陳曉童

(玉林市第一人民醫(yī)院病理科，廣西 玉林 537000)

冰凍與石蠟切片檢測(cè)HER-2的對(duì)比探討

陳曉童

(玉林市第一人民醫(yī)院病理科，廣西 玉林 537000)

目的 探討冰凍剩余石蠟切片以及冰凍切片兩種不同切片檢測(cè)乳腺癌患者人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER-2)的效果，并進(jìn)行對(duì)比分析。方法 選擇2014年3月至2016年3月乳腺癌患者45例，取每個(gè)患者送檢的組織，制作為冰凍切片，冰凍剩余的作石蠟切片。2種切片均進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測(cè)HER-2的蛋白表達(dá)。結(jié)果 HER-2檢測(cè)結(jié)果中冰凍切片組陽(yáng)性信號(hào)強(qiáng)于石蠟切片組，冰凍切片更能真實(shí)清晰地表達(dá)HER-2。結(jié)論 在對(duì)乳腺癌患者HER-2檢測(cè)時(shí)，冰凍切片觀察效果較好。

HER-2； 冰凍剩余石蠟切片； 冰凍切片

人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER-2)是人類17號(hào)染色體上的原癌基因，是乳腺癌患者重要的預(yù)后以及HER-2靶向藥物治療的預(yù)測(cè)指標(biāo)，經(jīng)研究顯示，HER-2陽(yáng)性的患者腫瘤惡性程度比較大，且治療效果相對(duì)較差，預(yù)后較差，但陽(yáng)性患者使用HER-2靶性藥物的治療效果卻比較好。因此，檢測(cè)乳腺癌患者HER-2對(duì)于指導(dǎo)患者的預(yù)后以及治療具有重要的意義[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇玉林市第一人民醫(yī)院2014年3月至2016年3月乳腺癌患者45例，年齡25～60歲，取每個(gè)患者送檢的組織，制作為冰凍切片，冰凍剩余組織作石蠟切片。2種切片均進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測(cè)HER-2的蛋白表達(dá)。

1.2 方法

同一塊組織先做冰凍切片進(jìn)行HER-2免疫組化染色檢測(cè)，然后把該塊組織做成蠟塊，進(jìn)行石蠟切片后再進(jìn)行HER-2免疫組化染色檢測(cè)。把同一塊組織所做的2種不同切片做的HER-2免疫組化染色檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。2種切片均采用MaxVision法進(jìn)行染色。具體步驟如下：

1.2.1 冰凍切片制作

1)取新鮮的組織平放于冷凍頭上，加適量OCT包埋劑，置于冰凍切片機(jī)冷凍臺(tái)冷凍，速凍之后切成4～5 μm的切片，將其貼在防脫載玻片上。

2)置于丙酮之中固定10 min，之后至水化[2]。

3)玻片進(jìn)行蒸餾水水洗1次，之后用PBS沖洗1次、2 min。

4)放入3%的過(guò)氧化氫溶液中處理10 min。

5)水洗1次，之后用PBS沖洗3次、每次2 min。

6)滴加相應(yīng)的一抗，然后放入37 ℃的環(huán)境30 min[3]。

7)PBS沖洗3次、每次2 min。

8)滴加MaxVision檢測(cè)系統(tǒng)試劑(二抗)1滴，置于室溫下反應(yīng)15 min。

9)PBS沖洗3次、每次2 min。

10)DAB室溫顯色3～10 min，鏡下控制顯色，水洗，終止顯色。

11)蘇木素進(jìn)行復(fù)染1～2 min，水洗，分化，藍(lán)化。

12)常規(guī)進(jìn)行脫水，用中性樹(shù)膠進(jìn)行封固[4]。

1.2.2 石蠟切片制作

1)將組織標(biāo)本置于10%中性緩沖甲醛液之中固定24 h后，置于自動(dòng)脫水機(jī)中依次梯度酒精脫水、透明、浸蠟，包埋成蠟塊，切成2～3 μm的切片[3]。

2)石蠟切片65 ℃烤片1 h，脫蠟至水化并蒸餾水洗1次。

3)抗原修復(fù)：EDTA，pH8.0，中火持續(xù)煮沸20 min，之后快速冷卻。

4)玻片進(jìn)行蒸餾水水洗1次，之后用PBS沖洗2次、每次3 min。

5)放入3%的過(guò)氧化氫溶液中處理10 min。

6)水洗1次，之后用PBS沖洗3次、每次3 min。

7)滴加相應(yīng)的一抗，然后放入37 ℃的環(huán)境1 h(或4 ℃冰箱過(guò)夜)。

8)PBS沖洗3次、每次3 min。

9)滴加MaxVision檢測(cè)系統(tǒng)試劑(二抗)1滴，置于室溫下反應(yīng)15 min。

10)PBS沖洗3次、每次3 min。

11)DAB室溫顯色3～10 min，鏡下控制顯色，水洗，終止顯色。

12)蘇木精進(jìn)行復(fù)染1～2 min，水洗，分化，藍(lán)化。

13)常規(guī)進(jìn)行脫水，用中性樹(shù)膠進(jìn)行封固。

1.3 觀察指標(biāo)

將所有切片放置在普通光學(xué)顯微鏡下觀察免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果，以10% 以上的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)胞膜或胞漿，觀察到清晰棕褐色的或棕黃色的顆粒時(shí)則為陽(yáng)性，其他結(jié)果為陰性，記為(-)；并將陽(yáng)性結(jié)果分三種情況：1)癌細(xì)胞隱約可見(jiàn)膜染色時(shí)為弱陽(yáng)性(記為1+)。2)細(xì)胞有微弱可見(jiàn)至中度可見(jiàn)其基底膜、側(cè)膜或完全性的膜染色時(shí)為中度陽(yáng)性(記為2+)。3)觀察到細(xì)胞的基底膜、側(cè)膜清晰染色，或者細(xì)胞完全性膜強(qiáng)染色時(shí)為強(qiáng)陽(yáng)性(記為3+)[5]。

2 結(jié)果

HER-2檢測(cè)結(jié)果中冰凍切片組陽(yáng)性信號(hào)強(qiáng)于石蠟切片組，雖然組織形態(tài)學(xué)上，冰凍切片欠缺于石蠟切片，但是冰凍切片能更加真實(shí)清晰的表達(dá)HER-2。如封四圖1—4。

3 討論

現(xiàn)如今，女性乳腺癌的發(fā)病率逐漸上升，已成為女性惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的首要的因素。因此對(duì)于乳腺癌的預(yù)防、診斷、治療成為了醫(yī)學(xué)界的研究重點(diǎn)[6]。人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER-2)是人類17號(hào)染色體上的原癌基因，HER-2基因的擴(kuò)增以及其所對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)表達(dá)，皆與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后有關(guān)，是乳腺癌患者重要的預(yù)后以及HER-2靶向藥物治療的預(yù)測(cè)指標(biāo)，經(jīng)研究顯示，HER-2陽(yáng)性的患者腫瘤惡性程度比較大，且治療效果相對(duì)較差，預(yù)后較差，但陽(yáng)性(2+以上)患者使用HER-2靶性藥物的治療效果卻比較好。因此，檢測(cè)乳腺癌患者HER-2，尤其是準(zhǔn)確的檢測(cè)HER-2，對(duì)于指導(dǎo)患者的預(yù)后以及治療具有重要的意義。

本實(shí)驗(yàn)主要探討檢測(cè)HER-2時(shí)，標(biāo)本作為冰凍切片以及冰凍剩余石蠟切片兩者的對(duì)比分析，冰凍切片是免疫組織化學(xué)染色中較常用的一種切片方法。冰凍切片的制作過(guò)程短，效率高，敏感性強(qiáng)，且可以最大程度地保證標(biāo)本的多種抗原免疫活性，抗原完整性。冰凍切片做HER-2的最大好處還有，能最大限度地保留抗原，能較真實(shí)地反映HER-2是陰性，陽(yáng)性的1+、2+或是3+。而石蠟切片的特點(diǎn)是達(dá)到可重復(fù)性且恒定的抗原顯示，能夠保持組織結(jié)構(gòu)的完整性，而且制作好的石蠟組織塊可以長(zhǎng)久保存[7]。

本實(shí)驗(yàn)中，主要探討兩種切片對(duì)乳腺癌患者檢測(cè)HER-2的影響，結(jié)果顯示，冰凍切片顯示效果較好。

[1] 王妍,賈羽峰,井明晰,等.新輔助化療對(duì)乳腺癌的療效及影響因素分析[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2013,11(10):45-47.

[2] 丁偉，王德田，董建強(qiáng)，等.簡(jiǎn)明病理學(xué)技術(shù)[M].杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，2014：156.

[3] 劉琪,左文述,王新昭,等.乳腺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶激素受體及HER-2與Ki-67表達(dá)相關(guān)性分析[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(15):1153-1157.

[4] 李世寧,唐紅,郭慶喜,等.乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增及其蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2014,30(3):251-255.

[5] 耿強(qiáng),錢曉龍,付麗.乳腺癌HER-2檢測(cè)的概況與進(jìn)展[J].中國(guó)腫瘤臨床,2014,41(10):671-674.

[6] 葛文凱,楊奔,左文述,等.乳腺癌穿刺活檢對(duì)HR和HER-2及Ki-67評(píng)價(jià)可靠性以及化療對(duì)其影響研究[J].中華腫瘤防治雜志,2014,21(11):847-853.

[7] 姜學(xué)革,李曉瑛,呂亞莉,等.乳腺髓樣癌HER-2基因擴(kuò)增與臨床病理因素相關(guān)性分析[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(22):1724-1727.

(責(zé)任編輯：劉大仁)

2016-09-20

R446.8

A

1009-8194(2017)02-0016-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.02.008