王 麗 陳韓飛 王 甜

(新疆維吾爾自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究所 新疆 烏魯木齊 830000 )

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在水產(chǎn)品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

王 麗 陳韓飛 王 甜

(新疆維吾爾自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究所 新疆 烏魯木齊 830000 )

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)逐漸成為水產(chǎn)品中獸藥殘留檢測(cè)的重要手段。本文介紹了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的基本原理和特點(diǎn)，以及在水產(chǎn)品安全檢測(cè)中的應(yīng)用。

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；水產(chǎn)品；安全檢測(cè)

水產(chǎn)品在養(yǎng)殖過程所用獸藥種類較為復(fù)雜，經(jīng)常攝入含有低劑量藥物殘留的水產(chǎn)品，殘留的藥物即可在人體內(nèi)慢慢蓄積而導(dǎo)致體內(nèi)各器官的功能紊亂或病變，嚴(yán)重危害人體健康。水產(chǎn)品安全日益受到國(guó)家和有關(guān)國(guó)際組織的關(guān)注和嚴(yán)格控制，人們對(duì)水產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)性和安全性的關(guān)注均趨于理性化、科學(xué)化的同時(shí)，也對(duì)水產(chǎn)品中有害物質(zhì)的檢測(cè)水平也提出了更高的要求。液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS/MS)聯(lián)用既發(fā)揮了現(xiàn)代色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力,其質(zhì)譜具有的高選擇性、高靈敏度以及能夠準(zhǔn)確提供化合物的分子量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn),在水產(chǎn)品安全檢測(cè)中發(fā)揮著越來越大的作用。LC-MS/MS憑借其超低的檢測(cè)限、優(yōu)異的定性能力，逐漸成為水產(chǎn)品安全檢測(cè)領(lǐng)域的主力軍。

1 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的原理

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀主要由液相色譜、接口裝置(LC與MS之間的連接裝置，同時(shí)也是電離源)和質(zhì)譜儀組成。色譜可作為質(zhì)譜的樣品導(dǎo)入裝置，并對(duì)樣品進(jìn)行初步分離純化，再由質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)依次得到化合物的分子離子及碎片信息。因?yàn)樯V可得到化合物的保留時(shí)間，質(zhì)譜可給出化合物的分子量和結(jié)構(gòu)信息，由此可以根據(jù)質(zhì)譜峰的位置進(jìn)行物質(zhì)的定性和結(jié)構(gòu)分析，根據(jù)峰的強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。因此色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)可對(duì)復(fù)雜體系進(jìn)行分離分析，故對(duì)復(fù)雜體系或混合物中化合物的鑒別和測(cè)定非常有效。

2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀在水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中的應(yīng)用

水產(chǎn)品的基質(zhì)相對(duì)其他食品來說，較為復(fù)雜，含有較多的蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)，很容易對(duì)所檢測(cè)的目標(biāo)化合物造成干擾。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)樣品的提取、純化和濃縮等前處理過程沒有嚴(yán)格要求，并且它具有抑制基質(zhì)干擾的特點(diǎn)，與液相的方法相比，樣品前處理的過程更加簡(jiǎn)便。此外，水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中使用的獸藥也越來越多樣化，對(duì)獸藥的檢測(cè)需求也從以前的單一類別獸藥檢測(cè)發(fā)展到現(xiàn)在的多種不同類別獸藥同時(shí)檢測(cè)，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)因其良好的適用性，可同時(shí)定性、定量、高靈敏度及分析時(shí)間短等特點(diǎn)，已成為多種獸藥殘留同時(shí)檢測(cè)的主要方法。

2.1 水產(chǎn)品抗生素殘留的測(cè)定

2.1.1 硝基呋喃類

硝基呋喃類藥物作為人工合成的廣譜抗菌藥，主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因等，因其具有抑菌性和殺菌性而廣泛用于水生動(dòng)物細(xì)菌性疾病預(yù)防及治療。趙東豪等研究了利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)水產(chǎn)品中殘留的呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮等4種硝基呋喃類代謝物，優(yōu)化了前處理方法及液相色譜條件。硝基呋喃類代謝物經(jīng)衍生化后，調(diào)節(jié)樣品pH，乙酸乙酯提取，提取液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊?，用乙?甲酸(0.1%)水溶液定容，4℃高速離心后上機(jī)測(cè)定。采用梯度洗脫法，4種代謝物在C18柱中分離良好。該法有效地提高硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)效率，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

2.1.2 氯霉素類

該類藥物主要有氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素(氟苯尼考)，氯霉素對(duì)人的造血系統(tǒng)、消化系統(tǒng)具有嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，有可能引發(fā)人的再生障礙性貧血；同時(shí)還會(huì)引起視神經(jīng)炎、皮疹等不良反應(yīng)，現(xiàn)已被禁止使用。萬譯文等建立了水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素藥物殘留量同時(shí)測(cè)定的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法。以氘代氯霉素做內(nèi)標(biāo)，乙酸乙酯提取，HLB固相萃取柱凈化，洗脫液氮?dú)獯蹈桑捎秘?fù)離子模式進(jìn)行定性、定量分析。結(jié)果表明：氯霉素的檢出限為0.01μg/kg，甲砜霉素和氟甲砜霉素檢出限為0.03μg/kg，檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.3%～9.7% (n=6)，加標(biāo)回收率達(dá)到78.6%～110.5%。該方法在水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素藥物的殘留測(cè)定中具有很好的應(yīng)用前景。

2.1.3 喹諾酮類

喹諾酮類是人工合成的含4-喹諾酮基本結(jié)構(gòu)的抗菌藥。其因具有廣譜、高效及低毒等優(yōu)勢(shì)而被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中治療和預(yù)防多種細(xì)菌和支原體疾病。常見的喹諾酮類藥物有諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星等。劉正才等建立了快速測(cè)定鰻魚肌肉中氧氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氟甲喹和惡喹酸6種喹諾酮類藥物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法。樣品經(jīng)勻漿、提取、脫脂、凈化后，以乙腈-乙酸銨溶液(0.2%甲酸)為流動(dòng)相，用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)正離子掃描方式進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，該方法對(duì)以上6種喹諾酮類藥物的線性范圍為0.1～50μg/kg，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.9976；檢出限為0.03～0.25μg/kg，定量限為0.1～0.8μg/kg，在1.0、2.0、10μg/kg 3個(gè)添加水平的回收率為84.8%～97.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.5%～11.3%。該法簡(jiǎn)單、靈敏、特異性強(qiáng)，適用于鰻魚肌肉中喹諾酮類藥物多殘留的檢測(cè)。

2.1.4 磺胺類

磺胺類藥物是指具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類藥物總稱。人體中長(zhǎng)期存在磺胺會(huì)導(dǎo)致許多細(xì)菌對(duì)磺胺藥物產(chǎn)生抗藥性，磺胺類殘留還能破環(huán)人的造血系統(tǒng)，造成溶血性貧血癥。孫偉紅等建立水產(chǎn)品中18種磺胺類藥物殘留量的HPLC-MS/MS測(cè)定方法。以氘代試劑為內(nèi)標(biāo)，采用正離子模式測(cè)定，可同時(shí)對(duì)水產(chǎn)品中的18種磺胺類藥物進(jìn)行定性和定量。其檢出限在0.5μg/kg以下，定量限為1.0μg/kg；在5.0～200.0μg/mL時(shí)峰強(qiáng)度與質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好(r＞0.99)。方法的平均回收率范圍為70%～120%。該法簡(jiǎn)便快捷，在一定程度上實(shí)現(xiàn)了藥物殘留的快速檢測(cè)。

2.2 水產(chǎn)品禁用漁藥的檢測(cè)

于慧娟等建立了水產(chǎn)品中己烯雌酚的LC-MS/MS檢測(cè)方法，樣品用甲基叔丁基醚和乙酸乙酯提取，C18固相萃取柱凈化，甲醇洗脫，以0.02%氨水-甲醇為流動(dòng)相，在LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下進(jìn)行定性與定量分析。在魚、蝦和蟹三類樣品中，己烯雌酚在2μg/kg加標(biāo)水平時(shí)，批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.3%～15%，在2μg/kg加標(biāo)水平時(shí)，批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～8.2%，以上回收率均在75%以上。祝璟琳等建立了羅非魚肌肉中甲基睪丸酮?dú)埩袅康腢PLC-MS/MS測(cè)定方法，以氘代試劑為內(nèi)標(biāo)，采用正離子監(jiān)測(cè)模式測(cè)定，可對(duì)羅非魚肌肉中甲基睪丸酮?dú)埩暨M(jìn)行定性和定量檢測(cè)，檢出限為0.4μg/kg，定量限為1μg/kg。線性范圍為1～60μg/kg(r＞0.999)，方法的平均回收率范圍為71.06%～83.06%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.4%～15.3%。王慧龍等優(yōu)化了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留量的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)勻漿、萃取、凈化和濃縮后，用乙腈-乙酸銨溶液定容，采用液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式檢測(cè)和同位素內(nèi)標(biāo)法定量?？兹甘G和無色孔雀石綠檢測(cè)的線性范圍為0.25～10.0ng/mL，檢出限均為0.50μg/kg。在加標(biāo)量為 2.50μg/kg時(shí)，樣品加標(biāo)平均回收率分別為98.1%和93.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。

2.3 多種獸藥組分同時(shí)測(cè)定

水產(chǎn)品中的獸藥殘留檢測(cè)范圍已逐步從單一類別的獸藥檢測(cè)發(fā)展為多種不同類別獸藥的定性與定量分析。李仲超等運(yùn)用液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)建立水產(chǎn)品(魚、蝦和貝)中78種獸藥的同時(shí)測(cè)定方法。目標(biāo)獸藥在0.1～100μg/kg范圍內(nèi)線性良好；以基底匹配工作曲線和替代物法分別進(jìn)行定量和質(zhì)控，4μg/kg和20μg/kg兩個(gè)加標(biāo)量條件下魚、蝦、貝肉的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=4)分別為40.8%～125.6%和0.1%～16.0%(魚)、42.9%～131.9%和0.1%～14.0%(蝦)、及43.5%～136.4%和0.3%～15.8%(貝)，方法檢測(cè)限為0.1～0.5μg/ kg。劉正才等建立鰻魚中15種磺胺、3種喹諾酮類以及4種四環(huán)素族抗生素殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定方法。添加水平為 5、10、20μg/kg時(shí)各種化合物的平均回收率范圍為72.4%～97.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值均小于14.4%。該法簡(jiǎn)單、快速、靈敏，適用于鰻魚中多磺胺組分、喹諾酮及四環(huán)素族組分殘留的同時(shí)測(cè)定。

3 結(jié)語

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)解決了傳統(tǒng)液相檢測(cè)器靈敏度和選擇性不夠的缺點(diǎn)，提供了可靠、精確的相對(duì)分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)信息，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，節(jié)省了樣品準(zhǔn)備時(shí)間和分析時(shí)間。水產(chǎn)品中獸藥殘留也從單一類別檢測(cè)發(fā)展到多種類別獸藥殘留的定性定量分析，但水產(chǎn)品基質(zhì)復(fù)雜，利用現(xiàn)有的技術(shù)建立簡(jiǎn)單、高效、環(huán)保且低成本的分析方法仍然是水產(chǎn)品檢測(cè)的主要發(fā)展方向。隨著現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)將會(huì)在水產(chǎn)品檢測(cè)分析方面發(fā)揮舉足輕重的作用。

（略）

王麗（1988-），女，碩士研究生，助理工程師，主要從事水產(chǎn)品安全質(zhì)量檢測(cè)工作，E-mail: 845357500@qq.com；

環(huán)湖水系親水休閑垂釣、觀光漁業(yè)、游船、竹筏及溫泉為主的連環(huán)湖休閑游線路；以沿江風(fēng)光，休閑漁釣，農(nóng)產(chǎn)品種、采、摘休閑體驗(yàn)為主題的沿江休閑旅游線路。