王好玉，高峰，李偉宏，賈海江，潘愛霞

1.青州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青州 262500；2.青州市疾病控制中心檢驗(yàn)科，山東青州 262500

熒光PCR技術(shù)在從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查中的應(yīng)用

王好玉1，高峰1，李偉宏1，賈海江2，潘愛霞2

1.青州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青州 262500；2.青州市疾病控制中心檢驗(yàn)科，山東青州 262500

目的 探討熒光PCR技術(shù)在從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查中的應(yīng)用效果。方法2015年1月—2016年12月期間，該院與青州市疾控中心聯(lián)合查體，對(duì)青州市從業(yè)人員進(jìn)行傷寒痢疾篩查，以5 900例的肛拭子糞便標(biāo)本作為研究對(duì)象，對(duì)5 900例從業(yè)人員的肛拭子糞便樣本分別實(shí)施傳統(tǒng)國標(biāo)方法和熒光PCR技術(shù)進(jìn)行篩查。將其中檢出的陽性樣本進(jìn)行血清鑒定和生化鑒定。結(jié)果 培養(yǎng)確診的沙門氏菌陽性率為0.85%，志賀氏菌陽性率為0.85%；熒光PCR技術(shù)檢出的沙門氏菌陽性率為1.19%，志賀氏菌陽性率為10.17%；傳統(tǒng)國標(biāo)方法檢出的沙門氏菌陽性率為0.34%，志賀氏菌陽性率為0.51%。熒光PCR技術(shù)檢查的沙門氏菌陽性率和志賀氏菌陽性率與培養(yǎng)確診的陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；傳統(tǒng)國標(biāo)方法檢出的沙門氏菌陽性率和志賀氏菌陽性率與培養(yǎng)確診的陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 熒光 PCR 沙門氏菌檢測陽性 5（A）、2（C），陰性 0（B）、5 893（D）；培養(yǎng)確診沙門氏菌檢測陽性 5（A）、0（B）；陰性2（C）、5 893（D）。熒光PCR技術(shù)檢查對(duì)沙門氏菌檢測結(jié)果的靈敏度顯著高于傳統(tǒng)國標(biāo)方法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 熒光 PCR 志賀氏菌檢測陽性 4（A）、2（C），陰性 0（B）、5 896（D）；培養(yǎng)確診志賀氏菌檢測陽性 4（A）、0（B）；陰性2（C）、5 896（D）。熒光PCR技術(shù)檢查對(duì)志賀氏菌檢測結(jié)果的靈敏度顯著高于傳統(tǒng)國標(biāo)方法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論P(yáng)CR篩查法檢測技術(shù)對(duì)健康體檢人員的腸道致病菌進(jìn)行快速篩查可以使檢驗(yàn)的時(shí)間得以縮短，而且特異度強(qiáng)、靈敏度高，兼具時(shí)效性與客觀性，更適合基層實(shí)驗(yàn)室規(guī)范統(tǒng)一地開展健康帶菌檢測工作。

熒光PCR技術(shù)；傷寒痢疾；快速篩查

食品從業(yè)人員及公共場所從業(yè)人員攜帶腸道致病菌是威脅公眾健康的一個(gè)重要問題，也是造成食品污染和食品中毒的間接因素。因此，對(duì)從業(yè)人員傷寒痢疾進(jìn)行快速篩查是一項(xiàng)十分重要的工作。傳統(tǒng)的從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查采取的是國標(biāo)方法，這種方法雖然在從業(yè)人員傷寒痢疾篩查中具有一定的效果，但是這種篩查方式所需的時(shí)間較長，通常需要5～7 d的時(shí)間，并且該篩查方式還存在靈敏度較低的問題。因此，臨床急需一種快速、高效、靈敏度較高的篩查方式。熒光PCR技術(shù)的引入和應(yīng)用為從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查提供了一條全新的途徑，在從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查中表現(xiàn)出了較大的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)[1]。2015年1月—2016年12該研究對(duì)熒光PCR技術(shù)在從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查中的應(yīng)用效果進(jìn)行了研究，以期為提高從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查水平提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究選取2015年1月—2016年12月青州市從業(yè)人員5 900例的肛拭子糞便標(biāo)本作為研究對(duì)象，男3 500例，女2 400例，年齡 26～52歲，平均年齡為（43.2±3.2）歲。

1.2 研究方法

對(duì)5900例從業(yè)人員的肛拭子糞便樣本分別實(shí)施傳統(tǒng)國標(biāo)方法和熒光PCR技術(shù)進(jìn)行篩查。具體如下：①傳統(tǒng)國標(biāo)方法：參照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB-T4789.4-2003）和《食品衛(wèi)生微生物學(xué)志賀氏菌檢驗(yàn)》（GB-T4789.5-2003）進(jìn)行檢測。②PCR技術(shù)篩查：參照WS/T454-2014《從業(yè)人員預(yù)防性健康檢查沙門菌志賀菌檢驗(yàn)方法》技術(shù)方案用實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測。將其中檢出的陽性樣本進(jìn)行血清鑒定和生化鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組篩查方式的陽性率比較

培養(yǎng)確診的沙門氏菌5例，陽性率為0.85%，志賀氏菌5例，陽性率為0.85%；熒光PCR技術(shù)檢出的沙門氏菌7例，陽性率為1.19%，志賀氏菌6例，陽性率為10.17%；傳統(tǒng)國標(biāo)方法檢出的沙門氏菌2例，陽性率為0.34%，志賀氏菌3例，陽性率為0.51%。熒光PCR技術(shù)檢查的沙門氏菌陽性率和志賀氏菌陽性率與培養(yǎng)確診的陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；傳統(tǒng)國標(biāo)方法檢出的沙門氏菌陽性率和志賀氏菌陽性率與培養(yǎng)確診的陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 熒光PCR技術(shù)檢查對(duì)沙門氏菌檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率

靈敏度=A/(A+B)×100%=10/(10+0)×100%=100%；特異性=D/(C+D)×100%=11 787/(3+11 787)×100%=99.97%。熒光 PCR 沙門氏菌檢測陽性 5（A）、2（C），陰性 0（B）、5 893（D）；培養(yǎng)確診沙門氏菌檢測陽性 5（A）、0（B）；陰性 2（C）、5 893（D）。熒光 PCR技術(shù)檢查對(duì)沙門氏菌檢測結(jié)果的靈敏度顯著高于傳統(tǒng)國標(biāo)方法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 熒光PCR技術(shù)檢查對(duì)志賀氏菌檢測結(jié)果的準(zhǔn)確率

靈敏度=A/(A+B)×100%=9/(9+0)×100%=100%；特異性=D/(C+D)×100%=11 789/(2+11 789)×100%=99.98%。 熒光 PCR 志賀氏菌檢測陽性 4（A）、2（C），陰性 0（B）、5 896（D）；培養(yǎng)確診志賀氏菌檢測陽性 4（A）、0（B）；陰性2（C）、5 896（D）。熒光 PCR 技術(shù)檢查對(duì)志賀氏菌檢測結(jié)果的靈敏度顯著高于傳統(tǒng)國標(biāo)方法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

按照我國頒布實(shí)施的《中華人民共和國食品衛(wèi)生安全法》《公共場所衛(wèi)生管理?xiàng)l例》中的相關(guān)要求來看，對(duì)于患有痢疾、傷寒、病毒性肝炎(消化道傳播)、活動(dòng)性肺結(jié)核，化膿性或者滲出性皮膚病以及其他有妨礙公共衛(wèi)生等疾病的患者，在沒有得到良好治愈的情況下，不得從事直接為顧客服務(wù)的工作。這一規(guī)定是從疾病防治的角度出發(fā)來考慮的，其實(shí)施的主要目的是為了更好地維護(hù)公共健康，降低以上各類疾病的傳播。

在以上幾種危害公共健康的疾病之中，傷寒痢疾是一種危害性較大的疾病，具有較強(qiáng)的傳染性，傷寒痢疾無臨床癥狀，因此不易被人們重視，并加以管理，常常由于排菌污染食品而導(dǎo)致傷寒痢疾的傳播和流行，對(duì)公眾的健康造成了極大的危害。因此，傷寒痢疾成為了危害公共健康的一個(gè)重要因素。鑒于此，對(duì)從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查，對(duì)于維護(hù)公共健康具有重要的意義。而要想實(shí)現(xiàn)對(duì)從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查，就需要一種高效、快速、高靈敏度的篩查方法，這對(duì)于確保從業(yè)人員傷寒痢疾的篩查效果十分重要。

一直以來沿用的傳統(tǒng)的從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查，主要采取的是國標(biāo)方法，這種篩查方法是參照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB-T4789.4-2003）和《食品衛(wèi)生微生物學(xué)志賀氏菌檢驗(yàn)》（GB-T4789.5-2003）中的相關(guān)規(guī)定和要求制定檢測方案進(jìn)行檢測的。傳統(tǒng)的國標(biāo)方法一直以來在從業(yè)人員傷寒痢疾篩查中具有一定的效果，因此，長久以來從業(yè)人員傷寒痢疾的篩查一直沿用這種檢測方法。但是在長久的實(shí)踐應(yīng)用中，傳統(tǒng)國標(biāo)方法在從業(yè)人員傷寒痢疾篩查中的缺點(diǎn)和不足也逐漸凸顯，首先這種檢測方法用時(shí)較久，一般來說一次檢測往往需要5～7 d的時(shí)間才能夠獲得檢測結(jié)果，因此，這種檢測方法無法實(shí)現(xiàn)快速篩查。其次傳統(tǒng)國標(biāo)方法在從業(yè)人員傷寒痢疾的檢測中還存在靈敏度較低的問題。因此，傳統(tǒng)國標(biāo)方法在從業(yè)人員傷寒痢疾篩查中的應(yīng)用，并不理想。在這樣的情況之下，臨床急需一種快速、高效、靈敏度較高的從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查方式，來提高從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查的篩查速度、篩查效率和篩查沒靈敏度。

熒光PCR技術(shù)的引入和應(yīng)用為從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查提供了一條全新的途徑[2]。熒光PCR技術(shù)是WS/T454-2014《從業(yè)人員預(yù)防性健康檢查沙門菌志賀菌檢驗(yàn)方法》技術(shù)方案以經(jīng)典培養(yǎng)法為依據(jù)，利用實(shí)時(shí)熒光PCR法靈敏、快速的優(yōu)點(diǎn)和經(jīng)典培養(yǎng)方法準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點(diǎn)相結(jié)合，從而探討建立高效、準(zhǔn)確、省力的一種全新的從業(yè)人員傷寒痢疾篩查方案。這一檢測方案在從業(yè)人員傷寒痢疾快速篩查中的應(yīng)用，表現(xiàn)出了極大的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。從該次研究結(jié)果來看，該次研究通過對(duì)5 900例從業(yè)人員的肛拭子糞便樣本實(shí)施篩查，最終檢出了沙門菌5例，陽性率為0.85%和志賀菌5例，陽性率為0.85%。而熒光PCR技術(shù)檢出的沙門氏菌7例，陽性率為1.19%，志賀氏菌6例，陽性率為10.17%；傳統(tǒng)國標(biāo)方法檢出的沙門氏菌2例，陽性率為0.34%，志賀氏菌3例，陽性率為0.51%。熒光PCR技術(shù)檢查的沙門氏菌陽性率和志賀氏菌陽性率與培養(yǎng)確診的陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；傳統(tǒng)國標(biāo)方法檢出的沙門氏菌陽性率和志賀氏菌陽性率與培養(yǎng)確診的陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這一結(jié)果提示出，熒光PCR檢測方法對(duì)沙門氏菌和志賀氏菌的檢測準(zhǔn)確率更高，與培養(yǎng)確診結(jié)果更加符合，在從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查中具有更高的應(yīng)用價(jià)值。且該次研究結(jié)果還表明，熒光PCR檢測在從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查中，較傳統(tǒng)國標(biāo)方法具有更高的靈敏度和特異性。由此可見，熒光PCR篩查法在從業(yè)人員傷寒痢疾篩查中具有更加顯著的應(yīng)用效果，不僅如此，熒光PCR篩查法的引入和應(yīng)用，還給從業(yè)人員的傷寒痢疾篩查工作帶來了改革與進(jìn)步。具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：其一是表現(xiàn)在采樣環(huán)節(jié)的改革與進(jìn)步，熒光PCR篩查過程中，所配套使用的生科源 “多功能采樣器”，為一體化的專業(yè)設(shè)計(jì)，該設(shè)計(jì)集合了采樣環(huán)節(jié)所涉及的采樣、運(yùn)輸、增菌、取樣多功能需求。多功能采樣器配備了滅菌增菌液，這樣的設(shè)計(jì)省去了傳統(tǒng)方法篩查過程中的采樣瓶清洗、配液、消毒等環(huán)節(jié)，可直接進(jìn)行使用。這樣的設(shè)計(jì)一方面節(jié)省了傳統(tǒng)篩查方法中進(jìn)行采樣時(shí)，需進(jìn)行人工準(zhǔn)備過程中所消耗的大量人力，另一方面這樣的設(shè)計(jì)也很好地消除了該環(huán)節(jié)潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。不僅如此，多功能采樣器在制造過程中使用的是全塑料組件，全塑料組件具有不破碎、不漏液的優(yōu)點(diǎn)，這樣能夠很好地避免標(biāo)本在運(yùn)輸過程意外產(chǎn)生的樣本交叉污染問題。同時(shí)，在取樣時(shí)無需開啟采樣器瓶蓋，這樣能夠很好地避免標(biāo)本取樣的操作失誤和標(biāo)本污染[3]。其二是表現(xiàn)在檢測環(huán)節(jié)的改革與進(jìn)步，主要表現(xiàn)在篩查結(jié)果儀器自動(dòng)判讀，可積極有效地規(guī)避、消除主觀因素造成的實(shí)驗(yàn)誤差；顯著的縮短了檢驗(yàn)時(shí)間，真正實(shí)現(xiàn)從業(yè)人員傷寒痢疾的快速篩查；且熒光PCR篩查能夠?qū)崿F(xiàn)一人操作，從而顯著減少了工作人員的工作量，提高了檢驗(yàn)工作效率；檢驗(yàn)結(jié)果所得的數(shù)據(jù)采取電腦管理，因此，檢驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)能夠?qū)崿F(xiàn)原始數(shù)據(jù)追溯[4]。該次研究中，所用的熒光PCR篩查技術(shù)，其中的PCR試劑應(yīng)用的是改良分子信標(biāo)設(shè)計(jì)。由于改良分子信標(biāo)更短，因此其與靶序列結(jié)合更緊密，使得擴(kuò)增條件要求不嚴(yán)。因此，應(yīng)用改良分子信標(biāo)設(shè)計(jì)的熒光PCR篩查方法更加適合在基層進(jìn)行大范圍的應(yīng)用，為實(shí)現(xiàn)基層推廣應(yīng)用提供了條件。綜合來看，該技術(shù)方案為整體技術(shù)方法，提供了從采樣到PCR篩查所需要配套的多功能采樣器、PCR試劑盒以及各技術(shù)環(huán)節(jié)的配套細(xì)節(jié)設(shè)計(jì)。新技術(shù)方案是剛頒布的國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，填補(bǔ)了這一領(lǐng)域的技術(shù)空白，是一個(gè)實(shí)用、簡便、有效的技術(shù)規(guī)范[5]。鑒于此，熒光PCR篩查法不僅具有快速、高效，高靈敏度、高特異度的從業(yè)人員傷寒痢疾篩查效果，同時(shí)該篩查方法也更加適合在基層進(jìn)行推廣應(yīng)用。

綜上所述，PCR篩查法檢測技術(shù)對(duì)健康體檢人員的腸道致病菌進(jìn)行快速篩查可以使檢驗(yàn)的時(shí)間得以縮短，而且特異度強(qiáng)、靈敏度高，兼具時(shí)效性與客觀性，更適合基層實(shí)驗(yàn)室規(guī)范統(tǒng)一地開展健康帶菌檢測工作。

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R466.13

A

1672-5654（2017）07（a）-0064-03

2017-04-05）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.19.064

王好玉（1962-），男，山東青州人，本科，副主任檢驗(yàn)師，研究方向：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。