□ 徐 磊 南陽理工學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本次實(shí)驗(yàn)所采取的菌種為金針菇液體菌種，菌種共分為五種，分別是金 2153、雜 19、 金 21、 雜 8801、 雜908，這五種金針菇液體菌種均是從菌種實(shí)驗(yàn)室中獲得的。為了驗(yàn)證這五種菌種在不同培養(yǎng)基中的培養(yǎng)情況，需要進(jìn)行麩皮水解，通過將適當(dāng)麩皮經(jīng)水調(diào)和而形成漿糊狀，并加入水進(jìn)行煮沸10 min，利用四層紗布對(duì)其進(jìn)行過濾來獲得。在麩皮、馬鈴薯汁、玉米粉漿制作完畢后，在PDA培養(yǎng)基中摻入濃度為0.08%的K2HPO4、濃度為0.05%的硫酸鎂、0.3%的酵母膏及1%的玉米粉。經(jīng)高壓蒸汽對(duì)PDA培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理后進(jìn)行斜面擺放。而搖瓶培養(yǎng)基則是以馬鈴薯、玉米粉及麩皮作為主要原料并摻入相應(yīng)的生長因子制作而成。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本次實(shí)驗(yàn)方法采用菌球計(jì)數(shù)法，取1 mL的培養(yǎng)液進(jìn)行10 mL的稀釋，然后在稀釋后的培養(yǎng)液中取1 mL放入平皿容器中，在容器的下部置入黑色的背景紙進(jìn)行計(jì)數(shù)。取100 mL的培養(yǎng)液，利用80目的篩布對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行過濾，待水變清以后，將菌絲球放入定性濾紙當(dāng)中，然后放入60 ℃的干燥箱中進(jìn)行烘干，直至達(dá)到恒重時(shí)對(duì)其進(jìn)行稱重。對(duì)糖分與pH值的測(cè)定分別采用WYZ-4型糖度計(jì)與SDJ-1型進(jìn)行測(cè)定。

1.3 實(shí)驗(yàn)流程

金針菇液體菌種的菌株培養(yǎng)流程是將菌種轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，活化溫度為25 ℃，活化時(shí)間為8 d，并獲得余面母種，然后放入搖床中進(jìn)行培養(yǎng)，搖床培養(yǎng)溫度為25 ℃，放入恒溫振蕩器中，轉(zhuǎn)速為150至220轉(zhuǎn)每分鐘，搖床培養(yǎng)時(shí)間為7～8 d，然后進(jìn)行搖并培養(yǎng)并稀釋，最后將其接種到固體培養(yǎng)基當(dāng)中。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 PDA培養(yǎng)基中的金針菇液體菌種篩選

將上述的五種菌種利用接種鏟與接種鋤在無菌環(huán)境中分別轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基當(dāng)中，各試管分別接入1～2 mL厚，面積為0.5 cm2的菌種，并將其放置在培養(yǎng)箱中25 ℃環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，然后對(duì)菌種的生長情況進(jìn)行定期觀察。觀察結(jié)果顯示，雜908菌種與金21菌種在的生長情況要比另外三種菌種的生長長勢(shì)要好得多，并將這兩種菌株作為實(shí)驗(yàn)的后續(xù)菌種。

2.2 單因子測(cè)定

將這兩種菌種分別當(dāng)作培養(yǎng)基主料進(jìn)行單因子正交實(shí)驗(yàn)，并對(duì)這兩種菌種的生長情況進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)金針菇菌種的化學(xué)成分及培養(yǎng)原料的化學(xué)結(jié)構(gòu)和碳氮比，來對(duì)各個(gè)培養(yǎng)基的配方進(jìn)行確定，分別在不同的培養(yǎng)基中摻入3%的玉米粉、20%的馬鈴薯及2%的麩皮，在不同培養(yǎng)基中加入的生長因子相同，然后對(duì)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行記錄。記錄結(jié)果表明，在雜908菌種與金21菌種中，金21菌種的糖度下降速度要比雜908菌種較快，并且在培養(yǎng)完畢以后，取出的種液質(zhì)量相對(duì)較好，由此可以證明金21液體菌種的活性要比雜908菌種較高。

2.3 搖瓶培養(yǎng)基中金針菇液體菌種的正交實(shí)驗(yàn)

依據(jù)上述實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果，并借鑒范貴增等人的實(shí)驗(yàn)理論和結(jié)晶，本文采用葡萄糖、馬鈴薯與玉米粉作為培養(yǎng)基中的三因子，在不同培養(yǎng)基中的共同成分包括0.08%濃度的K2HPO4、濃度為0.02%的KH2PO4及濃度為0.05%的硫酸鎂，試驗(yàn)菌株為篩選出的最佳生長液體菌種，即金21菌種，采用L4（23）正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行結(jié)果分析[1]，結(jié)果分析表明金81液體菌種的金針菇在生長過程中玉米粉、馬鈴薯及葡萄糖對(duì)生長情況的影響程度按照從大到小進(jìn)行排列，即玉米粉（R=11）＞馬鈴薯（R=3）＞葡萄糖（R=2)。由此可以設(shè)定最佳的培養(yǎng)基配方為A2B1C2，進(jìn)而確定出搖瓶培養(yǎng)基的最佳配方是玉米粉摻入量為3%、K2HPO4濃度為0.08%、馬鈴薯摻入量為15%、葡萄糖摻入量為0.5%、KH2PO4濃度為0.02%、硫酸鎂濃度為0.05%。

2.4 金針菇液體菌種生長情況測(cè)定

為了對(duì)金21液體菌種在搖床中的最佳培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行確定，分別對(duì)培養(yǎng)液與菌種的變化情況進(jìn)行觀察，并在金21液體菌種活力最旺盛時(shí)中斷培養(yǎng)，然后對(duì)獲得的菌種生長量進(jìn)行測(cè)定，在菌種生長量測(cè)定過程中，所采用的培養(yǎng)基為上述獲得的最佳搖瓶培養(yǎng)基，其在對(duì)菌種進(jìn)行培養(yǎng)之前的pH值為6.5，糖度值為3.6 °Bé[2]。經(jīng)過測(cè)定結(jié)果表明，金21菌種在第7～8 d時(shí)的產(chǎn)量最大，不過需要對(duì)菌種活力進(jìn)行重點(diǎn)考慮。該菌種的搖床培養(yǎng)最佳時(shí)間為7 d時(shí)菌種的活力最高，且生長量也最大，菌絲球數(shù)量及直徑（小于3 mm）也能夠滿足實(shí)驗(yàn)要求，由此表明，金針菇金21液體菌種是五種菌種中發(fā)酵罐與固體栽培的最佳菌種。

[1]彭璐 ,楊 健華 ,王 巍 ,等 .柳生金針菇發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化及菌絲體多糖提取工藝[J].食用菌,2017(5)：24-28.

[2]楊云靜.金針菇“江山一號(hào)”營養(yǎng)要素篩選及其液體菌種培養(yǎng)研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué),2017.