張國翠

（大連標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)研究中心，遼寧大連 116000）

食品中氯霉素標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的研究綜述

張國翠*

（大連標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)研究中心，遼寧大連 116000）

對(duì)食品中氯霉素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行了分析，介紹了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜法及液相色譜法的檢測(cè)原理及應(yīng)用范圍，同時(shí)綜合闡述了各自的優(yōu)越性及局限性，并對(duì)其在實(shí)際檢測(cè)工作中的應(yīng)用提出了建議，將酶聯(lián)免疫法與色譜-質(zhì)譜方法相結(jié)合，既能夠?qū)崿F(xiàn)快速篩查，又能夠保證結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，這將是未來氯霉素檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。

氯霉素；標(biāo)準(zhǔn)方法；優(yōu)越性；局限性

氯霉素是由委內(nèi)瑞拉鏈絲菌產(chǎn)生的抗生素。由大衛(wèi)·戈特利布于1947年從南美洲委內(nèi)瑞拉土壤內(nèi)的委內(nèi)瑞拉鏈霉菌中成功分離，再于1949年合成并引入臨床試驗(yàn)。氯霉素是世界上首種完全由合成方法大量制造的廣譜抗生素，對(duì)很多不同種類的微生物均起作用。因其價(jià)格低廉，曾在水產(chǎn)養(yǎng)殖及畜牧行業(yè)被廣泛應(yīng)用，但氯霉素有較強(qiáng)的毒副作用，如果氯霉素在食用動(dòng)物中殘留，可通過食物鏈傳給人類，長期微量攝入氯霉素，能使人體腸道內(nèi)的正常菌群失調(diào)，甚至?xí)鹬旅脑偕涣夹载氀?，特別對(duì)新生兒的影響尤為嚴(yán)重，對(duì)人類的健康造成潛在危害。目前，世界上許多國家都禁止將此藥用于食用動(dòng)物，歐盟、美國、日本等國家均在法規(guī)中對(duì)氯霉素殘留限量作出了嚴(yán)格規(guī)定。我國農(nóng)業(yè)部第235告公告及農(nóng)辦質(zhì)4號(hào)文件中都明確規(guī)定了氯霉素不得檢測(cè)。

1 氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法研究

氯霉素殘留的檢測(cè)方法一直是人們關(guān)注研究的重點(diǎn)，對(duì)食品中氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法進(jìn)行分析，結(jié)果表明，現(xiàn)行有效的28個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（包括國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)）中，覆蓋的產(chǎn)品種類有水產(chǎn)品、畜禽產(chǎn)品及其他相關(guān)產(chǎn)品。根據(jù)檢測(cè)技術(shù)的不同，主要分為以下幾種（對(duì)應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)個(gè)數(shù)）：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（11個(gè)）、氣相色譜-質(zhì)譜法（7個(gè)）、酶聯(lián)免疫法（5個(gè)）、氣相色譜法（5個(gè)）、液相色譜法（1個(gè)）。2015年12月31日國家標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)廢止了放射受體分析法，出臺(tái)了新的快速篩查方法——商品化試劑盒檢測(cè)方法，其原理基礎(chǔ)是酶聯(lián)免疫法。本文針對(duì)這幾種檢測(cè)方法做相應(yīng)的分析論述。

1.1 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS法）

隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，LC-MS法被廣泛應(yīng)用于獸藥殘留及農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。LC-MS法是美國食品和藥物管理局推薦的氯霉素確證方法，同時(shí)也是國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證的推薦標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。在牛奶、雞蛋、蜂蜜、肉制品、水產(chǎn)品及其他食品中都有相應(yīng)的利用LC-MS測(cè)定氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)方法，如GB/T 20756—2006《可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》就成為檢測(cè)機(jī)構(gòu)測(cè)定水產(chǎn)品及肉制品中氯霉素殘留的首選方法。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定氯霉素的主要原理是：樣品中氯霉素在堿性條件下，用乙酸乙酯提取，提取液旋轉(zhuǎn)蒸干后，殘?jiān)盟畯?fù)溶，經(jīng)正己烷液液分配脫脂，然后經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。質(zhì)譜的靈敏度明顯優(yōu)于熒光檢測(cè)器，本方法的檢出限能夠達(dá)到0.1 μg/kg，滿足農(nóng)辦質(zhì)4號(hào)文件及相關(guān)食品法規(guī)中對(duì)氯霉素的嚴(yán)格限定。因氯霉素容易殘留，所以檢測(cè)過程中易受污染，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的前處理流程相對(duì)GC-MS簡單，在一定程度上降低了樣品在檢測(cè)過程中被污染的風(fēng)險(xiǎn)，保證了結(jié)果的穩(wěn)定性、可靠性。因此利用LC-MS法測(cè)定食品中氯霉素，定性定量均比較準(zhǔn)確。

1.2 氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS法）

氣相色譜-質(zhì)譜法是氯霉素檢測(cè)較成熟的方法。目前，在蜂蜜、水產(chǎn)品的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有一部分是利用GC-MS法，并被許多檢驗(yàn)室采用。如農(nóng)業(yè)部958號(hào)公告-14-2007在水產(chǎn)品中檢測(cè)的應(yīng)用。GC-MS檢測(cè)的原理是：樣品中的氯霉素用乙酸乙酯提取，用正己烷脫脂，經(jīng)C18柱凈化，BSTFA+TMCS（99+1） 衍生后，用 GC-MS測(cè)定，主要采用電子轟擊源（EI） 和負(fù)離子化學(xué)源（NCI）。農(nóng)業(yè)部 781號(hào)公告 -1-2006中采用NCI源測(cè)定雞肉、雞肝中氯霉素，檢出限能夠達(dá)到 0.1 μg/kg，在 0.5 μg/kg～5 μg/kg 添加濃度的回收率為60%～110%。由于氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定氯霉素的前處理過程涉及過凈化柱和衍生，所以回收率不高，而且也增加了檢測(cè)過程中被污染的風(fēng)險(xiǎn)。不過由于各個(gè)檢驗(yàn)室條件的限制，該方法在其適用范圍內(nèi)也常被采用，是農(nóng)業(yè)部能力驗(yàn)證的推薦方法之一。

1.3 酶聯(lián)免疫法（ELISA法）

酶聯(lián)免疫法檢測(cè)技術(shù)發(fā)展比較迅速，目前，很多學(xué)者對(duì)此方法進(jìn)行不斷的研究與探索，如張勝幫等人的《酶聯(lián)免疫檢測(cè)法測(cè)定水產(chǎn)品中殘留氯霉素的研究》。因此該方法在氯霉素的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法中占有一定的比例，適用范圍包括蜂蜜、蜂王漿及其他食品。GB/T 18932.21—2003《蜂蜜中氯霉素殘留量的測(cè)定方法 酶聯(lián)免疫法》中氯霉素的檢出限為0.30 μg/kg，滿足食品法規(guī)中氯霉素限定的要求。酶聯(lián)免疫法測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有針對(duì)兔IgG（氯霉素抗體） 的羊抗體。加入氯霉素抗體、氯霉素酶聯(lián)記物、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液，游離氯霉素與氯霉素酶聯(lián)記物競(jìng)爭氯霉素抗體結(jié)合位點(diǎn)，同時(shí)氯霉素抗體也與固定的羊抗體結(jié)合。沒有結(jié)合的氯霉素酶聯(lián)記物在洗滌步驟中被去除，將酶結(jié)合物加入到孔中并孵育，結(jié)合的氯霉素酶聯(lián)記物將無色的酶結(jié)合物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物，加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色變成黃色。用酶聯(lián)分析儀于波長450 nm處進(jìn)行吸光度測(cè)定。應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)出氯霉素檢測(cè)商品化試劑盒，檢測(cè)下限可達(dá)50 ng/L。市場(chǎng)上比較知名的品牌有 BF（德國 R-Biopharm公司出品）、ED（EURO-DIAGNOSTICA公司出品）、RD（美國公司出品）、PRK（大連普瑞康公司出品） 等。有相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)不同試劑盒法檢測(cè)水產(chǎn)品中氯霉素的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了分析比較，檢測(cè)結(jié)果均比較接近。1998年9月德國§35 LMBG（01.006 8） 法規(guī)里關(guān)于奶類產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測(cè)的參考方法正式出臺(tái)。2017年7月1日，我國國家質(zhì)檢總局正式實(shí)施SN/T 4537.2—2016《商品化試劑盒檢測(cè)方法》。酶聯(lián)免疫法具有靈敏度高、精密度高、特異性強(qiáng)、對(duì)儀器設(shè)備和人員素質(zhì)要求低以及樣品前處理簡單等優(yōu)點(diǎn)，適于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大規(guī)模樣品篩選。但該方法的影響因素較多，易出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。因此，可利用本方法作篩查，再用LC-MS或GC-MS確證，可獲得更加準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。

1.4 氣相色譜法及液相色譜法

氣相色譜法及液相色譜法屬于比較早的、國際公認(rèn)的氯霉素檢測(cè)方法。液相色譜法穩(wěn)定性高、假陽性少，但是由于檢測(cè)器的限制，檢出限不夠理想。氣相色譜法靈敏度高，分離效果好，但是由于前處理過程需要衍生，操作比較繁瑣，限制了氣相色譜法的應(yīng)用。從檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的層面上可以看出，氣象色譜法及液相色譜法相對(duì)LC-MS、GC-MS而言，現(xiàn)階段的應(yīng)用還有一定差距，一方面隨著質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展，檢測(cè)技術(shù)越來越向高靈敏度、高精密度發(fā)展；另一方面由于世界各國對(duì)食品中氯霉素殘留問題的重視，氯霉素殘留檢測(cè)方法的檢出限已經(jīng)在國際貿(mào)易合作中成為新的技術(shù)壁壘，因此快速靈敏的檢測(cè)技術(shù)是十分必需的，這就限制了氣相色譜法及液相色譜法在氯霉素殘留檢測(cè)中的廣泛應(yīng)用。

2 總結(jié)與建議

通過對(duì)食品中氯霉素標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的分析比較，可見質(zhì)譜法已成為目前檢測(cè)氯霉素的主要標(biāo)準(zhǔn)方法，對(duì)于各個(gè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)而言，利用LC-MS法或GC-MS法測(cè)定食品中氯霉素，已成為首選的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。但質(zhì)譜法仍需不斷完善，以求簡化操作過程，降低檢測(cè)成本。隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展以及突發(fā)現(xiàn)場(chǎng)樣品量大的問題，ELISA技術(shù)的快速篩查也成為必要的檢測(cè)方法，它屬于半確證的篩查方法。由于每一種方法都有各自的優(yōu)越性及一定的局限性，所以將酶聯(lián)免疫法與色譜-質(zhì)譜方法相結(jié)合，既能夠?qū)崿F(xiàn)快速篩查，又能夠保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，這是未來檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。2017年，國家衛(wèi)計(jì)委和食藥監(jiān)總局對(duì)食品及食品相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了整合、修訂、廢止，其中廢止了大部分氯霉素的地方檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及進(jìn)出口行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，使檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)更加規(guī)范化，在檢測(cè)技術(shù)上體現(xiàn)了與時(shí)俱進(jìn)，同時(shí)為食品監(jiān)管工作提供了有力的技術(shù)保障。

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Areview ofthe standard methods for the determination ofchloramphenicolin food

ZHANGGuocui*
（Dalian standard testingtechnologyresearch center，LiaoningDalian 116000，China）

In this paper,the standard method of chloramphenicol detection in food was analyzed,and the detection principle and application scope are introduced about liquid chromatographytandemmass spectrometry,gas chromatography-mass spectrometry,enzyme-linked immunoassay,gas chromatography and liquid chromatography.At the same time,the advantages and limitations of each are elaborated,and some suggestions are put forward for practical testing.Combining enzyme-linked immunoassay and chromatography-mass spectrometry method can achieve rapid screening and ensure the accuracy and reliability of the results,and it is the future development trend of chloramphenicol detection.

chloramphenicol；standard method；superiority；limitation

TS207.4

A

1673-6044（2017）03-0013-02

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.03.006

*張國翠，女，1983年出生，2010年畢業(yè)于東北電力大學(xué)應(yīng)用化學(xué)專業(yè)，工程師。

2017-08-06