張艷霞 長沙市中醫(yī)醫(yī)院（長沙市第八醫(yī)院） （湖南 長沙 410199）

淺探快速尿細菌培養(yǎng)方法的建立

張艷霞 長沙市中醫(yī)醫(yī)院（長沙市第八醫(yī)院） （湖南 長沙 410199）

尿路感染是人類最常見的感染之一，是尿道內有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥，通常伴隨有菌尿和膿尿。可發(fā)生于各個年齡段的人群。典型的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛，臨床表現(xiàn)可因患者的年齡和健康狀況不同而異。診斷尿路感染最常用的方法是進行尿液標本的細菌學檢查，而傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)方法需要3～4d才能出鑒定藥敏結果。在藥敏結果出來之前，醫(yī)生只能根據經驗用藥，這就增加了醫(yī)生對患者病情掌握的不確定性。目前臨床微生物鑒定藥敏試驗的方法有兩種，第一種方法是沿用100多年前由Gram、Pasteur、Koch及Petri等創(chuàng)造的傳統(tǒng)的微生物學鑒定方法。用常規(guī)的手工方法即通過細菌的形態(tài)、生理、生化性狀等對細菌進行分類鑒定，并用紙片法進行藥敏試驗。目前使用最廣泛的方式，但過程繁瑣，費時費力。另一種方法是借助商品化的鑒定系統(tǒng)，免除了繁瑣的手工操作，通過細菌在反應板上的生化反應自動判讀結果，確定細菌種類。因操作較為簡單，功能齊全，而市場上此類儀器也較多，也已大量應用于臨床，但整個鑒定藥敏時間仍需3～4d。而臨床醫(yī)生在往往在治療患者的過程中，更多的是關注革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌或真菌及其藥敏，而非細菌具體種類。

1.目的

通過自動微生物分析系統(tǒng)，優(yōu)化細菌培養(yǎng)條件，尋找一種快速而準確的尿培養(yǎng)及細菌鑒定、藥敏方法，從而在24～48h內報告細菌鑒定藥敏結果。提高時效的同時，準確率較高，為醫(yī)生提供及時可靠的診斷依據。

2.方法

2.1 定制微生物鑒定藥敏卡片

結合自動微生物藥敏分析系統(tǒng)，采用96孔板定制微生物鑒定藥敏卡片，分為革蘭染色陽性球菌藥敏卡片、革蘭染色陰性桿菌藥敏卡片、真菌鑒定藥敏卡片。結合臨床常用抗生素的使用并充分考慮其MIC，如：革蘭染色陰性

桿菌藥敏卡片的藥物包括AMP、AMC、PIP、TZP、MEM、ATM、CXM、FEP、CAZ、CRO、CFP、CSL、FOS、AMK、SXT、NIT、LVX、TGC，主要涉及的細菌含腸桿菌科細菌、銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌以及其他非發(fā)酵菌。革蘭染色陰性桿菌藥敏卡片的藥物包括AMP、AMC、PIP、TZP、MEM、ATM、CXM、FEP、CAZ、CRO、CFP、CSL、FOS、AMK、SXT、NIT、LVX、TGC，并充分考慮可能的MIC。主要涉及的細菌含腸桿菌科細菌、銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌以及其他非發(fā)酵菌。

2.2 細菌培養(yǎng)鑒定及藥敏試驗操作步驟

①按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》要求，取中段尿10mL置于15mL離心管中，接種血平板、中國藍平板，將平板置于CO2濃度為5%的、溫度為37?C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；②將標本以4000r/min離心10min，棄上清，取底層0.2mL尿沉渣加入裝有5mL肉湯培養(yǎng)基的小培養(yǎng)瓶中，混勻，置于220r/min、37?C的振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8h；③取出離心管，4000r/min離心10min，取少許沉渣涂片，革蘭染色并鏡檢，并初步報告鏡檢結果，如無菌生長、革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌、真菌等；④根據鏡檢結果選著藥敏卡片，并按標準操作規(guī)程操作藥敏試驗，置于37?C培養(yǎng)箱12h后上機檢測；⑤取血平板、中國藍平板上生長細菌染色鏡檢，并判斷是否與之前結果一致。如一致，報告藥敏結果。如不一致，取平板上分離出的細菌再進行藥敏。

3.結果

在培養(yǎng)8h后，能初步判斷細菌革蘭染色情況，在24h內報告細菌革蘭染色情況及藥敏結果。如前后革蘭染色結果不一致，則48h內報告鑒定藥敏結果。

4.結論

尿路感染在藥敏結果報告之前，往往是臨床醫(yī)生根據經驗用藥，容易造成誤用從而影響治療效果。通過改良試劑、耗材、操作步驟等從而縮短藥敏報告時間，很多程度依靠于藥敏試驗，這種改良的快速尿細菌培養(yǎng)方法相比傳統(tǒng)鑒定藥敏方法，能縮短鑒定藥敏藥敏時間，為臨床提供有價值診斷依據。但在具體的操作過程中，影響因素較多，如留取操作不規(guī)范，污染標本；標本內細菌總量不一致，影響8h時結果判斷。

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2017-06-16