王衛(wèi)華，安蕓

（菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校，山東菏澤274000）

銀杏葉中三種黃酮類含量采用一測多評法測定

王衛(wèi)華，安蕓

（菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校，山東菏澤274000）

目的探討一測多評法對銀杏葉中3種黃酮類成分進(jìn)行含量測定。方法實(shí)施高效液相色譜法，將槲皮素作為內(nèi)參物，再建立與異鼠李素和山柰素相對的校正因子，并對相應(yīng)的含量進(jìn)行計(jì)算；選取外標(biāo)法對銀杏葉中三種黃酮類成分的含量進(jìn)行測定，對比分析實(shí)測值與計(jì)算值之間的差異，旨在得出一測多評法的可行性與準(zhǔn)確性。結(jié)果一測多評法計(jì)算值與外標(biāo)法測定值之間的比較差異不顯著，且本次研究得出的校正因子具有可信度。結(jié)論銀杏葉中3種黃酮類成分的含量應(yīng)用一測多評法進(jìn)行測定具有其可行性與適用性。

銀杏葉；黃酮；一測多評法

銀杏樹即公孫樹，是一種最古老的植物，享有裸子植物活化石的稱呼。《本草綱目》[1]記載，銀杏果有止白帶、遺尿、平喘斂肺的作用，自20世紀(jì)60年代以來，諸多專家學(xué)者大量研究了銀杏葉，其中有涉及到銀杏葉所含有的化學(xué)成分、藥理作用以及臨床應(yīng)用。銀杏葉當(dāng)中的部分成分在心腦血管疾病中的應(yīng)用療效確切，在保健產(chǎn)品與藥品的生產(chǎn)方面應(yīng)用前景廣泛。銀杏葉的化學(xué)成分極其復(fù)雜，其主要包括酚酸酯類、萜類內(nèi)脂類以及黃酮類化合物等。我國2010年版的《中國藥典》[2]，將銀杏葉項(xiàng)下的異鼠李素、山柰素以及槲皮素三種黃酮成分視為指標(biāo)成分，利用高效液相色譜法對其進(jìn)行測定，能夠使銀杏葉的質(zhì)量得到控制[3]。以前成分測定，均為單測法，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、成本換算較高。為此，我們采用一測多評法測定銀杏葉中3種黃酮的含量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料試藥與儀器：選取LC-20AHPLC島津系統(tǒng)，同時(shí)選取Agilent 1200系列的高效液相色譜系統(tǒng)；槲皮素對照品（批號為200406）、山柰素對照品（批號200808）、異鼠李素（批號200608），均購于中國食品藥品檢定研究所；色譜純：純凈水、磷酸與甲醇；分析純：三氯甲烷、鹽酸、甲醇等。本次銀杏葉樣品總計(jì)為八個(gè)產(chǎn)地，分別是山東菏澤、山東濰坊、廣西桂林、四川成都、遼寧丹東、安徽亳州、遼寧錦州以及山東郯城。通過鑒定，銀杏葉樣品均為銀杏科植物銀杏干燥葉，滿足測定要求。

1.2 方法（1）色譜的條件。選取SHIMADZU VPODS類型的分析柱，即5 um×250 mm×4.6 mm；0.4%甲醇磷酸溶液為流動(dòng)相，其體積的流量為每分鐘1.0 ml；溫柱在36℃；同時(shí)檢測波長在360納米；在上述指標(biāo)的條件之下，各個(gè)待檢測的成分其分離度均較好。（2）制備對照品溶液：通過精密稱取適量的異鼠李素、山柰素以及槲皮素對照品，加用甲醇進(jìn)而制成每1 ml中含42.3100 μg異鼠李素、57.1660 μg山柰素以及59.3433 μg槲皮素混合溶液。（3）制備供試品溶液：選取約1 g的銀杏葉中粉，稱定精密后，放置在索氏提取器當(dāng)中，依照2010年版的《中國藥典》銀杏葉總黃酮醇苷的含量給予項(xiàng)下測定處理，加入三氯甲烷進(jìn)行加熱回流并提取2 h，將三氯甲烷溶液去除，揮干藥渣；加入甲醇進(jìn)行加熱回流并提取4 h，蒸干提取液，于殘?jiān)屑尤?5%甲醇鹽酸溶液25 ml的混合溶液，實(shí)行加熱回流30 min后放冷，將其轉(zhuǎn)移到量瓶（50 ml）中，同時(shí)加入甲醇到刻度值，最后搖勻即可。

2 結(jié)果

2.1 精密度試驗(yàn)將對照品溶液取出，連續(xù)性進(jìn)樣六次，每次為10 μl，通過計(jì)算得出異鼠李素、山柰素以及槲皮素峰面積的RSD分別為0.59%、0.43%以及0.42%。

2.2 選取購于山東菏澤的銀杏葉制備出來的供試品溶液，將其在室溫中放置0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h以及24 h后進(jìn)樣，對異鼠李素、山柰素與槲皮素峰面積RSD計(jì)算得出其分別為1.3%、1.1%與1.2%。由此得出制備完善的供試品溶液在室溫中放置1 d內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.3 供試品溶液制備選取購自山東濰坊的銀杏葉六份，每一份的重量約為1 g，稱定精密之后，對供試品溶液進(jìn)行制備，其后依法進(jìn)行測定，利用外標(biāo)法對其異鼠李素、山柰素和槲皮素進(jìn)行計(jì)算，依次得出其含量的RSD分別為1.4%、1.1%與0.9%。

2.4 加樣回收試驗(yàn)選取購安徽亳州的銀杏葉六份，每一份均約為0.5 g，稱定精密，依照各個(gè)成分于藥材中的不同含量分別給予適當(dāng)?shù)膶φ掌芳尤?，根?jù)供試品溶液制備，依法進(jìn)行測定，對各個(gè)對照品加樣回收的幾率進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算得出異鼠李素、山柰素以及槲皮素回收率平均為96.6%、98.2%以及99.5%，并且回收率間的RSD相應(yīng)為1.4%、0.8%以及1.2%。

2.5 不同色譜柱與儀器對校正因子的影響選取加樣回收率項(xiàng)下對照品溶液，各個(gè)均進(jìn)樣10 μl，將槲皮素視作內(nèi)標(biāo)，依次計(jì)算槲皮素對異鼠李素以及山柰素相對的校正因子，最后選取平均值，其計(jì)算結(jié)果。詳見表1。

表1 不同色譜柱與儀器影響相對校正因子情況

2.6 樣品的測定選取八批銀杏葉供試品溶液制備，測定進(jìn)樣，依次給予一測多評法與外標(biāo)法對銀杏葉中異鼠李素、山柰素和槲皮素的含量進(jìn)行計(jì)算，詳見表2。由表2中數(shù)據(jù)可知，這兩種計(jì)算方式得出的結(jié)果差異不顯著。

表2 樣品計(jì)算結(jié)果分析

3 討論

一側(cè)多評法，在很多化學(xué)成分的測定中，已得到廣泛認(rèn)可，以用于多種中藥材的質(zhì)量評價(jià)。如三七、人參等[4，5]。有人建立了銀杏葉提取物中總黃酮醇苷測定的一側(cè)多平法[6]。本次試驗(yàn)采取高效液相色譜法外標(biāo)法對銀杏葉中槲皮素和異鼠李素、山柰素間的相對校正因子進(jìn)行了測定與計(jì)算，得出了異鼠李素與山柰素的含量，達(dá)到了一測多評的效果[7]。

耐用性考察，兩種黃酮成分和其中內(nèi)參槲皮素之間的相對校正因子重復(fù)性良好，從而驗(yàn)證了一測多評方法用于銀杏葉的提取物中黃酮類成分測定的準(zhǔn)確性。

實(shí)施外標(biāo)測定法同樣對銀杏葉中異鼠李素以及山柰素的含量進(jìn)行了測定，對比分析外標(biāo)法測定的數(shù)值與相對校正因子的數(shù)值間差異性，對比結(jié)果得出異鼠李素與山柰素實(shí)施相對校正因子得出的含量和實(shí)行外標(biāo)法測定的數(shù)值間比較，P＞0.05，無顯著性差異。證明一測多評法于銀杏葉中三種黃酮類成分定量的測定具有其可行性和適用性[8]。

[1]于姍姍,李敏,張秋紅，等.一測多評法測定銀杏葉中3種黃酮類成分的含量[J].中國執(zhí)業(yè)藥師,2016,(3)：30-33.

[2]陳厚柳.銀杏葉提取和層析過程在線質(zhì)量控制方法研究[D].杭州：浙江大學(xué),2015.

[3]張強(qiáng)祖.中藥材黃酮的大孔樹脂吸附工藝研究及生產(chǎn)線設(shè)計(jì)[D].上海：華東理工大學(xué),2013.

[4]陸兔林，石上海，蔡寶昌，等.基于一測多評的中藥多成分定量研究進(jìn)展[J].中草藥,2012,43(12)：2525-2529.

[5]劉圓，龔建平，魏惠珍，等.一測多評法測定健脾丸中4種黃酮類成分[J].中成藥,2015,37(5)：995-999.

[6]王丹,張晶，趙曉宏.一測多評法測定銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(7)：58-62.

[7]董玉娟.保健食品中黃酮類功效成分的LC-MS檢測技術(shù)研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué),2015.

[8]楊艷模,繆建榮,林海.一測多評法測定銀杏葉提取物中7種黃酮類成分含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,18(8)：82-85.

More than a test evaluation method determine the content of three kinds of flavonoids in ginkgo biloba composition

Wang Weihua,An Yun
(Heze Medical College,Shandong Heze 274000)

ObjectiveThe main for more than a test evaluation method determine the content of three kinds of flavonoids in ginkgo biloba composition were analyzed.MethodsThe implementation of high performance liquid chromatography,Quercetin as internal material,To build and rat Li Su Nai element relative correction factor and the mountain, And a calculation is made to the corresponding content.Choose external standard method for Ye Zhongsan ginkgo flavonoid composition for the determination.Comparison and analysis the difference between measured values and calculated values.Designed to draw more than a test the feasibility and accuracy of the evaluation method.ResultsMore than a test evaluation method comparison between calculated value and the external standard method to determine value difference was not significant.More than a test evaluation method comparison between calculated value and the external standard method to determine value difference was not significant.ConclusionThe content of three kinds of flavonoids in ginkgo biloba ingredients more than a test evaluation method was used to determine the feasibility and applicability.

Ginkgo biloba;Flavonoids;Quantitative analysis of multi-components by single marker

R284

A

：1008-4118（2017）01-0012-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2017.01.004

2016-09-25