齊鶴

摘 要：建立反相高效液相色譜法測(cè)定巴中梔子中熊果酸的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（ 取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml） （5∶85：10）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。熊果酸在0.1～0.55mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。熊果酸平均回收率分別為99.3%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于巴中梔子中熊果酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：梔子；含量；測(cè)定

梔子是茜草科植物梔子的果實(shí)。梔子的果實(shí)是傳統(tǒng)中藥，具有護(hù)肝、利膽、降壓、鎮(zhèn)靜、止血、消腫等作用。梔子氣味：苦、寒、無(wú)毒?！端幮再x》記載：“味苦，性大寒，無(wú)毒。沉也，陰也。其用有二：療心中懊憹顛倒而不得眠，治臍下血滯小便而不得利。易老云：輕飄而象肺，色赤而象火，又能瀉腫中之火?！睏d子臨床常用于熱病心煩、黃疸尿赤、血熱吐衄、血淋澀痛、目赤腫痛、火毒瘡瘍等。熊果酸是存在于天然植物中的一種三萜類(lèi)化合物，具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)?、降低血糖等多種生物學(xué)效應(yīng)，熊果酸還具有明顯的抗氧化功能，為梔子主要成分之一。熊果酸具有迅速降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血清轉(zhuǎn)氨酶、消退黃疽、增進(jìn)食欲、抗纖維化和恢復(fù)肝功能的作用[1-5]。梔子生于丘陵山地或山坡灌林中，分布于中南、西南及江蘇、安徽、浙江、江西、福建、臺(tái)灣等地。本文采用高效液相法對(duì)巴中梔子中的熊果酸的進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設(shè)備有限公司）；B03001-004在線脫氣機(jī)（上海笛柏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HH-601超級(jí)恒溫水?。ū本└蝗鸷銊?chuàng)科技有限公司）；08890-xx超聲波清洗器（北京中科科爾儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；ULABO實(shí)驗(yàn)室溫度控制器（優(yōu)萊博技術(shù)（北京）有限公司）；UV1600紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（西安華辰樂(lè)天實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）；實(shí)驗(yàn)室用高純水制備器（北京科譽(yù)興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；XSYF-D實(shí)驗(yàn)室廢水處理設(shè)備（北京湘順源科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：熊果酸

1.4 試劑：甲醇（上海盈公生物技術(shù)有限公司）、磷酸（廣州市西隴化工有限公司）、冰醋酸（廣州市西隴化工有限公司）、醋酸鈉（利津縣東海工貿(mào)有限公司）、磷酸二氫銨（上海科豐化學(xué)試劑有限公司）、三乙胺（北京亞太龍興化工有限公司）、乙腈（上?？曝S化學(xué)試劑有限公司）。

1.5 試藥：巴中梔子

2 測(cè)定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動(dòng)相：甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按熊果酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取熊果酸對(duì)照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取供試品，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，精密稱(chēng)定，用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)。取續(xù)濾液，即得。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取熊果酸對(duì)照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為0.3mg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.73%，表明本方法精密度良好。

2.5 對(duì)照品的線性考察

精密稱(chēng)取適量熊果酸對(duì)照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.1、0.15、0.25、0.35、0.4.、0.45、0.55毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，熊果酸在0.1～0.55mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱(chēng)取同一批的梔子樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.73%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對(duì)照品適量，精密稱(chēng)取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入熊果酸對(duì)照品，按項(xiàng)下方法制備成110%、120%、130%。取模擬樣品照“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.3%，RSD為0.85%。

2.8 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，再按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品的含量，結(jié)果樣品的含量分別為0.32毫克/克、0.35毫克/克、0.33毫克/克。

3 討論

分別考察0.04moloL-1磷酸二氫銨溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶65：30），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-磷酸鹽溶液（取磷酸二氫鉀1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀釋至1000ml）（5∶85：10）為流動(dòng)相為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相法效果好、方法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性好，可用于巴中梔子中熊果酸的含量測(cè)定。

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