王佳 凌云 王玉嬌 張峰

隨著生活水平的提高，高血脂癥患者日益增多，降血脂藥的使用愈加廣泛。降血脂類藥物是一類能降低血漿甘油三酯或降低血漿膽固醇的藥物，降血脂藥種類多，分類也較困難，主要有膽酸螯合劑、煙酸類、貝特類以及他汀類。其中貝特類和他汀類為此類藥物應(yīng)用較多的兩大類。主要是通過選擇性抑制HMG-CoA和降低甘油三脂TG水平來起到降低血脂的作用［1］，但動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)與人類臨床試驗(yàn)表明，服用此類藥物后，該類藥物可以較長時(shí)間以原藥形式存在于血漿之中，且此類藥物在高溫、光照情況下也不易分解，因此長期過量使用此類藥物，有可能導(dǎo)致藥物在人體內(nèi)富集，由于此類藥物在降脂的同時(shí)，使用不當(dāng)也可能會影響肝腎功能，可能引發(fā)橫紋肌溶解癥等，甚至?xí)袑?dǎo)致腎衰竭的風(fēng)險(xiǎn)［2］，因此降血脂藥的檢測技術(shù)及分析方法尤為重要。通過搜集大量文獻(xiàn)，對降血脂藥的前處理和檢測方法進(jìn)行總結(jié)及闡述，擬為進(jìn)一步研究和開發(fā)快速、簡便、高通量方法提供依據(jù)。

1 樣品前處理方法

各類基質(zhì)中的降血脂藥分析中樣品前處理極其重要，其提取、凈化及濃縮的各個(gè)步驟均影響著分析檢測的各項(xiàng)指標(biāo)、成本及效率。因此，選擇更簡便有效的樣品前處理方法已成為發(fā)展趨勢。已有的前處理方法有:液—液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、超臨界流體萃取(SFE)、超聲輔助萃取(UE)等［3－11］。

1.1 液—液萃取(LLE)

1.1.1 常規(guī)液—液萃取: 也稱為溶劑提取，其基本原理是利用化合物在兩種互不相溶(或微溶)的溶劑中溶解度或分配系數(shù)的不同，使化合物從一種溶劑內(nèi)轉(zhuǎn)移到另外一種溶劑中。經(jīng)過反復(fù)多次萃取，將絕大部分的化合物提取出來。常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙腈、乙酸乙酯等。此類液—液萃取處理樣品量大，需使用大量的有機(jī)溶劑，由于有機(jī)溶劑的高揮發(fā)性、毒性和可燃性，造成環(huán)境污染和易引發(fā)安全事故。

1.1.2 分散液—液微萃取(DLLME): DLLME是一種新型微萃取技術(shù)。它基于使用微量注射器將微升級萃取劑快速注入樣液內(nèi)，在分散劑—水相內(nèi)形成萃取劑微珠，很大地?cái)U(kuò)展了有機(jī)萃取劑和水樣之間相接觸面，大大加快了萃取平衡的速度，使目標(biāo)化合物迅速萃入萃取劑微珠內(nèi)，提高了萃取效率和富集倍數(shù)。Sharmin［4］開發(fā)了一種使用無機(jī)—水性復(fù)合液滴的高效三相單滴微萃取方法，用于樣品的濃縮。Julia［5］用HPLC/Q-TOF-MS比較了污水中他汀藥物的固相萃取(SPE)，分散液—液微萃取(DLLME)和攪拌棒吸附萃取(SBSE)三種提取方法。分散液—液萃取到萃取平衡的速度快，使用有機(jī)萃取劑量非常小，萃取效率和富集倍數(shù)高，操作簡便，消耗低，不僅適用于痕量有機(jī)物的分離富集，也適用于痕量無機(jī)金屬離子的分離富集，已成功地應(yīng)用于各種壞境水樣、多種飲料、生物樣品、煤和礦物樣品中痕量組分的分離富集，是一種有發(fā)展前途的環(huán)境友好的分離富集技術(shù)。

1.2 固相萃取(SPE) SPE技術(shù)基于液—固相色譜理論，采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進(jìn)行富集、分離、純化，是一種包括液相和固相的物理萃取過程;也可以將其近似的看作一種簡單的色譜過程。Cai等［7］使用固相萃取(SPE)萃取自來水與飲用水處理廠中水中降血脂類藥物的殘留，水中大多數(shù)的藥物絕對回收率和相對回收率較好，可分別達(dá)到124.3%和125.6%。其優(yōu)點(diǎn)是可同時(shí)完成樣品富集與凈化，大大提高檢測靈敏度，重現(xiàn)性好，同時(shí)萃取速度比液液萃取更快，更節(jié)省溶劑，亦可自動(dòng)化批量處理，在樣品前處理上應(yīng)用較廣。

1.3 固相微萃取(SPME) SPME是在固相萃取技術(shù)上發(fā)展起來的一種微萃取分離技術(shù)，是集采樣、萃取、濃縮和進(jìn)樣于一體的無溶劑樣品微萃取新技術(shù)。與固相萃取技術(shù)相比，SPME操作更簡單，攜帶更方便，操作費(fèi)用也更加低廉;另外克服了固相萃取回收率低、吸附劑孔道易堵塞的缺點(diǎn)。Arroyo等［8］通過氣相色譜—質(zhì)譜法在牛奶中測定殘留藥物中的最佳設(shè)計(jì)和三向校準(zhǔn)優(yōu)化衍生反應(yīng)和固相微萃取條件。通過三種SPME纖維－聚丙烯酸酯(PA)，聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯(PDMS/DVB)和聚二甲基硅氧烷(PDMS))的比較，以鑒定出萃取過程中最合適的一種。

1.4 基質(zhì)固相分散(MSPD) MSPD是一種快速樣品處理技術(shù)，其原理是將樣品直接與適合反相鍵合硅膠(如C18、C8、硅藻土等)一起混合和研磨等，使樣品均勻分?jǐn)?shù)于固體相顆粒表面制成半固體裝柱，然后采用類似SPE的操作進(jìn)行洗滌和洗脫。MSPD適用于多藥物殘留分析，Beatriz［9］應(yīng)用 MSPD-GC-MS/MS 法分析蔬菜中的他汀類藥物殘留。選擇兩種通常用于MSPD的吸附劑 Florisil和氧化鋁，加入番茄，并用EtAc-MeOH(90∶10，v/v)洗脫，以比較兩種吸附劑的提取效果。二次提取以后，結(jié)果表明，應(yīng)用Florisil后對酸性藥物的回收率達(dá)87%。它是一種簡單高效實(shí)際的提取凈化方法，其優(yōu)點(diǎn)是濃縮了傳統(tǒng)的樣品前處理中的樣品勻化、組織細(xì)胞裂解、提取、凈化等過程，不需要進(jìn)行組織勻漿、沉淀、離心、pH調(diào)節(jié)和樣品轉(zhuǎn)移等操作步驟，避免了樣品的損失。適用于各種分子結(jié)構(gòu)和極性農(nóng)藥殘留的提取凈化，提高了分析速度、減少了試劑用量、適于自動(dòng)化分析。

1.5 超臨界流體(supercritical fluid extraction，SFE)SFE技術(shù)就是利用超臨界流體為溶劑，從固體或液體中萃取出某些有效組分，并進(jìn)行分離的一種技術(shù)。其特點(diǎn)在于充分利用超臨界流體兼有氣、液兩重性的特點(diǎn)，在臨界點(diǎn)附近，超臨界流體對組分的溶解能力隨體系的壓力和溫度發(fā)生連續(xù)變化，從而可方便的調(diào)節(jié)組分的溶解度和溶劑的選擇性，適合于提取分離揮發(fā)性物質(zhì)及含熱敏性組分的物質(zhì)。超臨界流體萃取法具有萃取和分離的雙重作用，物料無相變過程因而節(jié)能明顯，工藝流程簡單，萃取效率高，無有機(jī)溶劑殘留，產(chǎn)品質(zhì)量好，無環(huán)境污染。Megumi等［10］應(yīng)用超臨界流體萃取技術(shù)對蔬菜進(jìn)行了前處理，通過改變提取的極性溶劑來改變各個(gè)藥物污染物的溶解性，進(jìn)而結(jié)合液相質(zhì)譜與氣相質(zhì)譜的方法對其進(jìn)行檢測，取得了很好的提取效果。但是，超臨界流體萃取法也有其局限性，二氧化碳—超臨界流體萃取法較適合于親脂性、相對分子量較小的物質(zhì)萃取，超臨界流體萃取法設(shè)備屬高壓設(shè)備，投資較大。

1.6 超聲輔助萃取(Ultrasoundextraction，UE) UE亦稱為超聲波萃取、超聲波提取，是利用超聲波輻射壓強(qiáng)產(chǎn)生的強(qiáng)烈空化效應(yīng)、擾動(dòng)效應(yīng)、高加速度、擊碎和攪拌作用等多級效應(yīng)，增大物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標(biāo)成分進(jìn)入溶劑，促進(jìn)提取的進(jìn)行。與常規(guī)萃取技術(shù)相比，超聲波輔助萃取快速、價(jià)廉、高效、安全、適用范圍廣。在油脂浸取、蛋白質(zhì)提取、多糖提取、天然香料等食品分析中經(jīng)常使用。Wu等［11］應(yīng)用超聲波水浴中加入甲基叔丁基醚來萃取蔬菜樣品中的殘留藥物，提取的蔬菜中吉非貝齊的回收率可達(dá)到120.6%。雖然超聲提取快速節(jié)省時(shí)間，但也因?yàn)槌暡ㄋp等因素，且超聲波器件的安全性無法保證，且無法實(shí)現(xiàn)在線不停機(jī)維修，所以目前這種前處理方法使用較少。

2 檢測方法

2.1 氣相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 氣相色譜聯(lián)用質(zhì)譜法具有靈敏度高、專屬性好等特點(diǎn)，適用于揮發(fā)性高、熱穩(wěn)定性較好、極性較高的化合物［12－17］。Azzouz 等［14］通過氣相色譜—質(zhì)譜法同時(shí)測定牛奶，山羊奶和人乳中包括氯貝酸在內(nèi)的20種藥理活性物質(zhì)，報(bào)告了一種用于同時(shí)測定20種藥物活性物質(zhì)的組合連續(xù)固相萃取和氣相色譜—質(zhì)譜法的系統(tǒng)方法，其將牛奶樣品經(jīng)過乙腈提取，繼而離心，固相萃取以后甲硅烷基化衍生進(jìn)入氣質(zhì)分析，所提出的方法在0.6～5 000 ng/kg的范圍內(nèi)提供線性響應(yīng)，并且特征的檢測限為0.2～1.2 ng/kg。但是，由于藥物污染物相對分子質(zhì)量較大、極性較強(qiáng)、不易氣化或受熱易分解，因此GC技術(shù)在調(diào)節(jié)劑的殘留分析中應(yīng)用不多，雖然衍生化處理后可以采用GC分析，但衍生化過程往往耗時(shí)費(fèi)力，不符合實(shí)際檢測中簡單、快速的要求，更不適于大批量樣品的分析。

2.2 高效液相色譜法 高效液相色譜法是利用被測組分在兩相中吸附或分配系數(shù)的微小差異而達(dá)到分離的目的，加上與紫外—可見檢測器相結(jié)合，能夠同時(shí)準(zhǔn)確的檢測大量的組分。該法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測速度快，線性范圍寬等特點(diǎn)，同時(shí)能夠克服GC法缺點(diǎn)，適合分析沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性較差、分子質(zhì)量大的化合物。Steffen等［18］將人血漿和尿液樣品經(jīng)過固相萃取，使用紫外檢測的高效液相方法將普伐他汀藥物通過等度反相HPLC(C18)分離并在239 nm檢測，此方法的定量限為血漿1.9 ng/mL，尿液估計(jì)為125 ng/mL檢測快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，但是還不能完全滿足低殘留的檢測。

2.3 液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 與高效液相法相比，液相質(zhì)譜聯(lián)用的檢測器是質(zhì)譜檢測器，其遵循帶電粒子磁場或電場中的運(yùn)動(dòng)規(guī)律，利用化合物的質(zhì)荷比實(shí)現(xiàn)分離和利用豐度比實(shí)現(xiàn)定量，集高分離能力、高靈敏度、高分辨率于一體，是目前認(rèn)為最佳的分析方法［19－31］。Marilena等［19］建立了一種多分析方法，結(jié)合固相萃取和液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定廢水樣品中89種藥物。廢水樣品經(jīng)SPE固相萃取以后進(jìn)樣分析，電噴霧正負(fù)離子同時(shí)監(jiān)測，其中他汀類藥物的回收率范圍為50%到120%。精度以相對標(biāo)準(zhǔn)表示，偏差總是在15%以下，方法檢測限范圍為1.06 ng/L，分離與檢測都取得良好效果，適合水中藥物污染物的痕量檢測。但是質(zhì)譜分析的儀器比較昂貴，對操作人員要求較高，在基層檢測中還有待進(jìn)一步推廣。

3 展望

目前，降血脂類藥物檢測基質(zhì)頗多，主要應(yīng)用于血漿、尿液以及水體環(huán)境中，在食品中的檢測技術(shù)較少，而且此類藥物的不同的前處理方法和檢測方法都相應(yīng)被開發(fā)出，而研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)主要集中在前處理方法的開發(fā)，主要集中在固相萃取SPE上，其他類的前處理技術(shù)，如固相微萃取技術(shù)、液相微萃取技術(shù)、QuEChERs等方法有待進(jìn)一步的開發(fā)，目前，檢測技術(shù)主要傾向于常量檢測，痕量檢測技術(shù)相對較少，分析檢測研究趨勢也在向高分離度、高準(zhǔn)確度、高靈敏度、高分辨率發(fā)展，應(yīng)用高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜或軌道阱質(zhì)譜儀具有較強(qiáng)大的多殘留篩查能力，有待進(jìn)一步的應(yīng)用。處理裝置小，處理速度快，操作簡單化，樣品和有機(jī)溶劑用量少，對待測成分的選擇性和回收率高，易于自動(dòng)化的前處理方法與高分離度、高準(zhǔn)確度、高靈敏度、高分辨率的分析儀器的相結(jié)合應(yīng)用必將得到更大的發(fā)展，以滿足藥物的檢測需要。

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