黃秀香，陸俊宇，黃珍（河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，廣西宜州546300）

?

HPLC測(cè)定撐篙竹竹葉中異牡荊苷的含量

黃秀香，陸俊宇，黃珍
（河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，廣西宜州546300）

摘要：建立HPLC測(cè)定撐篙竹竹葉中異牡荊苷的含量。采用反相高效液相色譜法，色譜柱：Z0RBAX SB-C18（2.1 mm× 100 mm，3.6 μm），甲醇（A）-0.1 %冰醋酸水溶液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0 min~3 min，85 %~70 % B；3 min~6 min，70 %~55 % B；6 min~9 min，55 %~35 % B；9 min~12 min，35 %~35 % B；12 min~15 min，35 %~70 %B；15 min~18 min，70 %~85 %B），流速0.6 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm，柱溫30℃。異牡荊苷在1.733 1 μg/mL~10.832 0 μg/mL呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 6），平均回收率為98.01 %，RSD1.02 %，試驗(yàn)測(cè)得異牡荊苷的含量為2.928 5 mg/g。

關(guān)鍵詞：撐篙竹；異牡荊苷；高效液相色譜；含量測(cè)定

撐篙竹（Bambusa pervariabilis McClure），別名稿竹、油竹、白眉竹、花眉竹等，分布在廣西、廣東、福建等地的沿河岸或低丘地帶，其竹葉被《中華本草》、《廣西藥用植物名錄》收載為傳統(tǒng)中藥[1]，具有清熱、除煩、止嘔、止血等功效。竹葉提取物含有黃酮類化合物、生物堿、酚酸類化合物等，其中，以異葒草苷、葒草苷、異牡荊苷、牡荊苷為代表的黃酮類化合物具有抗自由基、抗氧化、抗疲勞、抗菌、抗病毒等功效[2]。同時(shí)，黃酮類化合物還應(yīng)用于具有調(diào)節(jié)血脂、降血糖、增強(qiáng)免疫、抗炎等功效的保健食品，液體食品中如保健食品口服液、各種釀造、軟飲料、調(diào)味品等[3]，竹葉還可用于食品添加劑作為抗氧化物。本文采用HPLC測(cè)定撐篙竹竹葉中異牡荊苷的含量，為撐篙竹竹葉的在食品添加劑的開(kāi)發(fā)利用提供理論參考。

1材料與方法

1.1儀器

DXF-4B粉碎機(jī)：廣州大祥電子機(jī)械設(shè)備有限公司；KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲波有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；AE240S型電子天平：奧豪斯儀器上海有限公司；Agilent 8453二極管陣列紫外分光光度計(jì)、Agilent高效液相色譜：美國(guó)安捷倫公司。

1.2試劑與原料

異牡荊苷對(duì)照品：貴州迪大生物有限公司；分析甲醇、色譜甲醇、分析純冰醋酸：河北四友卓越科技有限公司；所用水為超純水。撐篙竹竹葉：采自河池學(xué)院校園龍江河岸，經(jīng)河池學(xué)院覃國(guó)樂(lè)副教授鑒定為禾本科植物撐篙竹Bambusa pervariabilis McClure的葉子。

1.3方法

1.3.1樣品的處理

將撐篙竹竹葉洗滌干凈、曬干、粉碎，過(guò)60目，備用。

1.3.2樣品溶液的提取與配制

準(zhǔn)確稱取5.000 0 g竹葉粉末，置于100 mL的燒杯中，加入石油醚，剛好浸過(guò)粉末，超聲30 min，然后減壓抽濾，棄掉濾液，脫去色素和蠟質(zhì)，向?yàn)V渣中加入30 mL分析純甲醇，再超聲30 min，減壓抽濾，棄掉濾渣，濾液過(guò)0.45 μm濾膜，定容于50 mL容量瓶，4℃冰箱中保存，作為待測(cè)樣品。

1.3.3對(duì)照品溶液的配制

準(zhǔn)確稱取異牡荊苷對(duì)照品0.004 3 g，以色譜甲醇作溶劑于50 mL容量瓶中溶解定容，分別取1、1.5、2、2.5 mL體積，且各自定容于10 mL容量瓶中，以色譜甲醇稀釋成摩爾濃度為0.020、0.030、0.040、0.050 mmol/L的溶液，4℃冰箱中保存，備用。

1.3.4色譜條件

色譜柱：ZORBAXSB-C18（2.1mm×100mm，3.6μm），流動(dòng)相甲醇（A）-0.1 %冰醋酸水溶液（B），梯度洗脫（0 min~3 min，85 %~70 % B；3 min~6 min，70 %~55 % B；6 min~9 min，55 %~35 % B；9 min~12 min，35 %~35 % B；12 min~15min，35 %~70 %B；15 min~18min，70 %~ 85 %B），流速0.6 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣體積5 μL。

2結(jié)果與分析

2.1線性關(guān)系考察

將對(duì)照品溶液配制成0.004、0.010、0.015、0.020、0.025 mmol/L 5個(gè)不同濃度，分別精密吸取不同濃度的異牡荊苷溶液，按1.3.4色譜條件HPLC測(cè)定其峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)、吸收峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為：y=11 427x-0.923 3，線性范圍為1.733 1 μg/mL~10.832 0 μg/mL，相對(duì)系數(shù)r=0.999 6。異牡荊苷HPLC測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1，異牡荊苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見(jiàn)圖2。

2.2精密度試驗(yàn)

精密吸取0.020 mmol/L異牡荊苷對(duì)照品溶液，在1.3.4色譜條件下，HPLC測(cè)定其峰面積，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算RSD。RSD=1.85 %，表明儀器精密度良好。

圖1異牡荊苷的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of isovitexin

圖2異牡荊苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2 The standard curve of isovitexin

2.3重復(fù)性試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取5.000 0 g竹葉粉末5份，按照1.3.2提取與配制樣品溶液，在1.3.4色譜條件下，HPLC測(cè)定異牡荊苷的峰面積，計(jì)算RSD。異牡荊苷RSD=0.83 %，表明本方法重復(fù)性好。

2.4加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知異牡荊苷含量的樣品溶液5份，分別加入已知異牡荊苷含量的對(duì)照品，混合均勻，在1.3.4色譜條件下，HPLC測(cè)定峰面積，計(jì)算平均回收率和RSD。平均回收率=98.01 %，RSD=1.02 %；具有好的回收率。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，樣品及樣品加對(duì)照品的HPLC測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4。

表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）Table 1 The result of recovery rate of isovitexin（n=5）

2.5撐篙竹竹葉中異牡荊苷的含量測(cè)定

準(zhǔn)確稱量5.000 0 g撐篙竹竹葉放在100 mL燒杯中，按方法1.3.2提取與配制，在1.3.4色譜條件下測(cè)定峰面積，5次平行試驗(yàn)，取平均值，異牡荊苷的含量為2.928 5 mg/g。

圖3樣品的HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of sample

圖4樣品加對(duì)照品的HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms of sample spiked with isovitexin standard

3　討論

將異牡荊苷對(duì)照品溶液在190 nm~450 nm進(jìn)行紫外掃描，根據(jù)最大吸收波長(zhǎng)和參考文獻(xiàn)[4-5]，我們選定了340 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)條件下，所測(cè)定成分與其它成分能較好的分離，且基線穩(wěn)定，試驗(yàn)測(cè)得異牡荊苷的含量為2.928 5 mg/g。

本文以高效液相色譜法測(cè)定撐篙竹竹葉中異牡荊苷的含量，方法簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，結(jié)果較為滿意，可用于竹葉黃酮類化合物成分測(cè)定和進(jìn)一步的研究提供一定的參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫嘏.撐篙竹(Bambusa pervariabilis McClure)竹葉化學(xué)成分及其生物活性研究[D].北京:中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院,2010:7

[2]陸柏益,張英,吳曉琴.竹葉黃酮的抗氧化性及其心腦血管藥理活性研究進(jìn)展[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2005,25(3):120-124

[3]郭維圖,孫福平.微波提取竹葉黃酮及其在食品加工中的應(yīng)用[J].包裝與食品機(jī)械,2009,27(5) :113-117

[4]龔金炎,吳曉琴,夏道宗. RP-HPLC法測(cè)定竹葉提取物中黃酮類和酚酸類成分[J].中草藥,2010,41(1):63-65

[5]袁珂,薛月芹,殷明文. RP-HPLC同時(shí)測(cè)定淡竹葉中4種黃酮苷的量[J].中國(guó)中藥雜志,2008,33(19):2215-2218

Determination of Isovitexin in Bambusa Pervariabilis McClure Leaves by HPLC

HUANG Xiu-xiang，LU Jun-yu，HUANG Zhen
（College of Chemistry and Biology Engineering，Hechi University，Yizhou 546300，Guangxi，China）

Abstract：To establish a HPLC method for the determination of isovitexin in Bambusa Pervariabilis McClure Leaves. The method was applied with ZORBAX SB-C18column（2.1 mm×100 mm，3.6 μm），the mobile phase consisted of methanol（A）-（0.1 %）aqueous acetic acid（B），with an optimized gradient program of 0 min-3 min，85 %-70 % B；3 min-6 min，70 %-55 % B；6 min-9 min，55 %-35 % B；9 min-12 min，35 %-35 % B；12 min-15 min，35 %-70 %B；15 min-18 min，70 %-85 %B，the flow rate was 0.6 mL/min，the column temperature was maintained at 30℃and the UV detection wavelength was set at 340 nm. The linear in the rangeof1.733 1 μg/mL-10.832 0 μg/mL（r=0.999 6），theaveragerecoveryofisovitexinwas98.01%，RSD1.02%，the content of isovitexin was 2.928 5 mg/g.

Key words：Bambusa Pervariabilis McClure；isovitexin；HPLC；determination

收稿日期：2014-08-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.035

作者簡(jiǎn)介：黃秀香（1969—），女（壯），教授，碩士，研究方向：天然有機(jī)化學(xué)。

基金項(xiàng)目：廣西高?？茖W(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（ZD2014113）；河池學(xué)院科研重點(diǎn)課題（2014ZD-N004）