鞏慧穎

真菌毒素就是一種新型真菌代謝產(chǎn)物的代名詞，它的毒性非常大，污染范圍也比較廣泛，主要依附于一些糧油類農(nóng)產(chǎn)品中。從全球范圍來看，每年大概有1/4的農(nóng)作物受到真菌毒素的危害，還有一少部分的農(nóng)副產(chǎn)品因?yàn)槲廴緡?yán)重而不能食用，因此我們需要認(rèn)真對待真菌毒素的檢測工作。

材料與方法

樣品采集

通過認(rèn)真分析不同種類真菌毒素的污染特征，我們從不同地區(qū)抽取了一些糧油產(chǎn)品作為檢測對象，這樣也能讓檢測結(jié)果更具說服力。

主要儀器與試劑

在本文的檢測過程中主要采用以及Waters2695高效液相色譜儀、粉碎機(jī)、不含熒光劑的玻璃纖維濾紙、高速均質(zhì)器、免疫親和柱等，其中黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮免疫親和柱都屬于ToxinFast產(chǎn)品。

AflaTest顯色劑；玉米赤霉烯酮顯色劑；甲醇；乙腈；苯；冰乙酸；Tween-20溶液；PBS緩沖液；3種真菌毒素檢測質(zhì)控樣品全部為國家計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心產(chǎn)品。

黃曲霉毒素B1測定

黃曲霉毒素B1提取與凈化。隨機(jī)選取50g研磨好的樣品備用，在攪拌容器中加10gNaCl，然后按4：1的比例加入總量為100ml的甲醇/水，進(jìn)行快速攪拌1min。然后把提取到的物質(zhì)進(jìn)行過濾，濾液放到事先準(zhǔn)備好的容器中。移取10ml上步濾液于干凈容器中，用40ml純水稀釋濾液，混勻。將稀釋液通過玻璃微纖維濾紙?jiān)龠^濾，收集濾液。取10ml濾液以1～2滴·s-1的流速全部通過免疫親和柱，直至空氣進(jìn)入到親和柱中。將10ml純水以1～2滴·s-1的流速全部通過親和柱直至空氣進(jìn)入柱中，棄去淋洗液（重復(fù)該步驟1次）。用1mlHPLC級甲醇以1～2滴·s-1的流速洗脫親和柱，收集全部洗脫液于玻璃測試瓶中。

熒光檢測與讀數(shù)。我們應(yīng)該把新配置的AflaTest顯色劑加入1ml到測試容器中，完全混合好后在最短的時間內(nèi)放到標(biāo)好的熒光記中讀取數(shù)值，這種檢測方法的檢測限為0.1μg·kg-1。

赭曲霉毒素A測定

赭曲霉毒素A提取與凈化。赭曲霉毒素A的提取和初步的過濾工作與黃曲霉毒素的操作相同，但是不用添加氯化鈉，然后把10ml初步過濾后的溶液加入40mlPBS緩沖液進(jìn)行稀釋，混合均勻后利用玻璃微纖維濾紙?jiān)俅芜^濾，然后收集濾液。量取上步10ml濾液，以1～2滴·s-1的流速全部通過OchraTest親和柱，直至空氣進(jìn)入到親和柱中。將10mlPBS緩沖液以2滴·s-1的流速通過親和柱，將10ml純水以2滴·s-1的流速通過親和柱，直至空氣進(jìn)入到親和柱中。用1.5mlOchraTest洗脫液以1～2滴·s-1的流速淋洗親和柱，將洗脫液全部收集于玻璃測試管中。

熒光檢測與讀數(shù)。等到洗脫液混合均勻之后，在最短的時間內(nèi)把測試管放在標(biāo)記號的熒光計(jì)中讀取數(shù)值，檢測方法的檢測限為0.47μg·kg-1。

玉米赤霉烯酮測定

玉米赤霉烯酮提取與凈化。隨機(jī)選取四十克研磨好的樣品放到不銹鋼容器中備用，然后按4：1的比例加入總量為100ml的甲醇/水，持續(xù)高速攪拌兩分鐘，然后用玻璃纖維濾紙進(jìn)行過濾，量取10ml的濾液，用40ml1×0.2%吐溫/PBS緩沖液進(jìn)行稀釋，用玻璃微纖維濾紙進(jìn)行二次過濾。

熒光檢測與讀數(shù)。把1ml的ZearaTest顯色劑放到測試容器中進(jìn)行均勻混合，放到已經(jīng)標(biāo)記好的熒光計(jì)中讀取數(shù)值，這種檢測方法的檢出限為10mg·kg-1。

結(jié)果與分析

經(jīng)過相應(yīng)的檢測可以得知，三種真菌毒素的快速檢測方法都符合具體的檢測需求，并且快速檢測方法具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性能，檢測結(jié)果更加接近真實(shí)狀況，本文的快速檢測方法中，黃曲霉毒素B1的檢測限為0.1μg·kg-1，赭曲霉毒素A的檢測限0.47μg·kg-1，玉米赤霉烯酮檢測限為0.01mg·kg-1。根據(jù)以上分析結(jié)果，3種真菌毒素免疫熒光快速檢測方法靈敏度全部符合我國最大限量的檢測要求。

討論

針對糧油類農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素的檢測采用的是免疫親和凈化-熒光的快速檢測方法，這種檢測方法檢測到的結(jié)果更加準(zhǔn)確，檢測過程中的操作更加簡便，檢測所需的時間更短，一種真菌毒素的檢測時間大概在20-30分鐘之內(nèi)，這種檢測方法的靈敏程度符合國家最大限量標(biāo)準(zhǔn)需求。通過相關(guān)的分析不難看出，快速檢測技術(shù)具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，能夠滿足我國糧油類農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素的安全性能檢測要求。伴隨著我國農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)藥物使用量的增加，生態(tài)環(huán)境的進(jìn)一步惡化，真菌毒素對糧油類農(nóng)產(chǎn)品的污染會越來越嚴(yán)重，因此不斷加強(qiáng)糧油類農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素污染的控制力度勢在必行，食品安全監(jiān)督工作應(yīng)該得到人們應(yīng)有的重視。