張正瑩吳 潤

(1.甘肅農業(yè)大學,甘肅蘭州 730000; 2.景泰縣畜牧獸醫(yī)局,甘肅白銀 730400)

消毒劑對實驗室空氣中細菌的殺滅作用研究

張正瑩1，2吳 潤1

(1.甘肅農業(yè)大學,甘肅蘭州 730000; 2.景泰縣畜牧獸醫(yī)局,甘肅白銀 730400)

為了驗證菌毒敵液、強力消毒靈液等六種消毒藥對實驗室空氣菌的敏感程度，本實驗采用微管-平板法測定了菌毒敵液、強力消毒靈液等6種消毒藥對實驗室空氣菌的最小抑菌濃度（MIC）分別是，菌毒敵液對實驗室菌的MIC是1/500*8g/ml、中農衛(wèi)康消毒劑MIC為1/500*16g/ml、金碘王（聚維酮碘溶液）MIC為1/500*2g/ml、強力消毒靈液MIC為1/500*128g/ml、威特格瑞液MIC為1/500*128g/ml。由此表明，消毒藥品對實驗室細菌的抑制作用效果有區(qū)別，本實驗對實驗室消毒藥品的選擇有指導意義。

實驗室空氣菌 最小抑菌濃度 抑制作用 消毒藥

生物安全（Biosafety）是一個廣義定義，雖然在很多國際、地區(qū)或國家的法規(guī)和標準中涉及，但目前國際上尚無統(tǒng)一定義。從其涉及的內容分析，主要是指生物（特別是微生物）和基因操作對生命和（或）環(huán)境的影響，可以包括安全（Biosafety）和安保（Biosecurity）兩層含義?？茖W家在實驗室對病原微生物的研究始于18世紀，故而實驗室的消毒滅菌愈來愈重要。隨著各種消毒藥的市場化，實驗室消毒藥的種類也越來越多。二氯異氰尿酸鈉和三氯異氰尿酸同屬氯胺類氯化異氰尿酸類消毒劑，兩者殺菌譜廣，殺菌力強，可殺滅各種微生物，廣泛用于醫(yī)療衛(wèi)生和飲食行業(yè)及水體消毒。有關此兩種消毒劑復方制劑的殺菌效果報道較多，但對兩者作平行比較研究則少見報道。經(jīng)試驗證明，二氯異氰尿酸鈉和三氯異氰尿酸對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌都有很好的殺滅效果，雖然三氯異氰尿酸對細菌繁殖體和真菌殺滅對數(shù)值比二氯異氰尿酸鈉者稍高，但這種差別基本無統(tǒng)計學價值，與相關報道的結果基本一致。近年來，由于人們?yōu)E用抗生素從而使很多細菌產生了耐藥性。由于中藥抗菌的特殊機理，不易產生耐藥性，因此，抗菌中藥引起眾人的關注，逐步成為研究的熱點。

早在20世紀50年代我國醫(yī)藥工作者即開始了中藥抑菌作用與抑菌成分研究，并發(fā)現(xiàn)許多具有抗菌作用的中藥。常規(guī)的藥敏實驗方法：①紙片瓊脂擴散法；②試管稀釋法；③平板稀釋法；④打洞法；⑤挖溝法；⑥微量稀釋法等。然而，這些方法也存在著其缺陷或局限性，因此，我們應根據(jù)實際情況選擇較合適的方法。試管稀釋法[8]是一個比較好的方法，但具有實驗工作量大，操作煩瑣，一個系列稀釋度含藥培養(yǎng)基只能測一種菌，營養(yǎng)要求高的菌無法培養(yǎng)等弊端；打洞法同紙片擴散法，存在藥物擴散問題，又沒有中藥標準紙片，實驗結果難以控制；平板稀釋法只需制兩個系列稀釋度含藥平板，一個稀釋度可同時測多種細菌，操作簡便，結果準確，是一種比較理想的方法，但是必須注意細菌之間交叉感染的問題；微量稀釋法準確可靠，重復性好，且簡便易行，但是結果不易觀察，加顯色劑以后不適用于需要加血的培養(yǎng)基。

1 材料

1.1 藥品

表1 參試藥品表

1.2 細菌

實驗室空氣菌。

1.3 試劑

營養(yǎng)瓊脂，生產廠家：青島市高科技園海博生物科技有限公司。

革蘭氏染液，生產廠家：青島市高科技園海博生物科技有限公司。

普通肉湯培養(yǎng)基，生產廠家：杭州微生物試劑有限公司。

1.4 儀器

表2 參試儀器設備

2 方法

2.1 培養(yǎng)基的制備

2.1.1 普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的制備

30g營養(yǎng)瓊脂加入1000ml超純水，高壓滅菌121℃，15min。放入生物安全柜，當營養(yǎng)瓊脂溫度降到55℃左右時澆平板2～3cm厚。待平板內瓊脂凝固后，冷藏備用[5]。

2.1.2 普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的制備

30g普通肉湯加入1000mL超純水，高壓滅菌121℃，15min，放入生物安全柜，紫外線消毒降溫到室溫冷藏備用。

2.2 試驗藥液的制備

2.2.1 菌毒敵液 在生物安全柜內取10ml滅菌超純水加20μl菌毒敵原液將其作1：500倍稀釋到畜禽房舍及器具消毒濃度，冷藏備用。

2.2.2 中農衛(wèi)康消毒劑 在生物安全柜內取10ml滅菌超純水加20μl菌毒敵原液將其作1：500倍稀釋到畜禽房舍及器具消毒濃度，冷藏備用。

2.2.3 金碘王（聚維酮碘溶液） 在生物安全柜內取10ml滅菌超純水加10μl菌毒敵原液將其作1：1000倍稀釋到養(yǎng)殖場常規(guī)消毒濃度，冷藏備用。

2.2.4 威特格瑞液 在生物安全柜內取10ml滅菌超純水加0.01g菌毒敵原液將其作1：1000倍稀釋到養(yǎng)殖場常規(guī)消毒濃度，冷藏備用。

2.2.5 強力消毒靈液 在生物安全柜內取10ml滅菌超純水加0.01g菌毒敵原液將其作1：1000倍稀釋到飼養(yǎng)場所器具消毒濃度，冷藏備用。

2.2.6 燒堿溶液 在生物安全柜內稱取0.3g燒堿，加滅菌超純水10ml將其配成3%消毒濃度，冷藏備用。

2.3 菌種的準備

取澆好的一個營養(yǎng)瓊脂平板打開放置在實驗室，24h后挑取菌落并用普通營養(yǎng)肉湯做增菌培養(yǎng)，放置恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)18～24h候得原菌液。取試管分別對原菌液用生理鹽水進行二倍比稀釋，用移液器從8號管中取20μl菌液注入平板上，重復做3個平板，并用L棒將其涂勻，培養(yǎng)18～24h查菌落數(shù)，得出原菌液的細菌濃度。將原菌液或稀釋后的菌液用生理鹽水稀釋到所需濃度106cfu/ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 各藥液對試驗菌的最小抑菌濃度（MIC）的測定

在生物安全柜內，采用微管-平板法[4]。每種藥物12支EP管，每個EP管內加入500μl的肉湯，向第1支EP管里加入500μl配好的藥液，混勻，從中吸取500μl加入第2支EP試管[5]，依次類推，直至第11支試管，棄去500μl，12號EP管做陰性對照。1-12號EP管內加入20μl菌液，37℃培養(yǎng)18～24h后，將其分別接種到平板上[8]，37℃再培養(yǎng)18～24h后，得試驗藥物對實驗菌的MIC。

3 試驗結果

通過試驗，可以得出菌毒敵液、中農衛(wèi)康消毒劑、金碘王（聚維酮碘溶液）、威特格瑞液、強力消毒靈液和燒堿溶液的最小抑菌濃度的MIC，記錄于表3。

表3 消毒劑的最小抑菌濃度

4 結語

燒堿溶液對試驗菌的抑制作用明顯，強力消毒靈液和威特格瑞液對實驗室細菌的抑制作用相當，對試驗菌的抑制作用僅次于燒堿，其他消毒藥對某些實驗室細菌的抑制作用不明顯。此結論為實驗室消毒等工作具有指導意義。

[1] 薛廣波主編.現(xiàn)代消毒學[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：408-418.

[2] 鄧金花，吳清平，廖富迎.二氯異氰尿酸鈉與三氯異氰尿酸殺菌效果比較 [J].中國消毒學雜志，2005，23（4）：315.

[3] 邱豫偉，伍冀湘，皮鎮(zhèn)江.酸堿性對含氯消毒劑消毒效果的影響[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2003，13（3）：239.

[4] 李建志.黑龍江省地產中藥抗菌作用實驗研究[J].中醫(yī)藥學報，2005，33（6）：24.

[5] 傅文棟.中草藥及其有效成分體外抗菌抗病毒研究進展[J].中國獸醫(yī)雜志，2006，（5）：66-67.

[6] YakubuM Bello，OdamaLE，Nandita B De.Studies on the Antibact eri-alActivity of the Extract of Stachytarpheta angustifolia[J].Journal of Nanjing Medical university，2003，17（3）：116.

[7] YakubuM Bello，OdamaLE，Nandita B De.Studies on the Antibact eri-alActivity of the Extract of Stachytarpheta angustifolia[J].Journal of Nanjing Medical university，2003，17（3）：116.

[8] 王宏軍，周鐵忠，劉孝剛，等.協(xié)同指數(shù)法篩選銀翹天甘組方的最佳劑量配比[J].動物醫(yī)學進展，2011，32（1）：58-62.