王愛軍，王紅鈺，徐晉珩，鄭寶軍，吳 肖，程 健，張 超，施 華，馮俊偉

(河北醫(yī)科大學附屬唐山市工人醫(yī)院：1.腫瘤外科；2.病理科 063000)

結(jié)直腸癌患者外周血與腫瘤組織中TAZ表達的關(guān)系及臨床意義研究*

王愛軍1，王紅鈺1，徐晉珩2，鄭寶軍1，吳 肖1，程 健1，張 超1，施 華1，馮俊偉1

(河北醫(yī)科大學附屬唐山市工人醫(yī)院：1.腫瘤外科；2.病理科 063000)

目的探討轉(zhuǎn)錄共激活因子(TAZ)在結(jié)直腸癌患者外周血與腫瘤組織中表達，分析其關(guān)系及臨床意義。方法選取經(jīng)病理確診為結(jié)直腸癌并行根治性手術(shù)患者85例為手術(shù)組，手術(shù)后確診復發(fā)的患者35例作為復發(fā)組，同時選取年齡性別相匹配的健康人50例為對照組。取結(jié)直腸癌患者腫瘤組織及正常黏膜組織石蠟標本，采用免疫組織化學染色檢測TAZ表達，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各組外周血中TAZ的水平。結(jié)果手術(shù)組患者術(shù)前外周血中TAZ水平明顯高于對照組(P<0.05)，手術(shù)后TAZ水平較對照組無明顯變化(P>0.05)，復發(fā)組患者外周血TAZ水平明顯高于手術(shù)組術(shù)前(P<0.05)。手術(shù)組患者腫瘤組織中TAZ表達明顯高于正常黏膜組織(P<0.05)，復發(fā)組患者腫瘤組織中TAZ表達高于手術(shù)組(P<0.05)。手術(shù)組和復發(fā)組患者腫瘤組織與外周血TAZ水平呈正相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論監(jiān)測TAZ水平對及時了解腫瘤復發(fā)有明顯的參考價值。

結(jié)直腸腫瘤；TAZ；復發(fā)；腫瘤標志物

結(jié)直腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，占我國惡性腫瘤的第四位，胃腸道腫瘤的第二位，近年來發(fā)病率不斷升高，嚴重威脅了人們的健康。由于結(jié)直腸癌早期發(fā)現(xiàn)困難，因而手術(shù)之后患者仍有復發(fā)的風險，目前腫瘤復發(fā)的概率也有上升的趨勢。雖然已有癌胚抗原(CEA)等指標用于復發(fā)預測，但效果并不能令人滿意[1]。因此，尋找新的腫瘤相關(guān)分子預測結(jié)直腸癌復發(fā)有重要臨床意義。轉(zhuǎn)錄共激活因子(TAZ)是通過與轉(zhuǎn)錄因子和染色體重構(gòu)蛋白相結(jié)合來調(diào)節(jié)下游基因的轉(zhuǎn)錄。有研究顯示，TAZ在非小細胞肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、多發(fā)性骨髓瘤等多種惡性腫瘤中表達增強，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移預后有關(guān)[2-5]。但目前關(guān)于TAZ與結(jié)直腸癌復發(fā)的報道還不多見。本研究通過檢測結(jié)直腸癌患者、復發(fā)患者外周血及腫瘤組織TAZ表達情況，對不同組織中TAZ的關(guān)系進行分析，為結(jié)直腸癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的機制及預測提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014-2015年于本院行根治性手術(shù)的結(jié)直腸癌患者85例為手術(shù)組，其中男57例，女28例，年齡26～74歲，平均(61.4±18.3)歲，均有術(shù)后病理確診。同時選取性別、年齡相匹配的健康體檢者50例為對照組，同期手術(shù)后復發(fā)結(jié)直腸癌患者35例為復發(fā)組，均有活檢病理證實，并有影像學資料確定為復發(fā)。所有入選者均自愿簽署知情同意書，并得到本院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2主要試劑及儀器 全自動電化學發(fā)光免疫分析儀(羅氏E601)，TAZ試劑盒購自美國TPI公司，酶免之星全自動免疫分析儀。TAZ兔抗人單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，其他免疫組化試劑及試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)公司。

1.3方法

1.3.1標本采集 所有入選者晨起空腹抽取靜脈血5 mL，室溫靜置30 min后，3 500 r/min離心15 min，分離血清。手術(shù)組在術(shù)前1 d、術(shù)后1個月各采血1次，復發(fā)組及對照組均采血1次。腫瘤組織石蠟標本取自本院病理科，標本均經(jīng)HE染色確診，連續(xù)4 μm切片后進行免疫組織化學檢測；同時自病理科取結(jié)直腸癌患者正常黏膜組織標本30例作為TAZ組織檢測的對照(標本來自結(jié)腸鏡活檢組織，證實無癌及不典型增生組織存在)。

1.3.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測TAZ在外周血中的表達 各組血清嚴格依據(jù)試劑盒的說明書操作，檢測TAZ表達水平。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,用酶免之星全自動酶標儀檢測讀數(shù)。

1.3.3免疫組織化學檢測及結(jié)果判斷 將石蠟標本進行4 μm連續(xù)切片，進一步脫蠟水化，按免疫組織化學試劑盒(SP法)說明書進行染色操作，結(jié)果由病理專業(yè)醫(yī)師判斷。根據(jù)陽性細胞的百分率結(jié)合染色強度對免疫組織化學染色結(jié)果進行分析。TAZ以細胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色染色為陽性。在400倍顯微鏡下隨機計數(shù)10個視野，每視野計數(shù)100個細胞，計算陽性率(0%～20%為0分，>20%～50%為1分，>50%～75%為2分，≥76%為3分)；再按染色強度進行計分：無陽性染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。陽性率及染色強度計分之和結(jié)果評分：0～1分為(-)，2～3分為(+)，≥4分(++)。

2 結(jié) 果

2.1各組外周血TAZ表達水平 手術(shù)組患者術(shù)前外周血TAZ水平為(3.69±1.02)ng/mL，術(shù)后為(0.13±0.08)ng/mL，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。對照組外周血TAZ水平為(0.11±0.09)ng/mL，明顯低于手術(shù)組術(shù)前(P<0.05)，而與手術(shù)組術(shù)后比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。復發(fā)組外周血TAZ水平為(5.94±1.85)ng/mL，明顯高于手術(shù)組術(shù)前(P<0.05)。

2.2結(jié)直腸癌患者腫瘤組織與正常黏膜組織中TAZ表達水平 手術(shù)組患者腫瘤組織中TAZ表達陽性率為78.82%(67/85)，明顯高于正常黏膜組織的陽性率13.33%(4/30)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=40.26，P<0.01)；復發(fā)組患者腫瘤組織中TAZ表達陽性率為94.29%(33/35)，高于手術(shù)組(χ2=4.27，P=0.039)。

2.3結(jié)直腸癌患者外周血與腫瘤組織中TAZ表達的關(guān)系 Spearmann相關(guān)分析顯示，手術(shù)組外周血與腫瘤組織中TAZ表達呈正相關(guān)(r=0.304 6，P=0.005)，復發(fā)組外周血與腫瘤組織中TAZ表達也呈明顯正相關(guān)(r=0.422 8，P=0.011)。

3 討 論

結(jié)直腸癌是我國常見消化道惡性腫瘤，隨著生活水平的提高，結(jié)直腸癌的發(fā)病率也逐漸上升，嚴重危害人民健康[6-8]。由于結(jié)直腸癌早期并無特異性癥狀，確診時患者多已處于進展期，即使經(jīng)過手術(shù)、放化療等綜合治療，也存在較高的復發(fā)、轉(zhuǎn)移概率，導致患者預后不良[9-10]。因此，及時準確地預測患者復發(fā)在結(jié)直腸癌的綜合治療中有重要意義。但目前常用的指標尚不能令人滿意。由于TAZ在腫瘤中發(fā)揮較為廣泛的作用，故本研究對TAZ與結(jié)直腸癌的關(guān)系進行了研究。

TAZ是由400個氨基酸構(gòu)成，內(nèi)含ww結(jié)構(gòu)域和PDZ結(jié)合序列。TAZ在許多組織和器官中都存在表達[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)，TAZ能夠促進腫瘤細胞增殖、遷移、凋亡及誘導細胞的惡性轉(zhuǎn)化[13]。多項研究發(fā)現(xiàn)，TAZ蛋白在肺癌、乳腺癌、胃癌等許多惡性腫瘤中高表達，可以促進腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥形成等過程[2-5]。已有報道發(fā)現(xiàn)，TAZ在結(jié)直腸癌中存在過表達現(xiàn)象[14-15]，但具體作用還不明確。本研究發(fā)現(xiàn)，TAZ在腫瘤組織表達明顯比正常黏膜組織增強，提示TAZ可能參與結(jié)直腸癌的發(fā)生。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，復發(fā)患者的腫瘤組織TAZ表達更強，說明TAZ在復發(fā)過程中表達進一步增強，提示TAZ在結(jié)直腸癌的復發(fā)過程中可能發(fā)揮了促進作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)前結(jié)直腸癌患者外周血TAZ水平高于對照組，手術(shù)切除腫瘤后TAZ水平明顯降低，說明外周血TAZ水平與患者體內(nèi)的腫瘤負荷關(guān)系密切。對復發(fā)患者的外周血檢測還發(fā)現(xiàn)TAZ水平最高，也提示TAZ對結(jié)直腸癌的復發(fā)有促進作用。相關(guān)分析還發(fā)現(xiàn)，手術(shù)前患者和復發(fā)患者的腫瘤組織和外周血TAZ水平存在明顯相關(guān)性，說明外周血TAZ檢測可以反映腫瘤狀態(tài)。監(jiān)測TAZ水平對及時了解腫瘤復發(fā)有明顯的參考價值。

[1]?？》?，李明，李虎林，等．聯(lián)合檢測血清腫瘤標志物在結(jié)直腸癌診斷和預后判斷中的應用[J]．檢驗醫(yī)學與臨床，2014，11(8)：1082-1083．

[2]Xie M,Zhang L,He CS,et al.Prognostic significance of TAZ expression in resected non-small cell lung cancer[J].J Thorac Oncol,2012,7(5):799-807.

[3]Hiemer SE,Szymaniak AD,Varelas X.The transcriptional regulators TAZ and YAP direct transforming growth factor β-induced tumorigenic phenotypes in breast cancer cells[J].J Biol Chem,2014,289(19):13461-13474.

[4]De Cristofaro T,Di Palma T,Ferraro AA,et al.TAZ/WWTR1 is overexpressed in papillary thyroid carcinoma[J].Eur J Cancer,2011,47(6):926-933.

[5]Eda H,Aoki K,Kato S,et al.The proteasome inhibitor bortezomib inhibits FGF-2-induced reduction of TAZ levels in osteoblast-like cells[J].Eur J Haematol,2010,85(1):68-75.

[6]Chen W,Zheng R,Zuo T,et al.National cancer incidence and mortality in China,2012[J].Chin J Cancer Res,2016,28(1):1-11.

[7]Chen XZ,Hu JK,Zhou ZG.Importance of organized screening and surveillance for colorectal cancer in China:epidemiological differences from Europe[J].Eur J Cancer Prev,2015,24(6):459-460.

[8]Jin K,Wang J,Lan H,et al.Laparoscopic surgery for colorectal cancer in China:an overview[J].Int J Clin Exp Med,2014,7(12):4635-4645.

[9]YusupA,WangHJ,RahmutulaA.ClinicalfeaturesandprognosisincolorectalcancerpatientswithdifferentethnicitiesinNorthwestChina[J].WorldJ Gastroenterol,2013,19(41):7183-7188.

[10]Preisser F,Giehl K,Rehm M,et al.Inhibitors of oxygen sensing prolyl hydroxylases regulate nuclear localization of the transcription factors Smad2 and YAP/TAZ involved in CTGF synthesis[J].Biochim Biophys Acta,2016,186(8):2027-2036.

[11]Hong AW,Meng Z,Guan KL.The Hippo pathway in intestinal regeneration and disease[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2016,13(6):324-337.

[12]Zhang K,Qi HX,Hu ZM,et al.YAP and TAZ Take Center Stage in Cancer[J].Biochemistry,2015,54(43):6555-6566.

[13]Azzolin L,Zanconato F,Bresolin S,et al.Role of TAZ as mediator of Wnt signaling[J].Cell,2012,151(7):1443-1456.

[14]Yuen HF,Mccrudden CM,Huang YH,et al.TAZ expression as a prognostic indicator in colorectal cancer[J].PLoS One,2013,8(1):e54211.

[15]Wang L,Shi S,Guo Z,et al.Overexpression of YAP and TAZ is an Independent predictor of prognosis in colorectal cancer and related to the proliferation and metastasis of colon cancer cells[J].PLoS One,2013,8(6):e65539.

RelationshipofTAZexpressionbetweenperipheralbloodandtumortissueinpatientswithcolorectalcanceranditsclinicalsignificance*

WangAijun1,WangHongyu1,XuJinheng2,ZhengBaojun1，WuXiao1,ChengJian1,ZhangChao1,ShiHua1,FengJunwei1

(1.DepartmentofOncologySurgery;2.DepartmentofPathology,AffiliatedTangshanMunicipalWorker′sHospital,HebeiMedicalUniversity,Tangshan,Hebei063000,China)

ObjectiveTo investigate the expression of TAZ in peripheral blood and tumor tissue of the patients with colorectal cancer and to analyze their relationship and clinical significance.MethodsEighty-five cases of pathologically verified colorectal cancer treated by radical operation were selected as the operation group,and 35 cases with postoperative relapse served as the recurrent group.Meanwhile 50 age and sex-matched healthy persons were selected as the control group.The immunohistochemical(SP) technique was adopted to detect the expression of TAZ in tumor tissues and expression of TAZ in peripheral blood was tested with enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).ResultsThe level of preoperative TAZ in peripheral blood of the operation group was significantly higher than that of the control group(P<0.05).The level of peripheral blood TAZ after operation in the operation group had no significant change compared with the control group(P>0.05).The level of peripheral blood TAZ in the recurrent group was significantly higher than preoperative level of operation group(P<0.05).The expression of tumor tissue TAZ was significantly higher than that of normal mucosal tissue(P<0.05);the expression of tumor tissue TAZ in the recurrent group was higher than that in the operation group(P<0.05).The tumor tissue TAZ level in the operation group and recurrent group had obvious correlation with peripheral blood TAZ level(P<0.05).ConclusionMonitoring the TAZ level has obvious reference value for predicting colorectal cancer staging and timely understanding tumor recurrence.

colorectal neoplasms;TAZ;recurrence;tumor markers

河北省科技計劃基金資助項目(16277702D)。

王愛軍(1967-)，主任醫(yī)師，碩士，主要從事胃腸腫瘤的基礎(chǔ)及臨床研究。

R735.3

A

1671-8348(2017)28-3915-02

2017-04-04

2017-06-30)

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.28.011