趙子臻

摘 要：本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對復(fù)方青霉素膠囊劑中的氨芐青霉素的進(jìn)行了含量測定。方法：采用迪馬C18鉆石色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相，檢測波長為230nm，流速為1.0ml/min。氨芐青霉素在50～800μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。氨芐青霉素平均回收率分別為99.3%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方青霉素膠囊劑中氨芐青霉素的含量測定。關(guān)鍵詞：復(fù)方青霉素膠囊劑；含量；測定

復(fù)方青霉素膠囊劑由氨芐青霉素和鄰氯青霉素組成。氨芐青霉素為廣譜半合成青霉素，毒性極低，對草綠色鏈球、溶血性鏈球菌、腸球菌有較強(qiáng)的抗菌作用。氨芐青霉素主要用于治療由敏感的金葡菌、溶血性鏈球菌、淋球菌、百日咳桿菌、流感桿菌、痢疾桿菌等引起的感染性疾?。蝗缥改c炎及消化道感染（肝、膽感染性疾患、急慢性胃腸炎、菌痢、傷寒及副傷寒等）、呼吸道感染（肺炎、急慢性支氣管炎、百日咳等）、泌尿到感染（淋病、尿道炎、膀胱炎等）、軟組織感染等。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對復(fù)方青霉素膠囊劑中的氨芐青霉素的進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：XSYF-D實(shí)驗(yàn)室廢水處理設(shè)備（北京湘順源科技有限公司）；ZXTA-20雙極反滲透實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（北京卓信博澳儀器有限公司）；實(shí)驗(yàn)室用高純水制備器（北京科譽(yù)興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；FA1204CFAC型全自動內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；HN超聲波清洗機(jī)加熱型（上海汗諾儀器有限公司）；DK-S24電熱恒溫水浴鍋（上海五相儀器儀表有限公司）；STI-501Plus梯度高效液相色譜儀（上海色譜儀器有限公司）；可見分光光度計（掃描型）（石家莊偉天科學(xué)儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 色譜柱：迪馬C18鉆石色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：氨芐青霉素

1.4 試劑：三乙胺（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、甲醇（天津市海潤萊化工有限公司）、乙腈（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、磷酸（武漢唐氏豐禾化工有限公司）、磷酸二氫鈉（武漢唐氏豐禾化工有限公司）、氫氧化鈉（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、冰乙酸（紹興經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）。

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。流動相：0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相，檢測波長：230nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按氨芐青霉素峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取氨芐青霉素對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含100μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取供試品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10mL，密塞，精密稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，精密稱定，用流動相補(bǔ)足重量，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取氨芐青霉素對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為100μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.86%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量氨芐青霉素對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，氨芐青霉素在50～800μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的復(fù)方青霉素膠囊劑樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量并計算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.86%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品9份，分別精密加入氨芐青霉素對照品，按項下方法制備成120%、140%、160%。取模擬樣品照試驗(yàn)方法試驗(yàn)，計算回收率為99.3%，RSD為0.86%。

2.8 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批復(fù)方青霉素膠囊劑樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4小時，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定復(fù)方青霉素膠囊劑中氨芐青霉素的RSD=0.83%。結(jié)果表明供試品4小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 專屬性試驗(yàn)

取鄰氯青霉素等，照2.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在氨芐青霉素出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定復(fù)方青霉素膠囊劑三批樣品中氨芐青霉素的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為標(biāo)示量100.2%、99.9%、99.8%。

3 討論

分別考察0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7），0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（90∶10），0.05mol/LPH6.5磷酸鹽緩沖液-乙晴（6：1），乙腈-甲醇-水-三乙胺（20：20：60∶0.01），乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（60：40），乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀溶液（40：60），甲醇-水-冰乙酸（80：19：1），甲醇-磷酸鹽緩沖液（取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至6.5）（70：30）不同比例的流動相，結(jié)果以0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.01mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（93∶7）為流動相。本實(shí)驗(yàn)表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，、專屬性好，可用于復(fù)方青霉素膠囊劑中氨芐青霉素的含量測定。復(fù)方青霉素膠囊劑的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95-105%。

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