5r對(duì)EA.hy926的保護(hù)作用優(yōu)于紅景天苷。

取代苯乙醇; 葡萄糖氧苷; 紅景天苷; 合成; 內(nèi)皮細(xì)胞; 抗缺氧活性

高原缺氧常引起體內(nèi)多系統(tǒng)暫時(shí)或永久性改變，引發(fā)多種缺氧性損傷，嚴(yán)重時(shí)甚至誘發(fā)心腦血管疾病。因此，研發(fā)低毒性、高藥理活性的抗高原缺氧損傷藥物對(duì)防治高原缺氧疾病有重要的實(shí)際意義。紅景天苷(Chart 1)為藏藥紅景天的主要活性成分，能夠提高機(jī)體對(duì)氧氣的利用率，具有良好的清除自由基活性[1]和缺氧損傷保護(hù)作用[2]，是研究抗缺氧藥物的較好的先導(dǎo)化合物。

紅景天苷分子由糖基、連接側(cè)鏈和取代芳香環(huán)三部分構(gòu)成。郭益冰等[3-4]合成了連接側(cè)鏈為一碳和三碳的紅景天苷類(lèi)似物，發(fā)現(xiàn)3- (3,4,5- 三羥基苯基)丙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷和3- (3,4,5- 三羥基苯基)丙基-β- D- 吡喃半乳糖苷在體外具有較好的抗自由基活性。彭濤等[5-6]合成了10個(gè)紅景天苷碳苷類(lèi)似物和14個(gè)紅景天苷芐基葡萄糖硫苷類(lèi)似物，發(fā)現(xiàn)大部分化合物對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷具有保護(hù)作用。其中5個(gè)碳苷類(lèi)似物和3個(gè)硫苷類(lèi)似物作用強(qiáng)于紅景天苷。該研究結(jié)果說(shuō)明，以紅景天苷為先導(dǎo)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造有可能找到活性更高的化合物。本課題組在前期研究中合成了一系列側(cè)鏈為一碳的紅景天苷氧苷、硫苷和氮苷類(lèi)似物[7-9]及側(cè)鏈為丙烯基的紅景天苷氧苷、氮苷類(lèi)似物[10]，并考察了化合物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明，糖基種類(lèi)對(duì)紅景天苷類(lèi)似物的活性影響不大；將分子中的氧苷鍵以生物電子等排體氮苷鍵置換時(shí)，其抗缺氧活性普遍提高。目前，關(guān)于與紅景天苷結(jié)構(gòu)最為接近的取代苯乙醇葡萄糖氧苷類(lèi)似物的報(bào)道較少，主要有苯環(huán)全氟代的2,3,4,5,6- 五氟苯乙醇葡萄糖(或半乳糖)氧苷、4- 羥基- 3,5- 二甲氧基苯乙醇葡萄糖(或半乳糖)氧苷和3,4,5- 三甲氧基苯乙醇葡萄糖(或半乳糖)氧苷[3,11]等。

為進(jìn)一步研究紅景天苷類(lèi)似物的構(gòu)效關(guān)系，本文設(shè)計(jì)并合成了一系列取代苯乙醇葡萄糖氧苷類(lèi)似物。以取代苯甲醛(1a～1e)為原料，經(jīng)Wittig反應(yīng)[12]、水解反應(yīng)[13]和NaBH4還原反應(yīng)[14]制得取代苯乙醇衍生物(4a～4e);以4a～4e和其他芳乙醇(4f～4r)為原料，依次與全乙?；宕咸烟墙?jīng)Koenigs- Knorr偶聯(lián)和MeONa/MeOH脫除乙酰保護(hù)基，合成了18個(gè)取代苯乙醇葡萄糖氧苷類(lèi)似物(5a～5r, Scheme 1,其中5b～5r為新化合物)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR和HR- MS(ESI)表征。采用MTT法研究了5a～5r對(duì)缺氧損傷的內(nèi)皮細(xì)胞(EA.hy926)代謝活力的影響。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

X- 5型熔點(diǎn)儀；Bruker Avance 400 MHz型核磁共振儀(CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))；Bruker Maxis型質(zhì)譜儀；Bio- Rad 680型酶標(biāo)儀；Nikon TS 100型倒置相差顯微鏡;Thermo 371型CO2培養(yǎng)箱；Thermo 3111型混合氣體培養(yǎng)箱。

1a～1e,希恩思化學(xué)試劑有限公司;4f～4r,百賽斯生物科技有限公司；EA.hy926,中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)；DMEM培養(yǎng)基,GIBCO公司；4?分子篩使用前經(jīng)高溫活化；其余所用試劑均為色譜純或分析純。

1.2 合成

(1) 2a～2e的合成(以2b為例)

向反應(yīng)瓶中加入2- 甲氧基苯甲醛(1b)1.36 g(10 mmol)，甲氧基甲基三苯基氯化膦(MMC)6.86 g(20 mmol)和無(wú)水THF 10 mL，攪拌下于-7 ℃反應(yīng)30 min。加入叔丁醇鉀(KTB)2.24 g(20 mmol)， N2保護(hù)下于-7 ℃反應(yīng)20 min；于室溫反應(yīng)5 h(TLC檢測(cè))。倒入飽和NH4Cl溶液(200 mL)中，用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取，合并有機(jī)層，依次用飽和NaCl溶液(50 mL)和蒸餾水(50 mL)洗滌，用無(wú)水MgSO4干燥，過(guò)濾，濾液濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑：石油醚)純化，真空干燥得黃色油狀液體2b 1.26 g，收率77%。

用類(lèi)似的方法合成黃色固體2a, 2c～2e，收率70%～80%。

(2) 3a～3e的合成(以3b為例)

0 ℃下，將2b 1.15 g(7 mmol)溶于丙酮(10 mL)中，緩慢滴加5 mol·L-1鹽酸8.5 mL，滴畢，N2保護(hù)下，攪拌20 min；于室溫反應(yīng)2 h(TLC檢測(cè))。倒入蒸餾水(100 mL)中，用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取，合并有機(jī)層，依次用飽和NaHCO3溶液(50 mL)，飽和NaCl溶液(50 mL)和蒸餾水(50 mL)洗滌，無(wú)水MgSO4干燥,抽濾，濾液減壓濃縮得淡黃色油狀液體3b 0.83 g，收率79%。

用類(lèi)似的方法合成淡黃色油狀液體3a， 3c～3e，收率70%～80%。

(3) 4a～4e的合成(以4b為例)

在反應(yīng)瓶中加入3b 0.75 g(5 mmol)和無(wú)水甲醇10 mL，于0 ℃攪拌使其溶解；加入NaBH40.28 g(7.5 mmol)， N2保護(hù)下，反應(yīng)約1 h(TLC檢測(cè))。倒入蒸餾水(200 mL)中，用稀鹽酸調(diào)至弱酸性，用二氯甲烷(3×50 mL)萃取，合并有機(jī)相，依次用飽和食鹽水(50 mL)和蒸餾水(50 mL)洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，減壓濃縮得淡黃色油狀液體4b 0.68 g，收率89%。

Scheme 1

Chart 1

用類(lèi)似的方法合成淡黃色油狀液體4a， 4c～4e，收率80%～90%。

(4) 5a～5r的合成(以5b為例)

將4b 0.46 g(3 mmol)溶于新蒸無(wú)水二氯甲烷(10 mL)中，加入全乙?；宕咸烟?.64 g(4 mmol)和4?分子篩2.00 g，于室溫?cái)嚢杓s30 min；加入Ag2CO31.10 g(4 mmol)， N2保護(hù)下，避光反應(yīng)約24 h。過(guò)濾，濾液依次用飽和NaHCO3溶液(50 mL)，飽和NaCl溶液(50 mL)和蒸餾水(50 mL)洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，減壓濃縮,殘余物溶于無(wú)水甲醇(10 mL)中，加入甲醇鈉0.1 g(1.85 mmol)，于室溫反應(yīng)約30 min(TLC檢測(cè))。用稀鹽酸調(diào)至pH 6，減壓濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析[梯度洗脫劑：V(二氯甲烷)/V(甲醇)=7/1～30/1]純化得白色固體5b 0.24 g，收率25%。

用類(lèi)似的方法合成5a， 5c～5r。

2- 苯乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5a)： 白色固體，收率28%, m.p.111.2～113.2 ℃;1H NMRδ: 7.26(d,J=5.6 Hz, 4H), 7.22～7.16(m, 1H), 4.98(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.92(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.88(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.47(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.17(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.93(ddd,J=9.8 Hz, 8.0 Hz, 7.0 Hz, 1H), 3.59～3.68(m, 2H), 3.42(dt,J=11.8 Hz, 6.0 Hz, 1H), 3.13～2.9(m, 4H), 2.84(ddd,J=8.0 Hz, 6.6 Hz, 3.6 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H20O6{[M+Na]+}307.115 2, found 307.115 8。

2- (2- 甲氧基苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5b)： 淡黃色油狀物，收率25%;1H NMRδ: 7.19(t,J=7.6 Hz, 2H), 6.96～6.92(m, 1H), 6.86(td,J=7.4 Hz, 1.1 Hz, 1H), 4.95(s, 3H), 4.48(s, 1H), 4.16(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.87(td,J=9.4 Hz, 6.4 Hz, 1H), 3.78(s, 3H), 3.65(dd,J=11.6 Hz, 1.8 Hz, 1H), 3.60～3.53(m, 1H), 3.43(dd,J=11.6 Hz, 5.4 Hz, 1H), 3.14～2.91(m, 4H), 2.89～2.77(m, 2H); HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C15H22O7{[M+Na]+}337.126 4, found 337.126 4。

2- (2- 溴苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5c)： 白色固體，收率36%， m.p.124.7～132.5 ℃;1H NMRδ: 7.59(dd,J=8.0 Hz, 1.0 Hz, 1H), 7.44(dd,J=8.0 Hz, 1.8 Hz, 1H), 7.32(td,J=8.0 Hz, 1.0 Hz, 1H), 7.17(td,J=8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 5.01(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.94(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.90(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.48(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.21(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.93(ddd,J=10.0 Hz, 8.0 Hz, 7.0 Hz, 1H), 3.64～3.70(m, 2H), 3.44(dt,J=11.6 Hz, 5.8 Hz, 1H), 3.15～3.00(m, 4H), 3.00～2.96(m, 2H); HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19O6Br{[M+Na]+}385.026 3, found 385.027 6。

2- (3- 甲氧基苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5d)： 淡黃色油狀液體，收率23%;1H NMRδ: 7.19(t,J=7.8 Hz, 1H), 6.87～6.85 (m, 1H), 6.83(dt,J=7.6 Hz, 1.0 Hz, 1H), 6.78～6.74 (m, 1H), 4.98(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.92(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.89(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.48(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.19(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.94(dt,J=9.8 Hz, 7.4 Hz, 1H), 3.73(s, 3H), 3.70～3.61(m, 2H), 3.43(dt,J=12.0 Hz, 6.0 Hz, 1H), 3.15～2.93(m, 4H), 2.83(td,J=7.6 Hz, 2.8 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C15H22O7{[M+Na]+}337.126 4, found 337.127 3。

2- (3,4- 二甲氧基苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5e)： 白色固體，收率25%， m.p.115.0～118.7 ℃;1H NMRδ: 6.90(d,J=2.0 Hz, 1H), 6.84(d,J=8.2 Hz, 1H), 6.75(dd,J=8.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.97(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.92(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.88(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.47(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.18(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.97～3.87(m, 1H), 3.73(s, 3H), 3.71(s, 3H), 3.69～3.57(m, 2H), 3.47～3.38(m, 1H), 3.15～2.92(m, 4H), 2.78(td,J=7.0 Hz, 2.8 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C16H24O8{[M+Na]+}367.136 9, found 367.138 1。

2- (2,4- 二氯苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5f)： 白色固體，收率27%, m.p.126.4～129.2 ℃;1H NMRδ: 7.58(d,J=2.2 Hz, 1H), 7.49(d,J=8.0 Hz, 1H,), 7.36(dd,J=8.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.99(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.93(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.89(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.47(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.19(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.98～3.88(m, 1H), 3.72～3.62(m, 2H), 3.43(dt,J=12.0 Hz, 5.8 Hz, 1H), 3.14～2.97(m, 4H), 2.94(dt,J=8.4 Hz, 4.0 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H18O6Cl2{[M+Na]+}375.037 8, found 375.038 2。

2- (2- 氯苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5g)： 淡黃色油狀液體，收率24%， m.p.113.2～115.9 ℃；1H NMRδ: 7.42(ddd,J=9.6 Hz, 7.0 Hz, 2.0 Hz, 2H), 7.26(ddd,J=7.0 Hz, 4.8 Hz, 2.0 Hz, 2H), 4.98(d,J=5.0 Hz), 4.91(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.87(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.46(t,J=5.8 Hz, 1H), 4.20(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.93(ddd,J=10.0 Hz, 8.0 Hz, 7.0 Hz, 1H), 3.71～3.62(m, 2H), 3.43(dt,J=12.0 Hz, 6.0 Hz, 1H), 3.18～3.00(m, 4H), 2.99～2.94(m, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19O6Cl{[M+Na]+}341.076 8, found 341.076 9。

2- (3- 氯苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5h)： 淡黃色油狀液體，收率29%；1H NMRδ: 7.37(t,J=1.8 Hz, 1H), 7.3～7.28(m, 1H), 7.25(dt,J=7.0 Hz, 1.8 Hz, 2H), 4.99(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.93(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.90(d,J=5.2 Hz, 1H), 4.49(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.19(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.94(dt,J=9.8 Hz, 7.2 Hz, 1H), 3.63～3.71(m, 2H), 3.42(dd,J=12.0 Hz, 5.8 Hz, 1H), 3.14～2.93(m, 4H), 2.87(td,J=7.0 Hz, 2.0 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19O6Cl{[M+Na]+}341.076 8, found 341.077 0。

2- (4- 氯苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5i)： 收率32%， m.p.104.7～110.4 ℃；1H NMRδ: 7.32(d,J=1.4 Hz, 4H), 4.96(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.91(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.87(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.46(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.17(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.93(dt,J=9.8 Hz, 7.2 Hz, 1H), 3.69～3.62(m, 2H), 3.43(dd,J=12.0 Hz, 6.0 Hz, 1H), 3.14～2.94(m, 4H), 2.85(td,J=7.0 Hz, 1.8 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19O6Cl{[M+Na]+}341.076 8, found 341.077 4。

2- (2- 甲基苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5j)： 白色固體，收率25%， m.p.102.5～109.3 ℃；1H NMRδ: 7.22～7.17(m, 1H), 7.13(d,J=4.2 Hz, 1H), 7.11～7.07(m, 2H), 4.97(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.91(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.87(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.46(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.20(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.89(ddd,J=9.8 Hz, 8.4 Hz, 7.0 Hz, 1H), 3.70～3.58(m, 2H), 3.43(dt,J=11.8 Hz, 6.0 Hz, 1H), 3.15～2.93(m, 4H), 2.86(ddd,J=8.6 Hz, 6.8 Hz, 2.0 Hz, 2H), 2.28(s, 3H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C15H22O6{[M+Na]+}321.131 4, found 321.131 3。

2- (3- 甲基苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5k)： 淡黃色油狀液體，收率34%；1H NMRδ: 7.16(t,J=8.0 Hz, 1H), 7.09～6.99(m, 3H), 4.96(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.91(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.87(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.47(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.18(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.92(ddd,J=9.6 Hz, 8.0 Hz, 7.0 Hz, 1H), 3.69～3.59(m, 2H), 3.47～3.38(m, 1H), 3.15～2.94(m, 4H), 2.81(ddd,J=8.0 Hz, 7.0 Hz, 3.0 Hz, 2H), 2.27(s, 3H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C15H22O6{[M+Na]+}321.131 4, found 321.131 5。

2- (3- 溴苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5l)： 淡黃色油狀液體，收率23%；1H NMRδ: 7.51(t,J=2.0 Hz, 1H), 7.39(ddd,J=8.0 Hz, 2.0 Hz, 1.0 Hz, 1H), 7.30(dt,J=8.0 Hz, 1.4 Hz, 1H), 7.24(t,J=8.0 Hz, 1H), 4.99(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.93(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.90(d,J=5.2 Hz, 1H), 4.48(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.19(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.94(dt,J=10.0 Hz, 7.0 Hz, 1H), 3.71～3.63(m, 2H), 3.43(dt,J=12.0 Hz, 5.8 Hz, 1H), 3.14～2.93(m, 4H), 2.86(td,J=7.0 Hz, 2.0 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19O6Br{[M+Na]+}385.026 3, found 385.026 7。

2- (2- 氟苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5m)： 白色固體，收率28%， m.p.107.9～109.6 ℃；1H NMRδ: 7.40(td,J=7.6 Hz, 1.8 Hz, 1H), 7.26(dd,J=5.6 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.17～7.10(m, 2H), 4.98(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.92(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.88(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.47(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.19(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.98～3.90(m, 1H), 3.69～3.62(m, 2H), 3.43(dt,J=12.0 Hz, 5.8 Hz, 1H), 3.14～2.94(m, 4H), 2.90(td,J=7.4 Hz, 3.0 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19O6F{[M+Na]+}325.106 4, found 325.106 3。

2- (4- 氟苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5n)： 白色固體，收率34%， m.p.95.8～103.8 ℃；1H NMRδ: 7.35～7.28(m, 2H), 7.13～7.06(m, 2H), 4.97(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.92(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.88(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.47(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.18(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.93(dt,J=10.0 Hz, 7.2 Hz, 1H), 3.71～3.60(m, 2H), 3.43(dt,J=12.0 Hz, 5.8 Hz, 1H), 3.15～2.93(m, 4H), 2.85(td,J=7.2 Hz, 2.4 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19O6F{[M+Na]+}325.106 4, found 325.106 5。

2- (4- 甲氧基苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5o)： 白色固體，收率29%， m.p.104.4～106.7 ℃；1H NMRδ: 7.18(dd,J=8.6 Hz, 2.0 Hz, 2H), 6.84(dt,J=8.8 Hz, 2.0 Hz, 2H), 4.94(dt,J=4.0 Hz, 1.8 Hz, 1H), 4.90(dd,J=4.8 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.87(dd,J=5.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.46(dt,J=7.4 Hz, 3.6 Hz, 1H), 4.18(dd,J=7.8 Hz, 2.0 Hz, 1H), 3.91(q,J=8.2 Hz, 1H), 3.72(t,J=1.8 Hz, 3H), 3.70～3.57(m, 2H), 3.44(q,J=6.2 Hz, 1H), 3.15～2.93(m, 4H), 2.80(d,J=8.0 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C15H22O7{[M+Na]+}337.126 4, found 337.127 1。

2- (2- 硝基苯基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5p)： 白色固體，收率26%， m.p.113.0～117.6 ℃;1H NMRδ: 7.93(dd,J=8.0 Hz, 1.2 Hz, 1H), 7.68～7.62(m, 2H), 7.49(ddd,J= 8.6 Hz, 6.6 Hz, 2.4 Hz, 1H), 4.95(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.93(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.90(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.46(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.20(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.99(dt,J=10.0 Hz, 7.0 Hz, 1H), 3.76～3.64(m, 2H), 3.43(dt,J=12.0 Hz, 5.8 Hz, 1H), 3.06～3.15(m, 4H), 3.06～2.91(m, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C14H19NO8{[M+Na]+}352.100 9, found 352.103 0。

2- (2- 噻吩基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5q)： 白色固體，收率33%， m.p.104.7～106.4 ℃；1H NMRδ: 7.33(t,J=3.6 Hz, 1H), 6.96(d,J=3.0 Hz, 2H), 4.95(dt,J=4.2 Hz, 1.8 Hz, 1H), 4.91(dd,J=4.8 Hz, 1.8 Hz, 1H), 4.89～4.86(m, 1H), 4.50～4.44(m, 1H), 4.21(d,J=7.8 Hz, 1H), 3.97(q,J=8.0 Hz, 1H), 3.73～3.64(m, 2H), 3.44(dt,J=11.8 Hz, 6.0 Hz, 1H), 3.12(dd,J=23.8 Hz, 9.2 Hz, 4H), 3.06～2.94(m, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C12H18O6S{[M+Na]+}313.072 2, found 313.073 7。

2- (3- 吲哚基)乙基-β- D- 吡喃葡萄糖苷(5r)： 白色固體，收率28%， m.p.69.1～75.9 ℃;1H NMRδ: 10.81(s, 1H), 7.53(d,J=8.0 Hz, 1H), 7.33(dd,J=8.0 Hz, 1.0 Hz, 1H), 7.21(d,J=2.4 Hz, 1H), 7.05(ddd,J=8.0 Hz, 7.0 Hz, 1.2 Hz, 1H), 6.97(ddd,J=8.0 Hz, 7.0 Hz, 1.0 Hz, 1H), 5.00(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.93(d,J=4.8 Hz, 1H), 4.89(d,J=5.0 Hz, 1H), 4.48(t,J=6.0 Hz, 1H), 4.22(d,J=7.8 Hz, 1H), 4.01(dt,J=10.0 Hz, 7.4 Hz, 1H), 3.74～3.65(m, 2H), 3.46～3.41(m, 1H), 3.17～3.00(m, 4H), 2.96(t,J=7.6 Hz, 2H)； HR- MS(ESI)m/z: Calcd for C16H21NO6{[M+Na]+}346.126 7, found 346.128 6。

1.3 抗缺氧活性測(cè)定

取對(duì)數(shù)期EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個(gè)·mL-1，在含10%FBS高糖DMEM培養(yǎng)基中，在5%CO2中，于37 ℃孵育24 h(細(xì)胞呈單層，鋪滿孔底)。換低糖無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h。將細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組、缺氧模型組、紅景天苷組(c=1×10-6mol·L-1)和待測(cè)化合物組(c=1×10-6mol·L-1)，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。除正常對(duì)照組外其它各組均以D- Hank’s液代替培養(yǎng)基，置于混合氣體培養(yǎng)箱(5%CO2+95%N2)中，于37 ℃培養(yǎng)2 h。正常對(duì)照組在5%CO2培養(yǎng)箱中于37 ℃培養(yǎng)2 h。缺氧培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入5 mg·mL-1MTT溶液20 μL，在5%CO2培養(yǎng)箱中于37 ℃中培養(yǎng)4 h。棄去上清液，每孔加入DMSO 150 μL溶解結(jié)晶，測(cè)定各孔吸光值A(chǔ)490。

2 結(jié)果與討論

2.1 合成

(1) 3b的合成

首先以1b為原料,經(jīng)Witting反應(yīng)合成具有烯醇醚結(jié)構(gòu)的2b，然后參照文獻(xiàn)[13]方法,以THF為溶劑，用2 mol·L-1鹽酸調(diào)節(jié)體系pH，回流(45 ℃)反應(yīng)合成3b時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)顯示副產(chǎn)物較多。我們改用丙酮為溶劑，用5 mol·L-1鹽酸調(diào)節(jié)pH，于室溫反應(yīng)1～2 h[15-16]。該方法反應(yīng)完全，收率較高。

(2) 5a～5r的合成[17]

我們采用全乙酰溴代葡萄糖在Ag2CO3催化下與4發(fā)生親核取代反應(yīng)的方法，合成5。由于糖基結(jié)構(gòu)中的羥基已被乙?；?或苯甲?；?保護(hù)，保護(hù)基可以通過(guò)氧原子的鄰基參與效應(yīng)加速Br-的離去，生成五元環(huán)中間體。由于立體效應(yīng)，醇的氧原子優(yōu)先從五元環(huán)外側(cè)進(jìn)攻，通常得到1,2- 反式糖苷，即產(chǎn)物主要以β- 構(gòu)型為主。

2.2 構(gòu)效關(guān)系

表1為5a～5r的抗缺氧活性。由表1可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，缺氧模型組細(xì)胞代謝活力顯著降低(P<0.05)，說(shuō)明缺氧已對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷；給予1×10-8mol·L-1紅景天苷處理后，細(xì)胞代謝活力與缺氧模型組相比顯著提高(P<0.05)，說(shuō)明紅景天苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷具有保護(hù)作用；給予同濃度的5a～5r處理后，缺氧細(xì)胞代謝活力均較缺氧模型組顯著提高，其中5e, 5g, 5m, 5p, 5q和5r組的細(xì)胞代謝活力顯著高于紅景天苷組(P<0.05)。當(dāng)培養(yǎng)基中化合物濃度為1×10-8mol·L-1時(shí)，化合物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用均不弱于紅景天苷，且絕大多數(shù)化合物的保護(hù)作用有升高的趨勢(shì)，說(shuō)明苯乙氧基結(jié)構(gòu)對(duì)化合物的抗缺氧活性有重要影響。5e抗缺氧活性顯著優(yōu)于紅景天苷，5e為5a苯環(huán)上引入3,4- 二甲氧基所得化合物，前期研究也發(fā)現(xiàn)[9-10]，苯環(huán)上引入3,4- 二甲氧基可以增強(qiáng)化合物的抗缺氧活性，說(shuō)明苯環(huán)3,4- 位甲氧基可能是抗缺氧活性的增效基團(tuán)。

從表1還可以看出，苯環(huán)上引入氯、溴和氟所得的化合物5g, 5h, 5i, 5c, 5m和5n，抗缺氧活性與紅景天苷比均呈提高趨勢(shì)，其中5g(2- 位氯代)和5m(溴代)的活性均高于紅景天苷，說(shuō)明苯環(huán)上引入鹵素原子可能有益于增強(qiáng)化合物的抗缺氧活性，2- 位引入氯原子和氟原子效果更佳。

將5a結(jié)構(gòu)中的苯基分別以其生物電子等排體2- 噻吩基和3- 吲哚基置換，合成的5q和5r的抗缺氧活性明顯提高，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用顯著優(yōu)于紅景天苷，說(shuō)明將該類(lèi)化合物的苯環(huán)以芳香雜環(huán)置換有可能得到抗缺氧活性更強(qiáng)的化合物。

CompA值CompA值常氧對(duì)照組0.8865±0.06705i0.4284±0.0094#缺氧模型組0.2590±0.0599△5j0.4262±0.0405#紅景天苷組0.4056±0.0299#5k0.4250±0.0700#5a0.3958±0.0505#5l0.4202±0.0552#5b0.4380±0.0215#5m0.4820±0.0482#*5c0.4661±0.0328#5n0.4314±0.0785#5d0.3892±0.0806#5o0.3706±0.0512#5e0.4890±0.0347#*5p0.4950±0.0385#*5f0.4378±0.1132#5q0.5180±0.0523#*5g0.4944±0.0588#*5r0.5026±0.0448#*5h0.4138±0.0211#

△與常氧對(duì)照組相比，P<0.05；#與缺氧模型組相比，P<0.05；*與紅景天苷組相比，P<0.05。

合成了18個(gè)取代苯乙醇葡萄糖氧苷類(lèi)似物(5a～5r，其中5b～5r為新化合物)。采用MTT法研究了5a～5r對(duì)缺氧損傷的內(nèi)皮細(xì)胞(EA.hy926)代謝活力的影響。結(jié)果表明：5e, 5g, 5m, 5p, 5q和5r對(duì)EA.hy926的保護(hù)作用優(yōu)于紅景天苷。構(gòu)效分析表明，芳香乙氧基、以芳雜環(huán)替代苯環(huán)和苯環(huán)2- 鹵代、3,4- 二甲氧基取代均可能利于增強(qiáng)抗缺氧活性。這對(duì)該類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)優(yōu)化提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Synthesis of Novel Substituted PhenylethanolO- glycosides and Their Anti- hypoxic Activities

LI Ya- xiao1,2, MA Chen1, LI Ling- zhi1,2*, LI Xia1, LI Gong- fu1, BU Jing3, GE Xiao- jian4

(1. Department of Medical Chenistry, Logistics University of Chinese People’s Armed Police Forces, Tianjin 300309, China; 2. Tianjin Key Laboratory for Prevention and Control of Occupational and Environmental Hazard, Tianjin 300309, China; 3. Pharmaceutical Preparation Section, Affiliated Hospital of Logistics University of Chinese People’s Armed Police Forces, Tianjin 300162, China； 4. College of Traditional Chinese Medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China)

Five substituted phenylethanol derivatives(4a～4e) were obtained by Wittig reaction, hydrolysis reaction and NaBH4reduction from substituted benzaldehydes. Eighteen substituted phenylethanolO- glycosides(5a～5r, among them 5b～5r were novel compounds) were synthesized by Koenigs- Knorr reaction following by deacetylation from fully acetylated glucopyranose bromide and substituted phenylethanol derivatives(4a～4r). The structures were characterized by1H NMR and HR- MS(ESI). The anti- hypoxic activities of 5a～5r on endothelial cells(EA.hy926) exposed to hypoxia were investigated by MTT assays. The results indicated that 5e, 5g, 5m, 5p, 5q and 5r exhibited better anti- hypoxic activities than salidroside on EA.hy926.

substituted phenylethanol;O- glycoside; salidroside; synthesis; endothelial cell; anti- hypoxia activity

2016- 12- 30；

2017- 03- 06

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81471823)； 天津市重點(diǎn)基金資助項(xiàng)目(12JCZDJC34700)； 武警后勤學(xué)院科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(WHTD210303)； 軍隊(duì)“2110”工程資助項(xiàng)目(JY2110- 7); 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院種子基金資助項(xiàng)目(FYQ201453)

李雅瀟(1983-)，女，漢族，天津人，講師，主要從事藥物化學(xué)的研究。 E- mail: liyaxiaopalmer@163.com

李靈芝，博士，教授，博士生導(dǎo)師, E- mail: 13682196000@163.com

O629.13； R914.5

A

10.15952/j.cnki.cjsc.1005- 1511.2017.05.16335