周燕寧，黃河，彭麗慈，羅勇，呂勤，鄧海燕

(深圳市第二人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科1、檢驗(yàn)科2，廣東深圳518000)

慢性阻塞性肺疾病患者血游離態(tài)25-羥基維生素D測(cè)定的臨床意義

周燕寧1，黃河1，彭麗慈1，羅勇2，呂勤1，鄧海燕1

(深圳市第二人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科1、檢驗(yàn)科2，廣東深圳518000)

目的探討游離態(tài)25-羥基維生素D[25(OH)D]測(cè)定在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中的臨床意義。方法對(duì)2014年11月至2015年9月在我院就診的70例吸煙COPD患者和67例吸煙非COPD受試者分別進(jìn)行COPD評(píng)估測(cè)試(CAT)問(wèn)卷、肺功能測(cè)定和6 min步行試驗(yàn)(6MWT)，檢測(cè)血清總25(OH)D、維生素D結(jié)合蛋白(VDBP)及白蛋白，得出游離態(tài)25(OH)D水平。結(jié)果吸煙COPD組患者的一秒鐘用力呼氣量(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC)、CAT評(píng)分、6MWT分別為(1.80±0.49)L、(51±12.3)%、(18.3±4.4)分、(245.3±38.4)m，而吸煙非COPD組分別為(2.75±0.32)L、(90±5.8)%、(1.2±0.3)分、(389.6±80.3)m，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；吸煙COPD組患者的總25(OH)D、VDBP及游離態(tài)25(OH)D水平分別為(51.3±8.9)nmol/L、(5.29±0.68)μmol/L、(12.4±2.2)pmol/L，與吸煙非COPD組[(54.7±10.8)nmol/L、(5.07±0.41)μmol/L、(14.0±2.3)pmol/L]比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；吸煙COPD組患者總25(OH)D與FEV1、FEV1/FVC、6MWT呈正相關(guān)(r=0.327，P=0.006；r=0.391，P=0.001；r=0.385，P= 0.001)，游離態(tài)25(OH)D水平與FEV1、FEV1/FVC、6MWT呈正相關(guān)(r=0.572，P=0.000；r=0.595，P=0.000；r=0.404，P= 0.001)，總25(OH)D、游離態(tài)25(OH)D水平與CAT評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.418，P=0.000；r=-0.432，P=0.000)。游離態(tài)25 (OH)D與FEV1、FEV1/FVC、CAT評(píng)分和6MWT的相關(guān)系數(shù)均高于總25(OH)D。結(jié)論游離態(tài)25(OH)D在評(píng)估COPD患者病情過(guò)程中可能較總25(OH)D更有價(jià)值。

慢性阻塞性肺疾病；游離態(tài)25-羥基維生素D；總25-羥基維生素D；吸煙

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)簡(jiǎn)稱(chēng)慢阻肺，是一種危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病，嚴(yán)重影響患者的生命質(zhì)量，病死率較高，并給患者及其家庭、社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。大量的研究表明，維生素D缺乏與慢阻肺患者的病情嚴(yán)重程度明顯相關(guān)[1]。以往的研究多側(cè)重于維生素D本身對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病的影響，其實(shí)維生素D不是孤立地起作用，它和維生素D結(jié)合蛋白(vitamin D binding protein，VDBP)、維生素D受體等組成一個(gè)嚴(yán)密體系來(lái)維持人體呼吸系統(tǒng)的健康。游離態(tài)25-羥基維生素D [25(OH)D]是總維生素D中真正起作用的部分，臨床上直接測(cè)定游離態(tài)25(OH)D非常困難。本研究通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)慢阻肺患者的血總25(OH)D、維生素D結(jié)合蛋白，由此推算出游離態(tài)25(OH)D，探討游離態(tài)25 (OH)D測(cè)定在慢阻肺患者中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2014年11月至2015年9月在我院就診的吸煙COPD患者和吸煙非COPD受試者分別為70例和67例，均為漢族，吸煙＞15包/年。吸煙COPD組參照2014年版《慢性阻塞性肺疾病全球倡議》[2]納入COPD嚴(yán)重度Ⅱ～Ⅲ級(jí)的穩(wěn)定期患者。吸煙非COPD組為同期體檢的年齡匹配、肺功能正常者。所有研究對(duì)象均排除：存在支氣管哮喘、肺結(jié)核等影響肺功能的疾病、長(zhǎng)期粉塵或有害氣體的職業(yè)暴露、內(nèi)分泌疾病、腫瘤等；4周內(nèi)發(fā)生過(guò)急性發(fā)作、口服或肌注過(guò)維生素D的患者；拒絕簽署知情同意書(shū)、不合作或不能完成研究者。

1.2 COPD評(píng)估測(cè)試(COPD assessment test，CAT)問(wèn)卷采用CAT中文問(wèn)卷對(duì)COPD患者健康狀況進(jìn)行評(píng)估，量表從咳嗽、咳痰、胸悶、爬坡或上一層樓梯的感覺(jué)、家務(wù)活動(dòng)、離家外出信心程度、睡眠和精力等8個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。該評(píng)估檢查者為同一位醫(yī)生，評(píng)估前后不了解受試者的肺功能情況，受試者在安靜環(huán)境獨(dú)立完成。

1.3 肺功能的測(cè)定采用德國(guó)耶格公司生產(chǎn)的MasterScreen肺功能儀，按照ATS/ERS指南[3]的標(biāo)準(zhǔn)程序檢測(cè)FEV1、FVC等肺功能指標(biāo)。

1.4 6min步行試驗(yàn)(6MWT)參照ATS的6MWT指南[4]，在平坦地面劃出30 m的直線距離，兩端各置一座椅，供研究者和受試者使用。受試者沿直線盡自己所能快速行走，直到6 min停止，測(cè)量步行距離。

1.5 血清總25(OH)D、VDBP及白蛋白測(cè)定采用ELISA法測(cè)定血清總25(OH)D、VDBP濃度，二者均嚴(yán)格按照試劑盒(均為R&D Systems，USA)說(shuō)明書(shū)的步驟進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定出的吸光度(A)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再按照曲線擬合法求出對(duì)應(yīng)的直線回歸方程；再根據(jù)各待測(cè)樣本的A值計(jì)算出相應(yīng)標(biāo)本的總25(OH)D、VDBP含量。采用常規(guī)生化方法測(cè)定血白蛋白濃度。

1.6 游離態(tài)25(OH)D的計(jì)算參照文獻(xiàn)方法[5-6]，用總25(OH)D濃度、VDBP濃度、白蛋白濃度，結(jié)合已知總25(OH)D與其攜帶蛋白(VDBP和白蛋白)之間的解離常數(shù)計(jì)算得到游離態(tài)25(OH)D濃度。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者一般資料比較兩組受試者的性別、年齡、BMI、吸煙情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；但在FEV1、FEV1/FVC、CAT評(píng)分、6MWT距離方面，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 兩組受試者總25(OH)D、VDBP、白蛋白和游離態(tài)25(OH)D水平比較吸煙COPD組較非COPD組總25(OH)D水平低，而VDBP水平稍高，游離態(tài)25(OH)D水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組白蛋白水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 COPD組患者的總25(OH)D、游離態(tài)25(OH) D水平與臨床資料相關(guān)性吸煙COPD組患者總25 (OH)D、游離態(tài)25(OH)D水平與FEV1、FEV1/FVC、CAT評(píng)分和6MWT存在直線相關(guān)關(guān)系，其中與FEV1、FEV1/FVC、6MWT呈正相關(guān)，與CAT評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。游離態(tài)25(OH)D與FEV1、FEV1/FVC、CAT評(píng)分和6MWT的相關(guān)系數(shù)均高于總25(OH)D，見(jiàn)表3。

表1 兩組受試者的臨床資料比較()

表1 兩組受試者的臨床資料比較()

組別例數(shù)年齡(歲)BMI(kg/m2)吸煙包年數(shù)FEV1(L)FEV1/FVC(%)CAT評(píng)分6MWT(m) 70 67吸煙COPD組吸煙非COPD組χ2/t值P值性別(例)男65 65女5 2 0.514 0.473 64.8±7.7 63.1±9.1 1.182 0.239 26.1±1.8 25.6±2.7 1.280 0.203 45.4±4.9 43.5±6.7 1.900 0.060 1.80±0.49 2.75±0.32 13.372 0.000 51±12.3 90±5.8 23.564 0.000 18.3±4.4 1.2±0.3 31.736 0.000 245.3±38.4 389.6±80.3 13.509 0.000

表2 兩組受試者總25(OH)D、VDBP、白蛋白和游離態(tài)25(OH)D水平比較()

表2 兩組受試者總25(OH)D、VDBP、白蛋白和游離態(tài)25(OH)D水平比較()

組別吸煙COPD組吸煙非COPD組t值P值例數(shù)70 67總25(OH)D(nmol/L) 51.3±8.9 54.7±10.8 2.015 0.046 VDBP(μmol/L) 5.29±0.68 5.07±0.41 2.280 0.024白蛋白(μmol/L) 615.7±43.6 627.5±46.0 1.541 0.126游離態(tài)25(OH)D(pmol/L) 12.4±2.2 14.0±2.3 4.162 0.000

表3 吸煙COPD組患者的總25(OH)D、游離態(tài)25(OH)D水平與臨床資料相關(guān)性

3 討論

在人們的傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)里，維生素D在調(diào)節(jié)血液中鈣磷動(dòng)態(tài)平衡從而保持機(jī)體良好的神經(jīng)肌肉功能中發(fā)揮著重要作用。25(OH)D被認(rèn)為是最能代表人體維生素D總體水平的生物標(biāo)記物。其實(shí)，維生素D對(duì)于維持呼吸系統(tǒng)的健康也是至關(guān)重要，特別是與COPD的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。Janssens等[7]研究認(rèn)為COPD患者維生素D缺乏，骨質(zhì)疏松易引發(fā)骨折，骨折導(dǎo)致呼吸運(yùn)動(dòng)受限，胸背部疼痛導(dǎo)致呼吸動(dòng)度下降，出現(xiàn)以肺通氣不足為主要表現(xiàn)的肺功能下降。研究認(rèn)為維生素D缺乏的患者更容易合并呼吸道細(xì)菌定植[8]。維生素D可增強(qiáng)抗菌肽表達(dá)，參與對(duì)病毒及細(xì)菌的識(shí)別和清除，抑制炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子釋放，減輕炎癥反應(yīng)[9]。維生素D缺乏時(shí)可導(dǎo)致巨噬細(xì)胞的吞噬功能下降，COPD患者氣道炎癥細(xì)胞持續(xù)存在，肺組織破壞，肺功能下降[10]。抑制單核細(xì)胞分化成樹(shù)突狀細(xì)胞、Th1/Th2表達(dá)失衡及使Treg細(xì)胞活性下調(diào)，使COPD患者出現(xiàn)免疫功能紊亂，促進(jìn)COPD的發(fā)生發(fā)展[11]。Sundar等[12]的研究表明，VDR敲除小鼠MMPs的活性增強(qiáng)，從而導(dǎo)致COPD的發(fā)生發(fā)展。

以往的研究多側(cè)重于維生素D本身對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病的影響，其實(shí)維生素D的生物效應(yīng)僅與游離態(tài)的維生素D(free vitamin D)有關(guān)，而與VDBP攜帶的結(jié)合狀態(tài)的維生素D無(wú)關(guān)[4]。但是臨床上直接測(cè)量游離態(tài)維生素D非常困難，目前對(duì)游離態(tài)維生素的研究多是通過(guò)測(cè)定總25(OH)D濃度、VDBP濃度、白蛋白濃度結(jié)合其解離常數(shù)，通過(guò)數(shù)學(xué)模型計(jì)算得到游離態(tài)25 (OH)D濃度，研究認(rèn)為該方法與直接測(cè)量的游離態(tài)25 (OH)D具有良好的一致性，與直接通過(guò)超濾離心法測(cè)量的游離態(tài)25(OH)D相關(guān)系數(shù)為0.925[6]。本研究示吸煙COPD組較非COPD組游離態(tài)25(OH)D水平明顯降低，提示游離態(tài)25(OH)D水平降低可能與COPD發(fā)生有關(guān)。

本研究顯示吸煙COPD組患者總25(OH)D、游離態(tài)25(OH)D水平與FEV1、FEV1/FVC、CAT評(píng)分和6MWT存在直線相關(guān)關(guān)系，提示總25(OH)D和游離態(tài)25(OH)D對(duì)COPD病情評(píng)估有重要臨床意義。游離態(tài)25(OH)D與FEV1、FEV1/FVC、CAT評(píng)分和6MWT相關(guān)系數(shù)明顯高于總25(OH)D，提示游離態(tài)25(OH)D可能較總25(OH)D與COPD患者肺功能、活動(dòng)能力、自覺(jué)癥狀、心理狀態(tài)等方面相關(guān)性更好。

綜上所述，游離態(tài)25(OH)D的檢測(cè)可能比單純測(cè)定總25(OH)D更有臨床價(jià)值。游離態(tài)25(OH)D是否能替代總25(OH)D成為衡量慢阻肺患者維生素D缺乏的新標(biāo)準(zhǔn)，為慢阻肺患者維生素D缺乏的個(gè)體化治療提供指導(dǎo)仍需進(jìn)一步探討。

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Clinical significance of the determination of serum free 25-hydroxyvitamin D in patients with chronic obstructive pulmonary disease.

ZHOU Yan-ning1,HUANG He1,PENG Li-ci1,LUO Yong2,LV Qin1,DENG Hai-yan1.Departmentof Respiratory Medicine1,Department of Clinical Laboratory2,the Second People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518000, Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the clinical significance of free 25-hydroxyvitamin D[25(OH)D]in patients with chronic obstructive pulmonary disease(COPD).MethodsFrom November 2014 to September 2015,70 smoking COPD patients in our hospital(smoking COPD group)and 67 smoking non-COPD subjects(smoking non-COPD group) were recruited in the study.COPD assessment test(CAT),lung function and 6 minute walk test(6MWT)were performed in the two groups.The levels of serum total 25(OH)D,vitamin D binding protein(VDBP)and albumin were measured, and the free 25(OH)D levels were calculated.ResultsForced expiratory volume in one second(FEV1),forced expiratory volume in one second/forced vital capacity(FEV1/FVC),CAT score and 6MWT were(1.80±0.49)L,(51±12.3)%, (18.3±4.4)and(245.3±38.4)m in the smoking COPD group,as compared with(2.75±0.32)L,(90±5.8)%,(1.2±0.3)and (389.6±80.3)m in the smoking non-COPD group(P＜0.05).The levels of 25(OH)D,VDBP and free 25(OH)D were (51.3±8.9)nmol/L,(5.29±0.68)μmol/L and(12.4±2.2)pmol/L in the smoking COPD group,as compared with(54.7± 10.8)nmol/L,(5.07±0.41)μmol/L and(14.0±2.3)pmol/L in the smoking non-COPD group(P＜0.05).In smoking COPD group,total 25(OH)D was positively related with FEV1,FEV1/FVC,6MWT(r=0.327,P=0.006;r=0.391,P=0.001;r= 0.385,P=0.001),and free 25(OH)D was positively related with FEV1,FEV1/FVC,6MWT(r=0.572,P=0.000;r=0.595, P=0.000;r=0.404,P=0.001),while total 25(OH)D and free 25(OH)D was negatively correlated with CAT scores (r=-0.418,P=0.000;r=-0.432,P=0.000).The correlation coefficients of free 25(OH)D with FEV1,FEV1/FVC,CAT and 6MWT were higher than those of total 25(OH)D.ConclusionThe free 25(OH)D may be more valuable in the assessment of COPD patients in the course of the disease than the total 25(OH)D.

Chronic obstructive pulmonary disease(COPD);Free 25-hydroxyvitamin D;Total 25-hydroxyvitamin D;Smoking

R563

A

1003—6350（2017）07—1093—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.07.022

2016-09-28)

2014年廣東省深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：JCYJ20140414170821283)

黃河。E-mail:zyn_1025@sina.com