趙 敏 劉 紅 陳德哲 于海燕 宮殿榮 楊 申

1)山東聊城市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 聊城 252000 2)山東省泰安市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 泰安 271000

托吡酯對腦出血大鼠血腫周圍HSP70 TNF-a表達(dá)的影響

趙 敏1)劉 紅1)陳德哲1)于海燕1)宮殿榮1)楊 申2)

1)山東聊城市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 聊城 252000 2)山東省泰安市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 泰安 271000

目的 觀察托吡酯對腦出血大鼠血腫周圍腦組織熱休克蛋白-70(Hsp-70)及腫瘤壞死因子-a(TNF-a)表達(dá)的影響，以分析其在大鼠神經(jīng)功能保護(hù)方面的作用機(jī)制。方法 隨機(jī)選擇60只健康雄性SD大鼠，將其分為3組，分別為假手術(shù)組，腦出血組與腦出血治療組，每組各20只。利用自體股動脈取血法制作腦出血模型。對各組在術(shù)后繼續(xù)分組，依據(jù)術(shù)后6 h、24 h、48 h、72 h、5 d進(jìn)行劃分，切片處理后利用干濕重法測量腦組織含水量，同時(shí)對組織Hsp-70、TNF-a的含量進(jìn)行檢測。結(jié)果 腦出血治療組中各亞組的血腫周圍含水量和ICH組相比明顯較低(第一組的除外)(P<0.01)；Hsp-70陽性細(xì)胞表達(dá)高于ICH組(P<0.01)，TNF-a表達(dá)水平低于ICH組(P<0.01)。結(jié)論 托吡酯可以適當(dāng)增加Hsp-70，降低TNF-a表達(dá)，有利于提高強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞缺血耐受性，在神經(jīng)保護(hù)方面有積極作用。

腦出血；托吡酯；熱休克蛋白-70；腫瘤壞死因子-a

腦出血是一種在中老年群體中很常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其發(fā)病率不斷提高，這種疾病致死率較高，目前已引起廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，腦出血在一定時(shí)間內(nèi)相應(yīng)區(qū)域神經(jīng)元的病理改變是可逆的，因而在受損后如何盡快的采取有效治療措施使受損腦組織恢復(fù)功能，具有積極的意義[1-2]。托吡酯對癲癇具有較好的治療效果，不過關(guān)于其在出血性腦血管病治療方面的作用還缺乏相關(guān)研究。

1 材料和方法

1．1 材料 健康的成年雄性SD大鼠60只，鼠齡6～8周，將其平均分為3組每組20只，分別為假手術(shù)組ICH組ICH治療組，對各組繼續(xù)劃分為五個亞組，依據(jù)術(shù)后6 h、24 h、48 h、72 h、5 d進(jìn)行劃分，每亞組4只。

1．2 模型制作 采用自體股動脈取血法制備出腦出血模型，各組的制備過程相同，區(qū)別在于假手術(shù)組進(jìn)針尾殼核后不注血，在清醒狀態(tài)下對實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行神經(jīng)缺陷評分，確定出其中大于2分者并入選，假手術(shù)組全部入選。選好對象之后分籠飼養(yǎng)，保持合理的喂養(yǎng)和環(huán)境條件，ICH治療組術(shù)后5個時(shí)間點(diǎn)分別腹腔注射托吡酯混懸液，1次/d，劑量100 mg/kg，假手術(shù)組及ICH組在同樣條件下注射生理鹽水。

1．3 免疫組化檢測 各組大鼠術(shù)后按各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行麻醉處理，之后開腹剪開右心耳，將正常生理鹽水注入到左心室，一直到灌注液變清亮為止，取出腦組織后做冠狀切片，如果切片中出現(xiàn)明顯的圓形、橢圓形等腫塊則認(rèn)為模型成功。將制備的腦片分為A、B二片，A片經(jīng)過一系列的脫水處理后用石蠟65 ℃條件下包埋，為免疫組化檢測做好準(zhǔn)備。B片為測腦含水量的備用。

1．4 觀察指標(biāo)

1．4．1 腦含水量測定：取B片準(zhǔn)確測量其濕重后進(jìn)行烘烤處理并最終取出稱量干重，并以此來確定其含水量。

1．4．2 圖像分析：在顯微鏡下進(jìn)行DAB染色，HSP70陽性細(xì)胞會被染為褐色，并記錄視野陽性細(xì)胞數(shù)，后確定出其平均值。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理，并利用單因素方差法對組間結(jié)果進(jìn)行對比。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 腦組織含水量測定 各組腦組織含水量變化情況存在明顯區(qū)別，假手術(shù)組沒有變化；ICH組腦組織24 h開始出現(xiàn)顯著變化，至72 h達(dá)到最大值；ICH治療組和ICH組一致。見表1。

2．2 Hsp-70、TNF-a免疫組化染色 假手術(shù)組相應(yīng)的HSP70表達(dá)很少；ICH組6 h后檢測到一定的Hsp-70陽性細(xì)胞，48～72 h達(dá)到最大值，之后一直保持這一水平；ICH治療組和ICH組相同；后2組和假手術(shù)組相比結(jié)果存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。見表2。TNF-a的表達(dá)在ICH組6 h后出現(xiàn)顯著變化，72 h達(dá)最大值，假手術(shù)組在各時(shí)間點(diǎn)變化不明顯，ICH和ICH組相同；后2組和假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表1 各組大鼠ICH后血腫周圍腦組織的含水量±s)

注：假手術(shù)組與ICH組比較，*1P<0.05，△1P<0.01；ICH組與ICH治療組比較，*2P<0.05，△2P<0.01。ICH治療組與假手術(shù)組比較，*3P<0.05，△3P<0.01

表2 各組大鼠ICH后血腫周圍hsp70陽性細(xì)胞數(shù)的比較±s)

注：假手術(shù)組與ICH組比較，*1P<0.05，△1P<0.01；ICH組與ICH治療組比較，*2P<0.05，△2P<0.01。ICH治療組與假手術(shù)組比較，*3P<0.05，△3P<0.01

表3 各組大鼠ICH后血腫周圍TNF-a表達(dá)的比較

注：假手術(shù)組與ICH組比較，*1P<0.05，△1P<0.01；ICH組與ICH治療組比較，*2P<0.05，△2P<0.01。ICH治療組與假手術(shù)組比較，*3P<0.05，△3P<0.01

3 討論

腦出血是一種常見的腦部疾病，其致死率較高，主要是由于腦損傷后出現(xiàn)繼發(fā)性水腫導(dǎo)致，這類疾病對腦出血患者的健康和生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重影響[3]。托吡酯是一種抗癲癇類的常用藥物，其胃腸吸收好，可以被生物體高效利用。近年來很多研究發(fā)現(xiàn)，托吡酯對缺血性腦血管病具有一定治療效果，會減少了神經(jīng)細(xì)胞興奮性毒性損傷從而起到相應(yīng)的療效，其還可以抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增生[4]。HSP蛋白可以起到一定的防降解作用，并抑制細(xì)胞凋亡，可以利用其作為細(xì)胞遭受可逆性損傷的標(biāo)志。本文研究發(fā)現(xiàn)，HSP70在出血后6 h開始表達(dá)，72 h達(dá)到最大值，隨后緩慢下降。TNF-a是一種多肽類細(xì)胞因子其在腦出血后6 h開始表達(dá)，并參與到腦損傷過程中[5]。

總之，托吡酯可以促進(jìn)HSP70的表達(dá)，降低炎癥反應(yīng)從而起到相應(yīng)的保護(hù)作用。在對腦出血相關(guān)的繼發(fā)性損害進(jìn)行治療時(shí)需要選擇多種方法，可采用降低顱壓和手術(shù)處理的方法，同時(shí)行其他探索，為發(fā)現(xiàn)新的治療方法打下基礎(chǔ)。

[1] 王新征，劉金彪，侯永強(qiáng)，等．分化型甲狀腺癌組織中 HSP70與 TNF-α的表達(dá)及與臨床病理的相關(guān)性[J]．中國老年學(xué)雜志，2015，36(1)：112-113．

[2] Jiang H ，Lei JJ，Zhang YH．Protective effect of topiramate on hypoxic-ischemic brain injury in neonatal rat．[J]．Asian Pac J Trop Med，2014，7(6)：496-500．

[3] 陶秀娟，宋琳，劉賀榮，等．血清TNF-α和HSP70表達(dá)水平與回漢族2型糖尿病關(guān)系的研究[J]．軍事醫(yī)學(xué)，2014，(12)：940-944．

[4] Wang X，Luo Y，Sun H，et al．Dynamic expression changes of Bcl-2，Caspase-3 and Hsp70 in middle cerebral artery occlusion rats[J]．Brain Inj，2015，29(1)：93-97．

[5] 劉小轉(zhuǎn)，李三強(qiáng)，任江濤，等．HSP70、 IL-6和TNF-α在CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷組織中的表達(dá)及意義[J]．山東醫(yī)藥，2011，51(35)：17-19．

(收稿2016-06-12)

山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2014HL037)

R743.34

A

1673-5110(2017)01-0050-03