祖海濤，張長瑩，王愛國

(勃林格殷格翰動(dòng)物保健，上海 200120）

豬偽狂犬病凈化案例

祖海濤，張長瑩，王愛國

(勃林格殷格翰動(dòng)物保健，上海 200120）

2011年以來我國的豬偽狂犬?。≒R）發(fā)病率明顯增加，多篇報(bào)道顯示豬偽狂犬病毒（PRV）發(fā)生了變異，變異毒株致病力增強(qiáng)，同時(shí)市場上產(chǎn)生了很多對Bartha-K61毒株疫苗保護(hù)力質(zhì)疑的聲音。隨著國家頒布《中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020）》和各項(xiàng)鼓勵(lì)政策的出臺(tái)，以及養(yǎng)殖場自身競爭力和盈利能力需求的提升，豬偽狂犬病的凈化已成為行業(yè)呼聲。勃林格殷格翰自2014年底開始提出實(shí)施豬偽狂犬病凈化項(xiàng)目，在一些種豬場探索凈化道路，經(jīng)過1年的實(shí)踐和努力已卓見成效。下面就跟大家分享使用Bartha-K61毒株偽狂犬疫苗免疫結(jié)合系統(tǒng)方案實(shí)現(xiàn)豬場PR凈化的成功案例。

1 豬場背景

華東某養(yǎng)豬集團(tuán)，生產(chǎn)純種杜洛克、長白、大白母豬。其中A、B、C場為集團(tuán)自身選種繁育的核心場，母豬規(guī)模分別為600、1200、600頭，單點(diǎn)式生產(chǎn)，全進(jìn)全出，豬偽狂犬病均為陽性，E場為從國外引種的核心豬場，豬偽狂犬病為陰性。這4個(gè)豬場均使用某國產(chǎn)品牌豬偽狂犬基因缺失疫苗（Bartha-K61株）進(jìn)行常規(guī)免疫，豬偽狂犬病免疫程序?yàn)椋耗肛i普免4次/年；仔豬55日齡、90日齡分別免疫1次。

2 豬偽狂犬病的診斷

2.1 臨床癥狀

3個(gè)豬場偶爾會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)房仔豬腹瀉，個(gè)別仔豬嘔吐等表現(xiàn)，部分仔豬在出現(xiàn)臨床癥狀后不久表現(xiàn)不同程度的神經(jīng)癥狀，抽搐，劃船樣，逐漸出現(xiàn)間歇性轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)，一些仔豬叫聲嘶啞，口吐白沫，很快死亡，發(fā)病豬只體溫一般在41℃左右。

2.2 解剖病變

解剖發(fā)病豬只，可見在肝、脾等臟器表面有米粒大小的灰白色壞死點(diǎn)，喉頭充血，扁桃體出現(xiàn)灰白色的壞死灶。出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的仔豬，可見腦膜腫脹，腦脊液增多。

2.3 PCR檢測和基因測序

采取2頭發(fā)病豬只的腦組織、扁桃體進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果gE和gB基因片段擴(kuò)增結(jié)果均呈陽性。將分離到的毒株命名為SHX-2015，分別將gE和gB序列測定結(jié)果在GenBank上與相關(guān)序列比對，在NCBI基因庫GenBank上查找了經(jīng)典毒株和中國近幾年P(guān)RV變異毒株的gE/gB序列，并繪制遺傳進(jìn)化樹，gE基因序列對比結(jié)果顯示檢測到的毒株與JS-2012毒株（上海獸醫(yī)研究所童光志研究員分離的PRV變異強(qiáng)毒株）親緣關(guān)系最近；gB基因序列對比結(jié)果顯示檢測到的毒株與TJ株（哈爾濱獸醫(yī)研究所仇華吉研究員分離的PRV變異強(qiáng)毒株）親緣關(guān)系最近。

圖1 產(chǎn)房仔豬神經(jīng)癥狀

圖2 產(chǎn)房仔豬腹瀉

圖3 扁桃體白色壞死灶

圖4 肝臟表面白色壞死點(diǎn)

圖5 腦脊液增多，腦膜腫脹

表1 被檢毒株與國內(nèi)流行毒株同源性比較%

3 血清學(xué)檢測結(jié)果

根據(jù)各豬場的豬偽狂犬病毒gE抗體檢測結(jié)果，計(jì)算每個(gè)豬場各階段豬只gE抗體陽性率分布情況。3個(gè)豬場公豬、后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬的野毒陽性率均高于60%，有的甚至達(dá)到100%，生長育肥豬在22周齡時(shí)，豬偽狂犬野毒陽性率也高達(dá)100%，在這3個(gè)豬場中，C場的gE抗體陽性率最高，A、B場gE抗體陽性率相對稍低。

根據(jù)A、B、C3個(gè)豬場豬只臨床表現(xiàn)、解剖病變、gE抗體檢測及病毒基因序列分析結(jié)果，結(jié)合這幾年偽狂犬病毒變異毒株的流行特點(diǎn)等綜合分析，可以判斷這3個(gè)豬場感染的偽狂犬病毒均是目前主要流行的PRV變異毒株。在發(fā)病豬場實(shí)施凈化之前，一直在使用某國產(chǎn)品牌豬偽狂犬病疫苗進(jìn)行免疫，但是從血清學(xué)結(jié)果看來豬場的PRV野毒陽性率依然很高，防控壓力很大。

圖6 gE基因序列進(jìn)化樹分析

4 A、B場豬偽狂犬病的控制

4.1 首次調(diào)整免疫程序和生產(chǎn)管理措施

4.1.1 更換疫苗并調(diào)整免疫程序

根據(jù)A、B兩場的臨床表現(xiàn)和豬場gE抗體檢測的情況對豬偽狂犬病疫苗及其免疫程序做如下調(diào)整：所有豬偽狂犬病疫苗均更換為勃林格公司的豬偽狂犬病疫苗。更換疫苗時(shí)，所有公豬、母豬普免1頭份，1個(gè)月后加強(qiáng)免疫一次，以后每3個(gè)月普免一次，每次免疫的劑量均為1頭份；新生仔豬在出生后的3 d內(nèi)滴鼻免疫1頭份，5周齡、9周齡肌肉注射免疫各1頭份。其他疫苗的免疫程序不做調(diào)整。每個(gè)季度對豬群作一次抗體檢測，并根據(jù)檢測結(jié)果及時(shí)調(diào)整免疫程序。

4.1.2 生產(chǎn)管理和生物安全措施調(diào)整

在豬場的操作方面，要求豬場在做疫苗接種時(shí)，種豬一豬一針頭，生長豬群一欄一針頭，并要求專門技術(shù)人員對豬只保定后再接種疫苗。每個(gè)季度對全場做一次徹底的滅鼠。

同時(shí)對豬場實(shí)行McRebel管理法則及其他生物安全措施：

1)產(chǎn)房嚴(yán)格限制寄養(yǎng)，如必須寄養(yǎng)時(shí)，需在仔豬出生后24～48 h內(nèi)進(jìn)行；

2)不同窩之間更換針頭，在剪牙、閹割、斷尾時(shí)嚴(yán)格消毒；

3)豬只生病后，不將病豬移至其他豬欄，如豬只疾病較為嚴(yán)重，對其實(shí)施安樂死；

4)每棟豬舍同時(shí)斷奶、轉(zhuǎn)欄，仔豬斷奶后立刻轉(zhuǎn)入保育舍，并對產(chǎn)房徹底清洗、消毒、空欄5 d以上；

5)嚴(yán)格的批次生產(chǎn)、全進(jìn)全出、一對一轉(zhuǎn)欄，禁止工具、人員、豬只之間的交叉；

6)嚴(yán)禁不同日齡豬只之間接觸、混群；

7)嚴(yán)禁種豬和商品豬群接觸，豬只銷售時(shí)運(yùn)豬車輛需要在指定地點(diǎn)清洗、消毒。

4.1.3 血清學(xué)監(jiān)測及結(jié)果分析

圖7 gB基因序列進(jìn)化樹分析

圖8 A、B、C3個(gè)豬場豬偽狂犬病毒gE抗體陽性率

圖9 A場gE、gB抗體檢測結(jié)果

圖10 B場gE、gB抗體檢測結(jié)果

本次調(diào)整3個(gè)月后對A、B兩場的豬群進(jìn)行抗體檢測，結(jié)果如圖9、圖10所示。

由于PRV感染后，豬群會(huì)終身帶毒，種豬群更新速度有限，短時(shí)間內(nèi)陽性率沒有太大變化。從檢測結(jié)果看，A場生長豬群gE抗體陽性率明顯下降，臨床上也比較穩(wěn)定，說明A場PRV得到了較好的控制。B場豬群gE抗體陽性率下降不明顯，而且可以發(fā)現(xiàn)，10周齡以前gE抗體逐漸下降，以后gE抗體又逐漸增加，從抗體的變化規(guī)律可以推斷，B場在10周齡左右的短時(shí)間內(nèi)可能有豬偽狂犬野毒感染。結(jié)合豬群的臨床表現(xiàn)和豬場的生產(chǎn)管理，發(fā)現(xiàn)豬群在10周齡從保育舍轉(zhuǎn)入育肥舍后，存在明顯的發(fā)燒、咳嗽表現(xiàn)。同時(shí)B豬場育肥舍的濕度較大、育肥舍沒有做到嚴(yán)格的全進(jìn)全出，部分達(dá)到出售日齡的豬只因?yàn)轶w重較小繼續(xù)留在育肥舍內(nèi)飼養(yǎng)，同時(shí)育肥舍存在豬群混欄、調(diào)欄的現(xiàn)象。

4.2 第2次調(diào)整免疫程序和生產(chǎn)管理措施

4.2.1 調(diào)整免疫程序

通過首次調(diào)整后，A場的商品豬群PRV得到了較好控制，感染時(shí)間往后推移，為避免母源抗體對疫苗免疫的影響、提高疫苗對育肥豬群的保護(hù)，將A場生長豬群免疫程序調(diào)整為新生仔豬出生后3 d內(nèi)滴鼻免疫，9周齡、12周齡肌肉注射免疫。B場免疫程序不變。

4.2.2 生產(chǎn)管理和生物安全措施調(diào)整

根據(jù)首次抗體檢測的結(jié)果，以及豬場所存在的問題，在原有生產(chǎn)管理、生物安全的基礎(chǔ)上，對B場作出如下調(diào)整：

1)育肥舍嚴(yán)格做到全進(jìn)全出，并加強(qiáng)育肥舍的空欄、消毒、干燥工作；

2)保育舍轉(zhuǎn)入育肥舍時(shí)，一對一轉(zhuǎn)欄，嚴(yán)禁混欄、調(diào)欄；

3)加強(qiáng)病豬、弱豬的淘汰和管理工作；

4)豬群轉(zhuǎn)入育肥舍前后1周內(nèi)飼料中添加抗生素和電解多維進(jìn)行保健。

4.2.3 血清學(xué)監(jiān)測及結(jié)果分析

調(diào)整3個(gè)月后對A、B兩場的豬群做抗體檢測，檢測結(jié)果如圖11、圖12。

此次檢測結(jié)果可見，與前2次相比，A場10周齡以內(nèi)的gE抗體陽性率有所下降，說明通過加強(qiáng)母豬的疫苗免疫、生產(chǎn)管理、生物安全管理等措施，并不斷用陰性后備豬更換陽性母豬，半年以后，母豬群的偽狂犬野毒陽性率有所降低，母豬體內(nèi)gE抗體滴度、通過母源抗體傳遞給仔豬的gE抗體滴度明顯降低；生長育肥豬群的gE抗體陽性率也明顯降低，并能夠培育出陰性后備豬。B場檢測結(jié)果顯示，通過加強(qiáng)保育舍轉(zhuǎn)入育肥舍期間的生產(chǎn)管理和生物安全，結(jié)合正確的疫苗免疫，22周齡的育肥豬群gE抗體陽性率從之前的100%下降至40%，臨床上也趨于穩(wěn)定，說明B場的豬偽狂犬病也得到有效控制，隨后將B場的生長豬群免疫程序調(diào)整為新生仔豬出生后3 d內(nèi)滴鼻免疫，9周齡、12周齡肌肉注射免疫。

5 C場豬偽狂犬病的凈化

由于C場豬偽狂犬病陽性率較高，防控壓力很大，同時(shí)設(shè)備老舊，生物安全方面限制性因素較多。為凈化C場豬偽狂犬病并保留多年育種所取得的優(yōu)秀品種，決定采用清群/重新建群的方案來凈化豬偽狂犬病。具體方案包括以下步驟：

1)清空C場，將優(yōu)秀種豬轉(zhuǎn)入A、B場飼養(yǎng)，C場內(nèi)進(jìn)行徹底清洗、消毒，并對設(shè)備進(jìn)行改造、維修、空欄，歷時(shí)半年；

2)同時(shí)經(jīng)過半年的調(diào)整，A、B場通過疫苗免疫、改善生產(chǎn)管理、生物安全等措施使豬偽狂犬病得到有效控制，臨床穩(wěn)定并能培育出陰性后備種豬；

3)從PRV野毒陽性A、B場及PRV野毒陰性的E場內(nèi)挑選13～20周齡偽狂犬陰性后備種豬進(jìn)入C場，隔離飼養(yǎng)，所有后備種豬在轉(zhuǎn)入C場前至少肌肉注射接種豬偽狂犬疫苗2次，待C場后備母豬數(shù)量達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)（450頭左右），停止引種，對C場封群，轉(zhuǎn)為自繁自養(yǎng)；

4)對后備種豬進(jìn)行系統(tǒng)篩查和淘汰：

①豬只轉(zhuǎn)入C場2周后進(jìn)行第1次檢測，gE抗體陽性豬立即淘汰，陰性豬繼續(xù)留在C場隔離飼養(yǎng)；②每次檢測4周后，對該批次引入的所有豬只再次采血檢測gE抗體；③如一批豬只，連續(xù)2次gE抗體檢測均為陰性，并且做完所有疫苗的免疫程序，豬只結(jié)束隔離飼養(yǎng)，并入基礎(chǔ)母豬群；④每一批豬轉(zhuǎn)入C場后的第6周、第10周分別接種1次豬偽狂犬病疫苗；⑤C場正常生產(chǎn)后，每個(gè)季度全群檢測母豬、公豬豬偽狂犬病gE抗體，并按照一定比例檢測生長豬群，發(fā)現(xiàn)陽性種豬立刻淘汰。連續(xù)2次所有豬只的檢測結(jié)果均為陰性，判斷豬場為偽狂犬病野毒陰性，以后每個(gè)季度對豬群按照一定比例抽檢gE抗體。

5)執(zhí)行嚴(yán)格的生產(chǎn)管理和生物安全措施，定期對員工培訓(xùn)，提高員工的生物安全意識(shí)。

歷時(shí)一年之后，C場實(shí)現(xiàn)了豬偽狂犬病野毒陰性的目標(biāo)，并已投入正常生產(chǎn)。

圖11 A場gE、gB抗體檢測結(jié)果

圖12 B場gE、gB抗體檢測結(jié)果

6 總結(jié)和討論

病毒變異加大了豬偽狂犬病防控的難度，在該案例中豬場流行毒株也是PRV變異株，實(shí)踐證明，即使在野毒陽性率很高的情況下，通過正確實(shí)施豬偽狂犬疫苗的免疫，仍然可以有效控制臨床癥狀、減少野毒循環(huán)，并且結(jié)合合理的生產(chǎn)管理和生物安全措施，可以逐漸降低豬場PRV陽性率并培育出陰性后備種豬。

不同豬場具體情況不同，疾病防控措施應(yīng)因時(shí)因地制宜，疫苗是PRV控制和凈化中的重要工具，但實(shí)踐中不應(yīng)過度依賴疫苗免疫，在合理免疫的基礎(chǔ)上，結(jié)合豬場具體情況實(shí)施嚴(yán)格的生物安全措施、合理的監(jiān)測制度也是至關(guān)重要的。

對于豬偽狂犬病的凈化，相對于其他方法，清群/重新建群是更加快速有效的，然而成本也最高。實(shí)踐中，豬場應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適合自己的方案。疾病凈化是一個(gè)系統(tǒng)工程，需要時(shí)間、耐心以及堅(jiān)持不懈的努力！

2016-08-12）