賈國勇

(青海省海南州畜牧獸醫(yī)工作站,青海海南 813099)

禽大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的診斷

賈國勇

(青海省海南州畜牧獸醫(yī)工作站,青海海南 813099)

利用采自貴德縣清源土雞場(chǎng)發(fā)病雞的病料，通過細(xì)菌的分離培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗(yàn)對(duì)病原體、診斷與治療進(jìn)行了研究。結(jié)果：分離出大腸桿菌、沙門氏菌各1株。大腸桿菌對(duì)頭孢曲松與頭孢噻肟中度敏感；沙門氏菌對(duì)頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感；對(duì)頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、多西環(huán)素敏感。

大腸桿菌 沙門氏菌 藥敏試驗(yàn)

2016年10月，貴德縣清源土雞場(chǎng)，患雞突然出現(xiàn)精神沉郁，呆立，垂頭縮頸，兩翅下垂，羽毛松亂，食欲減少，飲欲增加。剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟表面有纖維素性滲出，肝臟表面散在有針尖大小壞死灶，氣囊渾濁，腎臟蒼白。患雞多為15～30日齡，死亡率30%。經(jīng)藥物治療無效，為確定其病因，我們進(jìn)行了病原的分離培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗(yàn)?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料及方法

1.1 主要試劑

MH培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、SS瓊脂、生培養(yǎng)基均購自杭州天和微生物試劑有限公司。藥敏紙片購于北京天壇藥業(yè)生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

將病死雞的肝臟、肺臟，分別劃線接種于麥康凱瓊脂平板和SS瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)18～24h，挑取麥康凱瓊脂平板上紅色菌落接種于伊紅亞甲藍(lán)平板，37℃培養(yǎng)18～24h。對(duì)伊紅亞甲藍(lán)平板疑似大腸桿菌的菌落和SS平板上疑似沙門氏菌菌落進(jìn)行純化。分別挑取純培養(yǎng)，進(jìn)行革蘭氏染色并進(jìn)行形態(tài)及染色特性觀察。

1.3 生化鑒定

將分離疑似沙門氏菌菌株接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)矛醇、尿素、硫化氫、枸櫞酸鹽、蛋白胨水和葡萄糖蛋白胨水等培養(yǎng)基中，置于37℃溫箱培養(yǎng)，每日觀察。將符合大腸桿菌形態(tài)特征的細(xì)菌接種于蔗糖、水楊酸、D-木糖、硫化氫、衛(wèi)矛醇、乳糖、麥芽糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、間-肌醇、尿素酶、七葉苷水解、葡萄糖、山梨醇、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、明膠液化等培養(yǎng)集中。

1.4 分離菌藥物敏感性試驗(yàn)

用接種環(huán)于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上挑取分離純化的大腸桿菌菌落4～5個(gè)，接種于3～5mlLB液體培養(yǎng)基中。37℃培養(yǎng)12h，用生理鹽水稀釋至與0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管濁度相同的濃度。在15min內(nèi)，用貼無菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后均勻涂布于M-H瓊脂平板上，待干。用無菌鑷子夾取不同藥敏紙片，按一定間隔在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm，37℃溫箱培養(yǎng)24h觀察結(jié)果[1，2]。沙門氏菌藥敏試驗(yàn)同大腸桿菌。試驗(yàn)選取藥敏片：阿莫西林、氨芐西林、頭孢曲松、頭孢噻肟、丁胺卡那、慶大霉素、安普霉素、多西環(huán)素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 菌落形態(tài)及染色結(jié)果

分離菌在麥康凱培養(yǎng)基上菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑濕潤。另一種菌落為圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明中間呈黑色、邊緣整齊、中等大小的菌落。將菌落轉(zhuǎn)接在伊紅亞甲藍(lán)培養(yǎng)基上菌落呈紫黑色，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤。革蘭氏染色為陰性的散在小桿菌。在SS培養(yǎng)基上形成無色透明，圓形、微凸、光滑濕潤、邊緣整齊菌落。革蘭氏染色為陰性散在的小桿菌。

2.2 生化鑒定結(jié)果

采取病料，在實(shí)驗(yàn)室做了生化試驗(yàn)，結(jié)果詳見表1和表2。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)分離菌做了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果詳見表3。

由表3可知該次試驗(yàn)分離的大腸桿菌對(duì)于阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素、安普霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、磷霉素、氟苯尼考高度耐藥，對(duì)于多西環(huán)素、紅霉素、丁胺卡那耐藥，對(duì)于頭孢曲松、頭孢噻肟中度敏感。沙門氏菌高度耐受的藥物有阿莫西林、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、磷霉素、恩諾沙星、紅霉素。沙門氏菌對(duì)于氨芐西林耐藥，對(duì)于頭孢曲松、丁胺卡那中度敏感，對(duì)于頭孢噻肟、慶大霉素、安普霉素、多西環(huán)素敏感。

3 結(jié)語

通過實(shí)驗(yàn)室診斷可以確診該雞場(chǎng)是由于大腸桿菌與沙門氏菌混合感染所導(dǎo)致的疾病。藥敏試驗(yàn)顯示大腸桿菌與沙門氏菌均對(duì)于頭孢噻肟、頭孢曲松敏感，所以臨床治療可選用頭孢曲松或頭孢噻肟用于該病的治療。

近幾年通過藥物預(yù)防和治療沙門氏菌所引起的雞白痢、雞傷寒、雞副傷寒等疾病已經(jīng)得到了有效的控制，但是2016年下半年以來沙門氏菌致病現(xiàn)象有增加的趨勢(shì)[3]。通過藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沙門氏菌耐藥性有強(qiáng)的趨勢(shì)，這種現(xiàn)象的發(fā)生與臨床上抗生素濫用有一定的關(guān)系。

表1 疑似大腸桿菌鑒定結(jié)果

表2 疑似沙門氏菌鑒定結(jié)果

表3 藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑（mm）

[1] 陳前進(jìn)，郭維植，曹春遠(yuǎn)，等.5株產(chǎn)硫化氫大腸桿菌0157的分離鑒定[J].中國人獸共患病雜志，2004，20（1）：74-75.

[2] 陳鮮花，李躍龍，余永鵬，等.廣東雞致病性大腸桿菌對(duì)氟哇諾酮類藥物的敏感性分析[J].中國獸藥雜志，2004，38（11）：10-12.

[3] 黨如意，張淑霞.兩種雞大腸桿菌油乳劑滅活苗對(duì)雛雞免疫效果的比較[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2003，11（1）：111-113.