徐松濤 任麗平 盛維新

(漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校醫(yī)療系,河南 漯河 462002)

膀胱尿路上皮癌中結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1和基質(zhì)金屬蛋白酶9蛋白的表達(dá)及意義

徐松濤 任麗平1盛維新2

(漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校醫(yī)療系,河南 漯河 462002)

目的 研究膀胱尿路上皮癌組織中結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MACC1)及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9蛋白的表達(dá)及意義。方法 應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)60例膀胱尿路上皮癌(膀胱癌)和13例膀胱正常黏膜組織中MACC1及MMP-9的表達(dá)情況。結(jié)果 MACC1在膀胱癌組織中蛋白陽(yáng)性率(65.0%)顯著高于膀胱正常黏膜組織(15.38%；MACC1蛋白表達(dá)在浸潤(rùn)性癌(T2-4)陽(yáng)性率為78.57%，遠(yuǎn)高于淺表性癌(T1，33.33%)；MACC1蛋白在高分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌為81.58%，高于低分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌(36.36%)；復(fù)發(fā)者M(jìn)ACC1陽(yáng)性率為77.78%，遠(yuǎn)高于初發(fā)者陽(yáng)性率(45.83%)。MMP-9在膀胱癌組織中蛋白陽(yáng)性率(78.33%)顯著高于膀胱正常黏膜組織(30.77%,P<0.05)。MMP-9蛋白表達(dá)在浸潤(rùn)性癌陽(yáng)性率為88.10%，遠(yuǎn)高于淺表性癌(55.56%)；在高分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌為92.11%，高于低分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌(54.55%)；復(fù)發(fā)者M(jìn)MP9陽(yáng)性率為88.89%，遠(yuǎn)高于初發(fā)者陽(yáng)性率(62.50%)。MACC1與MMP-9呈正相關(guān)。結(jié)論 MACC1和MMP-9蛋白與膀胱尿路上皮癌的生長(zhǎng)具有相關(guān)性，并能反映出惡性程度及其侵襲能力。聯(lián)合檢測(cè)有利于判斷膀胱癌惡性程度及其侵襲力及患者預(yù)后。

膀胱尿路上皮癌；結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1；基質(zhì)金屬蛋白酶-9

膀胱癌發(fā)現(xiàn)時(shí)已是腫瘤晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)，預(yù)后不良，因此需要尋找新的腫瘤指標(biāo)提高診斷率，提高早期手術(shù)率，延長(zhǎng)生命〔1，2〕。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(MACC)1基因是人類結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移促進(jìn)基因，定位于人類7號(hào)染色體上(7p21.1)〔3〕，在多種癌組織高表達(dá)，且MACC1高表達(dá)的腫瘤患者預(yù)后不良〔4～7〕。但是MACC1在膀胱癌中表達(dá)情況目前研究較少，我們采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)60例膀胱尿路上皮癌組織中MACC1及基質(zhì)金屬蛋白酶-(MMP)9蛋白的表達(dá)及意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬第三醫(yī)院及太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科2002年4月至2011年4月間施行膀胱部分切除術(shù)、全膀胱切除術(shù)以及經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)，并經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性膀胱癌的石蠟標(biāo)本60例，男43例,女17例；年齡23～81(平均56.7)歲。病理診斷為膀胱乳頭狀尿路上皮癌,按WHO(2004)病理分級(jí):低分級(jí)22例，高分級(jí)38例；臨床分期:T1 期18例,浸潤(rùn)性癌(T2、T3、T4)42例；腫瘤數(shù)目單發(fā)34例，多發(fā)26例；初發(fā)24例，復(fù)發(fā)36例。取13例癌旁3 cm以上的正常膀胱黏膜組織作為對(duì)照，標(biāo)本來(lái)自經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)、膀胱部分切除術(shù)、全膀胱切除術(shù)的開(kāi)放手術(shù)。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或免疫治療。

1.2 試劑 鼠抗人MACC1、MMP-9單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)于美國(guó)Sigma公司。

1.3 試驗(yàn)方法 采用免疫組化SP法,鼠抗人MACC1單克隆抗體工作濃度為1∶100，MMP-9工作濃度為1∶50。用已知乳腺癌標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照,用PBS代替一抗制成陰性對(duì)照切片。嚴(yán)格按SP試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 結(jié)果判定 先按染色強(qiáng)度計(jì)分,無(wú)染色計(jì)0分,淺黃色計(jì)1分,棕黃色計(jì)2分,棕褐色計(jì)3分;再按陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比計(jì)分,未見(jiàn)染色細(xì)胞計(jì)0分,<25%計(jì)1分,25%～50%計(jì)2分,>50%計(jì)3分;兩者相加,>2分為陽(yáng)性，≤2分為陰性。兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法讀片，各自觀察后一起做出判斷。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS9.2統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 MACC1和MMP-9在膀胱癌組織中的染色結(jié)果 MACC1以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色、棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，MMP-9以細(xì)胞質(zhì)被染色呈棕黃色、棕褐色為陽(yáng)性細(xì)胞，見(jiàn)圖1。

MACC1

MMP-9 圖1 MACC1及MMP-9在膀胱癌組織中的表達(dá)(DAB，×400)

2.2 MACC1及MMP-9在膀胱癌組織中的表達(dá) MACC1在膀胱癌組織中蛋白陽(yáng)性率(65.0%)顯著高于膀胱正常黏膜組織(15.38%)；MACC1蛋白表達(dá)在浸潤(rùn)性癌(T2-4)陽(yáng)性率為78.57%，遠(yuǎn)高于淺表性癌(T1，33.33%)；MACC1蛋白在高分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌為81.58%，高于低分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌(36.36%)；復(fù)發(fā)者M(jìn)ACC1陽(yáng)性率為77.78%，遠(yuǎn)高于初發(fā)者陽(yáng)性率(45.83%)。MMP-9在膀胱癌組織中蛋白陽(yáng)性率(78.33%)顯著高于膀胱正常黏膜組織(30.77%,P<0.05)。MMP-9蛋白表達(dá)在浸潤(rùn)性癌陽(yáng)性率為88.10%，遠(yuǎn)高于淺表性癌(55.56%)；在高分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌為92.11%，高于低分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌(54.55%)；復(fù)發(fā)者M(jìn)MP-9陽(yáng)性率為88.89%，遠(yuǎn)高于初發(fā)者陽(yáng)性率(62.50%)。MACC1與MMP-9呈正相關(guān)。見(jiàn)表1。

表1 膀胱癌中MACC1及MMP-9表達(dá)情況〔n(%)〕

2.3 MACC1與MMP-9 在膀胱癌中的相關(guān)性 在膀胱癌組織中，MACC1與MMP-9蛋白表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.533，P=0.001 1)。

3 討 論

研究表明MACC1可以激活下游的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體(HGF/c-Met)信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移〔8，9〕。有學(xué)者通過(guò)RNA干擾的方法，抑制腫瘤細(xì)胞中MACC1蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞增殖及侵襲、遷移能力明顯降低〔10〕。因此，MACC1有望成為腫瘤基因治療的新靶點(diǎn)。本研究中,MACC1蛋白在膀胱癌組織中表達(dá)的細(xì)胞陽(yáng)性率明顯高于膀胱正常黏膜,提示MACC1表達(dá)增高在膀胱癌發(fā)生中可能起一定促進(jìn)作用，同時(shí)，MACC1在膀胱尿路上皮癌侵襲、發(fā)展中也起一定的作用。另外，膀胱癌復(fù)發(fā)的患者，其MACC1蛋白量明顯高于非復(fù)發(fā)組，提示MACC1高表達(dá)者預(yù)后不良。腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)降解細(xì)胞外基質(zhì)而發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移〔11〕，其中MMP-9在多種腫瘤組織中高表達(dá)，與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔12，13〕。用抑制劑減少M(fèi)MP-9分泌可降低腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，并且可以增加抗腫瘤藥物的效果〔14，15〕。

本研究中,MMP-9蛋白增高與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，且MMP-9陽(yáng)性率增高患者預(yù)后不良。Gao等〔16〕研究表明，MACC1對(duì)MMP-9有調(diào)節(jié)作用，我們研究與其相符合。綜上所述，MACC1及MMP-9在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中可能起一定作用,聯(lián)合檢測(cè)MACC1及MMP-9有助于判斷膀胱癌惡性程度和患者的預(yù)后，對(duì)其進(jìn)一步研究，有可能使其成為膀胱癌基因治療的新靶點(diǎn)。

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〔2015-11-13修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃(52300410177)；漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校博士基金(2013-DF-002);漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校校級(jí)基金項(xiàng)目(2014-S-LMC08)

徐松濤(1975-)，男，副主任醫(yī)師，博士，主要從事泌尿系腫瘤診斷及治療研究。

R737.14

A

1005-9202(2017)05-1154-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.052

1 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)?；A(chǔ)部 2 太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科