趙 克 趙 明 徐 欣 韓 磊 尤 宇 趙四軍

鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科 鄭州 450008

不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中MGMT與XRCC1基因的表達(dá)及相關(guān)性分析

趙 克 趙 明 徐 欣 韓 磊 尤 宇 趙四軍

鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科 鄭州 450008

目的 分析不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中MGMT與XRCC1基因的表達(dá)及相關(guān)性。方法 選取我院2012-06—2013-06收治的65例腦膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象，設(shè)為膠質(zhì)瘤組，另選取腦組織正常的顱內(nèi)高壓患者40例，設(shè)為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)室檢查切除的腦組織，比較MGMT、XRCC1在膠質(zhì)瘤與正常腦組織中的表達(dá)情況，MGMT、XRCC1在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的分布，并分析MGMT與XRCC1表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果 膠質(zhì)瘤組MGMT表達(dá)陽(yáng)性率(46.15%)高于對(duì)照組(2.50%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MGMT在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中的分布比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。膠質(zhì)瘤組XRCC1表達(dá)陽(yáng)性率(38.46%)高于對(duì)照組(5.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。XRCC1在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中的分布比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MGMT與XRCC1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r=0.897，P=0.346)。結(jié)論 腦膠質(zhì)瘤患者M(jìn)GMT與XRCC1表達(dá)陽(yáng)性率較正常腦組織高，MGMT與XRCC1在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中分布無(wú)顯著差異，且表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)性。

不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤；正常腦組織；MGMT；XRCC1；相關(guān)性

腦膠質(zhì)瘤起源于腦組織中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，是顱內(nèi)最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腫瘤，占顱內(nèi)腫瘤的40%以上[1]。腦膠質(zhì)瘤與肝癌、肺癌并稱為人體三大早亡的實(shí)體惡性腫瘤，其生存期較短。目前，臨床主要采用手術(shù)聯(lián)合放、化療等綜合治療方案進(jìn)行治療，但術(shù)后復(fù)發(fā)率極高，接近100%，嚴(yán)重威脅患者身體健康，且臨床也缺少療效確切的化療藥物，預(yù)后較差，臨床治療是神經(jīng)外科醫(yī)師面臨的重要難題[2]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，監(jiān)測(cè)腫瘤基因表達(dá)產(chǎn)物逐漸被應(yīng)用到臨床試驗(yàn)中。本文分析不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中MGMT(06-甲基鳥(niǎo)嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶)與XRCC1(人類X線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1)基因的表達(dá)及相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取我院2012-06—2013-06收治的65例腦膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象(膠質(zhì)瘤組)，另選取腦組織正常的顱內(nèi)高壓患者40例為對(duì)照組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查通過(guò)，所有患者均簽署知情同意書(shū)。膠質(zhì)瘤組男40例，女25例；年齡18～70(40.56±7.68)歲；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤患者分別為13例、15例、21例、16例。對(duì)照組男28例，女12例；年齡20～72(40.37±7.75)歲。2組性別、年齡等基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1．2 方法 做腦部手術(shù)冰凍切片，且經(jīng)病理診斷為惡性，30 min后取材，甲醛固定1～2 d后自來(lái)水沖洗，酒精脫水，二甲苯與無(wú)水酒精透明，經(jīng)過(guò)浸蠟、包埋、切片、展片及粘片等制成切片后進(jìn)行HE染色，常規(guī)病理切片觀察，采用S-P免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生采用雙盲法觀察，對(duì)照為贈(zèng)送的陽(yáng)性結(jié)果切片，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，細(xì)胞膜與細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表現(xiàn)，染色后用低倍鏡觀察，然后用高倍視野觀察，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。參考標(biāo)準(zhǔn)：(1)0分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%；1分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為6%～50%；3分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為51%～75%；4分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>75%。(2)陽(yáng)性強(qiáng)度：1分為淡黃色，2分為黃色，3分為棕褐色。以(1)、(2)乘積判斷陽(yáng)性等級(jí)，陰性(-)為0分，弱陽(yáng)性(+)為1～4分，陽(yáng)性(++)為5～8分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)為9～12分。

1．3 觀察指標(biāo) MGMT、XRCC1在膠質(zhì)瘤與正常腦組織中的表達(dá)情況，MGMT、XRCC1在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的分布；并比較MGMT與XRCC1表達(dá)的關(guān)系。

2 結(jié)果

2．1 MGMT在膠質(zhì)瘤與正常腦組織中的表達(dá)情況比較 膠質(zhì)瘤組MGMT表達(dá)陽(yáng)性率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 MGMT在膠質(zhì)瘤與正常腦組織中的表達(dá)情況比較 [n(%)]

2．2 MGMT在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的分布 MGMT在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中分布比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 MGMT在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的分布

2．3 XRCC1在腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織患者腦組織中表達(dá)情況比較 膠質(zhì)瘤組XRCC1表達(dá)陽(yáng)性率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 XRCC1在腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織患者腦組織中表達(dá)情況比較 [n(%)]

2．4 XRCC1在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的分布 XRCC1在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中分布比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 XRCC1在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的分布

2．5 MGMT與XRCC1表達(dá)的關(guān)系 進(jìn)行相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MGMT與XRCC1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r=0.897，P=0.346)。見(jiàn)表5。

表5 MGMT與XRCC1表達(dá)的關(guān)系

3 討論

2007年，世界衛(wèi)生組織(WHO)根據(jù)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞組成、血管增生、不典型性、浸潤(rùn)程度等病理學(xué)、組織學(xué)因素將腦膠質(zhì)瘤分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)，每個(gè)級(jí)別中又有各自的分類；近年來(lái)，膠質(zhì)瘤發(fā)病率逐年提高，5 a存活率為20%～30%[3]。膠質(zhì)瘤具有浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、生長(zhǎng)迅速等特點(diǎn)，采用手術(shù)聯(lián)合化療等綜合治療方法也療效甚微。研究表明，MGMT與XRCC1的表達(dá)情況與腦膠質(zhì)瘤有密切相關(guān)[4]。胡永珍等[5]認(rèn)為MGMT與XRCC1基因單核苷酸多態(tài)性與惡性腫瘤的發(fā)生相關(guān)，MGMT與XRCC1可能參與維持基因組的穩(wěn)定性，也可與抑癌基因p53相互作用。

本研究主要分析不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中MGMT與XRCC1基因的表達(dá)及相關(guān)性。MGMT與XRCC1在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤中分布比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是不同個(gè)體、不同器官、同一腫瘤組織的不同部位MGMT與XRCC1的基因表達(dá)存在較大差異，且不同級(jí)別腫瘤細(xì)胞染色強(qiáng)度與分布不均勻，所以MGMT與XRCC1的基因的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤惡性程度無(wú)關(guān)聯(lián)。膠質(zhì)瘤組MGMT、XRCC1表達(dá)陽(yáng)性率高于對(duì)照組，MGMT作為一種修復(fù)O6甲基鳥(niǎo)嘌呤的酶，可修復(fù)DNA損傷，且修復(fù)DNA烷化損傷的重要酶類，因此惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞可對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。在腫瘤細(xì)胞中，XRCC1編碼的蛋白質(zhì)與DNA連接酶Ⅲ可相互作用，可使DNA單鏈斷裂得到修復(fù)，致使腫瘤細(xì)胞耐藥；腫瘤細(xì)胞XRCC1表達(dá)陽(yáng)性率越高，則DNA修復(fù)能力越強(qiáng)，也會(huì)導(dǎo)致腫瘤耐藥性增強(qiáng)。Tang等[6]研究表明，MGMT與XRCC1可通過(guò)加強(qiáng)表達(dá)促進(jìn)DNA的自我修復(fù)，均為參與腫瘤自我修復(fù)的部分基因。MGMT與XRCC1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)無(wú)相關(guān)性，腫瘤的發(fā)生與發(fā)展是多事件、多基因、多階段復(fù)雜過(guò)程積累的結(jié)果。本研究選取樣本量較少，不能得出肯定的結(jié)論，尚需進(jìn)一步研究。張亞飛[7]對(duì)不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中MGMT與XRCC1基因的表達(dá)及相關(guān)性研究結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤患者M(jìn)GMT與XRCC1表達(dá)陽(yáng)性率較高，在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中分布無(wú)顯著差異，兩者表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性。

綜上，腦膠質(zhì)瘤患者M(jìn)GMT與XRCC1表達(dá)陽(yáng)性率高于正常腦組織，在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中分布無(wú)顯著差異，且表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)性，尚需進(jìn)一步研究。

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(收稿2016-06-27)

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1673-5110(2017)01-0043-03