清源

摘要：采用乙醇浸提法提取苦蕎茶中抗氧化物質(zhì)，測定其中黃酮類物質(zhì)含量，并通過體外抗氧化評價方法研究其抗氧化能力。結(jié)果表明：苦蕎茶的乙醇提取物具有抗氧化活性，并且與總黃酮含量呈正相關(guān)性，與對照品 VC 標準溶液的抗氧化趨勢一致。而苦蕎茶總黃酮的總抗氧化能力和清除羥基自由基能力，與對照品VC差距較大。

關(guān)鍵詞：苦蕎茶；乙醇提取物；總黃酮；抗氧化

目前，在涼山州本地，以苦蕎為原料從事苦蕎系列食品加工生產(chǎn)的企業(yè)眾多，產(chǎn)品形式以苦蕎茶等最多也最為常見，而產(chǎn)品宣傳著力點均涉及其抗氧化性能，有著主導(dǎo)市場消費的重要作用。因此，開展苦蕎茶抗氧化活性研究，對于產(chǎn)品的進一步推廣和應(yīng)用有著重要的現(xiàn)實意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

蘆丁標準品（A0103-20 mg，純度≥98%UV，批號：MUST-14082710）；沒食子酸標準品，成都科龍化工試劑廠；Folin-Ciocalteu試劑；DPPH（1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl），Sigam公司；總抗氧化能力測定試劑盒、羥自由基試劑盒，南京建成生物工程研究所；95%乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、碳酸鈉等均為分析純。

1.2 試驗設(shè)備

SHA-C水浴恒溫振蕩器，津達公司；722型可見分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司；抽濾裝置，津騰公司；KQ5200D型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；JD400-3電子分析天平，ESJ210-4B電子天平，沈陽龍騰電子有限公司。

1.3 方法

1.3.1 總黃酮含量的測定。采用NaNO2-Al（NO3）3方法測定[1，2]。以蘆丁為標樣，在510 nm波長處測定吸光度。以吸光度值為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線（如圖1所示），建立回歸方程：Y=9.5982 x-0.0007，相關(guān)系數(shù) r=0.9991。

1.3.2 待測溶液制備。準確稱取苦蕎茶樣品試樣2.000 g（設(shè)3次重復(fù)），直接置于150 mL具塞三角瓶中，加入80%乙醇60 mL，70℃恒溫水浴條件下，浸提時間4 h，趁熱抽濾，濾液定容至50 mL。

1.3.3 總抗氧化能力的測定。依照總抗氧化能力測定的試劑盒說明書進行操作。采用722型分光光度計于520 nm處測定吸光度，以Vc（抗壞血酸）為對照，評價各苦蕎茶的總抗氧化活性[3]?？寡趸芰挝欢x為：在 37℃下，每分鐘每毫升測定液使反應(yīng)體系吸光度增加 0.01 為一個總抗氧化能力單位。每個質(zhì)量濃度測定重復(fù)3次。

1.3.4 DPPH自由基清除率的測定。參考Sahreen等人方法并作適當調(diào)整。將50 mg DPPH溶于100 mL甲醇溶液中，DPPH儲備液于冰箱中保存，用時稀釋100倍為工作液。2 mLDPPH工作液與2 mL不同質(zhì)量濃度的苦蕎茶總黃酮提取物反應(yīng)30 min，517 nm處測定吸光值。以2 mLDPPH工作液與2 mL甲醇溶液為對照反應(yīng)為對照。樣品對DPPH清除率（%）=A對照-A樣品/A對照×100%。

1.3.5 羥基自由基清除率的測定。依照羥自由基測定試劑盒的說明書進行操作。采用722型分光光度計于550 nm處測定吸光度，以Vc為對照。將苦蕎茶總黃酮溶液用80%乙醇稀釋成0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2、2.25 mg/mL測定液，每個質(zhì)量濃度測定重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦蕎茶乙醇提取物總黃酮含量

黃酮類化合物是苦蕎最主要的成分，是苦蕎中最重要的生物活性物質(zhì)，具有很強的抗氧化作用。因此，研究苦蕎茶中黃酮類物質(zhì)的含量，是進一步探明產(chǎn)品功能的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.2 苦蕎茶總黃酮對DPPH的清除效果

由圖3可知，Vc和苦蕎茶樣品均有較好的清除DPPH的能力。其中，Vc質(zhì)量濃度達0.07 mg/mL后清除率基本不變?yōu)?2.73%。苦蕎茶總黃酮濃度在0.005-0.09 mg/mL范圍內(nèi)，清除率隨總黃酮質(zhì)量濃度的增加而增加。當總黃酮濃度達0.1 mg/mL時，樣品5和樣品9對DPPH清除率分別達到91.46%和91.74%，而樣品8對亦可達到72.58%。

3 結(jié)論

苦蕎茶總黃酮的總抗氧化能力與其質(zhì)量濃度都呈正相關(guān)性，隨著質(zhì)量濃度增大，總抗氧化能力也增加，這與Vc 標準溶液的趨勢一致。但是，與 0.10 mg/mL 質(zhì)量濃度條件下Vc總抗氧化力相差較大。

苦蕎茶總黃酮清除DPPH自由基能力與其質(zhì)量濃度都呈正相關(guān)性，且各苦蕎茶樣品對DPPH自由基清除率均可達70%以上。其中，樣品5和樣品9在總黃酮濃度達0.1 mg/mL時，與對照品Vc清除率基本一致可達90%以上。

苦蕎茶總黃酮清除羥基自由基能力與其質(zhì)量濃度都呈正相關(guān)性。在0.75-2.25 mg/mL范圍內(nèi)Vc對羥基自由基清除率可達96%以上，苦蕎茶樣品清除能力僅為30%-40%。

參考文獻

[1]曠春桃，李湘洲，汪玉霞，等. 大葉冬青葉中總黃酮測定方法和提取工藝研究[J]. 食品科學(xué)，2009，30（6）：49-51.

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[3]張 濱，栗登權(quán)，曾 丹，等. 響應(yīng)面法提取沙棘抗氧化成分工藝優(yōu)化[J]. 食品工業(yè)，2013 （5）： 75 -79.