楊光忠, 石 寬, 甘 飛，吳士筠，楊文婷，陳 玉

(1 中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074；2 中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，武漢 430074；3 武漢工商學(xué)院 環(huán)境與生物工程學(xué)院，武漢 430065 )

飛揚(yáng)草中酚類成分的分離與鑒定

楊光忠1, 石 寬1, 甘 飛2，吳士筠3，楊文婷3，陳 玉2

(1 中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074；2 中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，武漢 430074；3 武漢工商學(xué)院 環(huán)境與生物工程學(xué)院，武漢 430065 )

為研究飛揚(yáng)草中的酚類化學(xué)成分，利用溶劑提取法，正、反相硅膠柱和半制備高效液相色譜法對其進(jìn)行了分離純化，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜技術(shù)對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定.從飛揚(yáng)草乙酸乙酯提取物中分離得到了12個(gè)酚類化合物，分別鑒定為木犀草素(1)、槲皮素(2)、3′-甲基楊梅黃酮 (3)、松脂酚(4)、4-ketopinoresinol (5)、3,4-二羥基苯甲酸 (6)、咖啡酸(7)、香草酸(8)、丁香酸(9)、沒食子酸乙酯(10)、橙黃胡椒酰胺乙酸酯(11)、橙黃胡椒酰胺(12)，其中化合物3、5、8、10～12為首次從飛揚(yáng)草中分離得到.

飛揚(yáng)草；化學(xué)成分；酚類化合物

飛揚(yáng)草(EuphorbiahirtaL.)為大戟科大戟屬植物，一年生草本植物，是我國傳統(tǒng)中藥，廣泛分布于我國南部和西南的福建、廣西、廣東等地區(qū)，資源豐富.飛揚(yáng)草全草入藥，可用于治療痢疾、濕疹、血尿、腸胃炎等疾病[1].該植物含有三萜、二萜、甾體、香豆素、木脂素、黃酮和酚類等結(jié)構(gòu)類型的化合物，具有抗過敏、抗焦慮、抗炎、鎮(zhèn)靜止痛、抗瘧、抗氧化和抗癌等多種藥理作用[2-4].其中的酚類化合物為植物的次生代謝產(chǎn)物，具抗氧化、抗突變、抗炎、防輻射、降血壓、抑菌等活性[5].

為了進(jìn)一步闡明飛揚(yáng)草的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本文采取系統(tǒng)溶劑提取法、正相和反相硅膠柱色譜法、半制備高效液相色譜法等現(xiàn)代分離技術(shù)，對飛揚(yáng)草的化學(xué)成分進(jìn)行了分離和純化，得到了12個(gè)酚類化合物，經(jīng)波譜鑒定其結(jié)構(gòu)分別為木犀草素 (1)、槲皮素(2)、3′-甲基楊梅黃酮 (3)、松脂酚(4)、4-ketopinoresinol (5)、3,4-二羥基苯甲酸 (6)、咖啡酸(7)、香草酸(8)、丁香酸(9)、沒食子酸乙酯(10)、橙黃胡椒酰胺乙酸酯(11)、橙黃胡椒酰胺(12).

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

飛揚(yáng)草購于廣西南寧，由廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院滕紅麗研究員鑒定為大戟科大戟屬植物飛揚(yáng)草(EuphorbiahirtaL.)，硅膠(200～300目)和硅膠H(青島海洋化工廠)，ODS硅膠(50 μm，日本YMC)，石油醚、乙酸乙酯、甲醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑)，乙腈(色譜純，昌泰興業(yè)).

全數(shù)字化超導(dǎo)核磁共振儀(AVANCEⅢ-500Hz，德國Bruker)，高效液相色譜儀(Ultimate 3000半制備型，美國戴安，VWD、DAD檢測器)，半制備型色譜柱(YMC-Pack ODS-A, 250 mm×10 mm, 5 μm).

1.2 提取與分離

4.6 kg干燥飛揚(yáng)草全草粉碎后用95%乙醇室溫浸泡3次，每次24 h，提取液真空抽濾后減壓旋蒸得乙醇提取物(160 g).乙醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取得石油醚提取物(40 g)、乙酸乙酯提取物(55 g)、正丁醇提取物(35 g) 和水提取物(20 g).合并石油醚和乙酸乙酯提取物，經(jīng)正相硅膠柱(200～300目) 層析分離，用石油醚-乙酸乙酯(體積比19︰1→0︰1) 梯度洗脫，TLC檢測后合并相同組分，共收集到5個(gè)組分(Fr.1～Fr.5).Fr.4經(jīng)反相硅膠柱(50 μm) 分離，共收集到19個(gè)組分(Fr.4.A～Fr.4.S).Fr.4.I(60.5 mg) 經(jīng)HPLC [流動(dòng)相V(乙腈)︰V(水)= 33︰67]分離得到化合物1(4.5 mg)、2(3.0 mg)、3(1.8 mg).Fr.4.G(79.5 mg)經(jīng)HPLC[流動(dòng)相V(乙腈)︰V(水)= 23︰77]分離得到化合物4(2.8 mg)、5(1.1 mg).Fr.4.C(144.8 mg)經(jīng)HPLC[流動(dòng)相V(乙腈)︰V(水)= 14.8︰85.2]分離得到化合物6(4.6 mg)、7(4.9 mg)、8(3.1 mg)、9(4.3 mg)、10(9.4 mg).Fr.3經(jīng)反相硅膠柱(50 μm) 分離，共收集到21個(gè)組分(Fr.3.A～Fr.3.U).Fr.3.M結(jié)晶得到晶體A.晶體A甲醇溶解后經(jīng)HPLC[流動(dòng)相V(乙腈)︰V(水)= 60︰40]分離得到化合物11(16.1 mg).Fr.4.K(150.5 mg) 經(jīng)硅膠H色譜柱分離，共收集到4個(gè)組分(Fr.4.K.I～Fr.4.K.IV).Fr.4.K.Ⅲ(100.0 mg) 經(jīng)HPLC[流動(dòng)相V(乙腈)︰V(水)= 45︰55]分離得到化合物12(6.2 mg).

圖1 化合物1～12的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of compounds 1-12

2 結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針狀結(jié)晶，分子式為C15H10O6.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH:6.52(1H, s, H-3), 6.19(1H, d,J=2.0 Hz, H-6) , 6.42(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 7.36(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.88(1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 7.37(1H, dd,J=8.5,2.0 Hz, H-6′);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 183.9(C-4), 166.4(C-7), 166.1(C-2), 163.3(C-9), 159.5(C-5), 151.1(C-4′), 147.2(C-3′), 123.8(C-1′), 120.4(C-6′), 117.0(C-5′), 114.3(C-2′), 105.4(C-10), 104.0(C-3), 100.3(C-6), 95.2(C-8).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的木犀草素基本一致[6]，故鑒定化合物1為木犀草素.

化合物2：黃色固體，分子式為C15H10O7.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH: 6.16(1H, d,J=1.5 Hz, H-6) , 6.38(1H, d,J=1.5 Hz, H-8), 7.72(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.87(1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 7.62(1H, dd,J=8.5,1.5 Hz, H-6′);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 177.5(C-4), 165.7(C-7), 162.7(C-5), 158.4(C-9), 148.9(C-4′), 148.1(C-2), 146.4(C-3′), 137.5(C-3), 124.3(C-1′), 121.8(C-6′), 116.4(C-2′), 116.2(C-5′), 104.7(C-10), 99.4(C-6), 94.6(C-8).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的槲皮素基本一致[7,8]，故鑒定化合物2為槲皮素.

化合物3：黃色固體，分子式為C16H12O8.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH: 6.40(1H, d,J=2.0 Hz, H-6) , 6.55(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 7.30(1H, s, H-2′), 7.13(1H, s, H-6′), 3.84(3H, s, 3′-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的3′-甲基楊梅黃酮基本一致[9]，故鑒定化合物3為3′-甲基楊梅黃酮.

化合物4：白色固體，分子式為C20H22O6.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH: 6.94(2H, d,J=2.0 Hz, H-2′, 2″), 6.76(2H, d,J=8.0 Hz, H-5′, 5″), 6.80(2H, dd,J=8.0, 2.0 Hz, H-6′, 6″), 4.70(2H, d,J=4.0 Hz, H-2, 6), 3.13(2H, m, H-1, 5), 3.83(2H, dd,J=9.0, 3.5 Hz, Ha-8, Ha-4), 4.22(2H, dd,J=9.0, 7.0 Hz, Hb-8, Hb-4), 3.85(6H, s, 3′, 3″-OCH3);13C NMR(125 MHz, CD3OD) δc : 149.3(C-3′, 3″), 147.5(C-4′, 4″), 133.9(C-1′, 1″), 120.2(C-6′, 6″), 116.2(C-5′, 5″), 111.1(C-2′, 2″), 87.7(C-2, 6), 72.8(C-4, 8), 56.5(3′, 3″-OCH3), 55.5(C-1, 5).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的松脂酚基本一致[10]，故鑒定化合物4為松脂酚.

化合物5：白色固體，分子式為C20H20O7.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH: 3.34(1H, m, H-1), 5.22(1H, d,J=4.0 Hz, H-2), 3.66(1H, dd,J=9.0, 4.0 Hz, H-5), 5.38(1H, d,J=4.0 Hz, H-6), 4.02(1H, dd, J =9.5, 4.5 Hz, Ha-8), 4.28(1H, m, Hb-8), 6.77～6.96(6H, m, Ar—H), 3.85(3H, s, 3′-OCH3), 3.86(3H, s, 3″-OCH3);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 179.8(C-4), 149.5(C-4″), 149.3(C-4′), 148.3(C-3″), 147.6(C-3′), 133.3(C-1″), 132.6(C-1′), 119.9(C-6″), 119.6(C-6′), 116.6(C-5″), 116.3(C-5′), 110.8(C-2″), 110.7(C-2′), 87.3(C-6), 85.2(C-2), 74.0(C-8), 56.6(3′-OCH3), 56.5(3″-OCH3), 51.2(C-5), 46.8(C-1).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的4-ketopinoresinol基本一致[11]，故鑒定化合物5為4-ketopinoresinol.

化合物6：白色針狀晶體，分子式為C7H6O4.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH:7.40(1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.76(1H, d,J=8.0 Hz, H-5) , 7.39(1H, dd,J=8.0， 2.0 Hz, H-6);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 170.6(—COOH), 151.6(C-4), 146.2(C-3), 124.1(C-6), 123.5(C-1), 117.8(C-2), 115.9(C-5).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的3,4-二羥基苯甲酸基本一致[12]，故鑒定化合物6為3,4-二羥基苯甲酸.

化合物7：黃色針狀結(jié)晶，分子式為C9H8O4.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH:7.00(1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.75(1H, d,J=8.0 Hz, H-5) , 6.90(1H, dd,J=8.0， 2.0 Hz, H-6), 7.49(1H, d,J=16.0 Hz, H-7), 6.19(1H, d,J=16.0 Hz, H-8);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 171.4(—COOH), 149.6(C-4), 147.0(C-3), 147.0(C-7), 128.0(C-1), 123.0(C-6), 116.6(C-2), 116.0(C-5), 115.2(C-8).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的咖啡酸基本一致[13]，故鑒定化合物7為咖啡酸.

化合物8：白色針狀結(jié)晶，分子式為C8H8O4.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH:7.53(1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.81(1H, d,J=8.5 Hz, H-5) , 7.52(1H, dd,J=8.5,2.0 Hz, H-6), 3.87(3H, s,—OCH3);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 170.4(—COOH), 152.7(C-4), 148.8(C-3), 125.3(C-6), 123.4(C-1), 115.9(C-2), 113.9(C-5), 56.5(—OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的香草酸基本一致[14]，故鑒定化合物8為香草酸.

化合物9：白色針狀結(jié)晶，分子式為C9H10O5.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH:7.31(2H, s, H-2, 6), 3.88(6H, s, 3-OCH3, 5-OCH3);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 170.7(—COOH), 148.9(C-3, 5), 141.6(C-4), 122.7(C-1), 108.4(C-2, 6), 56.9(3-OCH3, 5-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的丁香酸基本一致[15]，故鑒定化合物9為丁香酸.

化合物10：白色固體，分子式為C9H10O5.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH:7.01(2H, s, H-2, 6), 4.23(2H, q,J=7.0 Hz, —OCH2—), 1.30(3H, t,J=7.0 Hz, —CH3);13C NMR(125 MHz, MeOD)δc: 168.7(C=O), 146.6(C-3, 5), 139.5(C-4), 121.8(C-1), 110.1(C-2, 6), 61.8(—OCH2—), 14.8(—CH3).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的沒食子酸乙酯基本一致[16]，故鑒定化合物10為沒食子酸乙酯.

化合物11：白色固體，分子式為C27H28O4N2.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH: 1.99(3H, s,—OAc), 3.88(1H, dd,J=11.0, 6.0 Hz, Ha-1), 3.96(1H, dd,J=11.0, 4.5 Hz, Hb-1), 4.29(1H, m, H-2), 4.77(1H, m, H-5), 3.11(1H, dd,J=14.0, 7.0 Hz, Ha-8), 2.98(1H, dd,J=13.5, 8.5 Hz, Hb-8), 2.84(1H, dd,J=14.0, 6.5 Hz, Ha-9), 2.77(1H, dd,J=14.0, 8.0 Hz, Hb-9), 7.05～7.75(15H, m, Ar-H);13C NMR(125 MHz, MeOD)δc: 173.5(—OAc), 172.8(C-4), 170.1(C-7), 139.0(C-1?), 138.6(C-1″), 135.4(C-1′), 133.0(C-4′), 130.5(C-3″, 5″), 130.4(C-2?, 6?), 129.7(C-2″, 6″), 129.6(C-3′, 5′, 3?, 5?), 128.6(C-4″), 128.0(C-4?), 127.7(C-2′, 6′), 66.3(C-1), 56.8(C-5), 51.3(C-2), 39.1(C-8), 38.1(C-9), 20.9(—OAc).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的橙黃胡椒酰胺乙酸酯基本一致[17]，故鑒定化合物11為橙黃胡椒酰胺乙酸酯.

化合物12：白色固體，分子式為C25H26O3N2.1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH: 4.78(1H, m, H-5), 3.14(1H, dd,J=13.5, 6.0 Hz, Ha-8), 2.96(1H, dd,J=13.5, 9.0 Hz, Hb-8), 4.06(1H, m, H-2), 2.90(1H, dd,J=13.5, 6.0 Hz, Ha-9), 2.70(1H, dd,J=13.5, 8.0 Hz, Hb-9), 3.42(2H, m, H-1), 7.00～7.70(15H, m, Ar-H);13C NMR(125 MHz, CD3OD)δc: 173.4(C-4), 170.1(C-7), 139.8(C-1″), 138.8(C-1?), 135.4(C-1′), 133.0(C-4′), 130.5(C-3″, 5″), 130.5(C-3?, 5?), 129.6(C-2″, 6″), 129.6(C-2?, 6?), 129.5(C-2′, 6′), 128.6(C-4″), 127.9(C-3′, 5′), 127.4(C-4?), 64.0(C-1), 56.8(C-5), 54.4(C-2), 39.0(C-8), 38.0(C-9).上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的橙黃胡椒酰胺基本一致[18]，故鑒定化合物12為橙黃胡椒酰胺.

3 結(jié)語

對飛揚(yáng)草進(jìn)行了系統(tǒng)分離，得到12個(gè)酚類化合物，分別鑒定為木犀草素(1)、槲皮素(2)、3′-甲基楊梅黃酮(3)、松脂酚(4)、4-ketopinoresinol (5)、3,4-二羥基苯甲酸(6)、咖啡酸(7)、香草酸(8)、丁香酸(9)、沒食子酸乙酯(10)、橙黃胡椒酰胺乙酸酯(11)、橙黃胡椒酰胺(12).其中，化合物3、5、8、10～12為首次從飛揚(yáng)草中分離得到，為飛揚(yáng)草的開發(fā)和研究工作提供了一定的依據(jù).

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Isolation and Identification of Phenolic Chemical Constituents fromEuphorbiahirtaL.

YangGuangzhong1,ShiKuan1,GanFei2,WuShijun3,YangWenting3,ChenYu2

(1 School of Pharmaceutical Science，South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074, China;2 College of Chemistry and Materials Science，South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074,China;3 College of Environmental and Biological Engineering, Wuhan Technology and Business University, Wuhan 430065,China)

To study the phenolic chemical constituents ofEuphorbiahirtaL., the chemical components were isolated and purified by solvent extraction, followed by normal and reverse phase silica gel column chromatography and semi-preparative HPLC.The structures of the isolated compounds were elucidated on the basis of chemical and spectroscopic analysis.Twelve compounds were isolated from the ethyl acetate extract ofEuphorbiahirtaL.and were identified as luteolin (1), quercetin(2), larycitrin(3), pinoresinol(4), 4-ketopinoresinol (5), 3, 4-dihydroxy-benzoic acid (6), caffeic acid(7), vanilic acid(8), syringate(9), ethyl gallate(10), aurantiamide acetate(11), aurentiamide(12).Among these, compounds 3, 5, 8, 10-12 were isolated from this plant for the first time.

EuphorbiahirtaL.;chemical constituents;phenolic constituents

2016-10-22

楊光忠(1968-), 男, 教授, 博士, 研究方向:天然藥物化學(xué), E-mail: yanggz888@126.com

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31370379)

Q629;R914.4

A

1672-4321(2017)01-0043-04