李中華，劉華雷，張海明，嚴乾臨

（1. 福建省動物疫病預(yù)防控制中心，福建福州 350003；2. 中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島 266032；3. 廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州 510440）

東部沿海某縣活禽市場禽流感感染狀況調(diào)查

李中華1，劉華雷2，張海明3，嚴乾臨1

（1. 福建省動物疫病預(yù)防控制中心，福建福州 350003；2. 中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島 266032；3. 廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州 510440）

為了解東部沿海某縣活禽交易市場的禽流感感染狀況，分析相關(guān)風險因素，從而采取合適的干預(yù)措施減低其流行率，進行了4次連續(xù)橫斷面研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：該縣活禽市場的H7亞型流感流行率較高，為16.667%～50.000%；H5亞型流感流行率為0～33.333%；H9亞型禽流感流行率為0～16.667%。不同市場、不同攤位數(shù)、不同類型樣品間的病毒陽性率差異較大。對時間因素和不同類型病原進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該縣活禽市場各時間點的流行情況差異不顯著。本次調(diào)查表明，該縣活禽市場存在多種病原，提示應(yīng)加強生物安全措施。

禽流感；活禽市場；橫斷面研究；風險因素。

H7亞型禽流感病毒（Avian Infuenza，AI）為正黏病毒科流感病毒屬A型低致病性禽流感（LPAI）和無致病性禽流感（NPAI）病毒，可引起禽類極其輕微的臨床癥狀，甚至無癥狀。2013年以來發(fā)生的多起H7N9流感病毒感染人事件給我國家禽產(chǎn)業(yè)造成了巨大損失，從業(yè)人員流失嚴重[1]。有研究表明，活禽交易市場在流感病毒增殖和擴散中起重要作用[2]。活禽交易市場是發(fā)生人感染H7N9流感后，首先找到的病毒來源地，也是病毒感染率最高的場所[3]。據(jù)農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局公布的官方監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，2013年以前在活禽市場中很少檢出H7亞型禽流感病毒。H7N9亞型流感也是在發(fā)現(xiàn)人感染后，首次從市場中被檢出，養(yǎng)殖場、野鳥中極少發(fā)現(xiàn)該病毒的存在[4]。

東部沿海某縣為一個獨立的海上島嶼，與我國南方的家禽養(yǎng)殖模式極其相似，存在未良好規(guī)劃的養(yǎng)殖區(qū)域、多而散的小型養(yǎng)殖場，以及攤位不集中、管理松散的活禽市場。其所在省份從2013年以來已發(fā)生多起人感染H7N9流感事件，備受關(guān)注。該縣2015年首次在活禽市場中發(fā)現(xiàn)H7N9病毒，并采取了關(guān)閉活禽市場、禁止活禽交易、消毒撲殺等控制措施。為了解該縣活禽交易市場禽流感感染狀況，尤其是H7亞型流感的流行情況和風險因素，開展了本次感染狀況調(diào)查，進而通過合適的干預(yù)措施來減低其流行率。

1 材料與方法

1.1 研究設(shè)計

以活禽市場為研究對象，通過連續(xù)多次橫斷面研究，了解該地活禽市場禽流感感染狀況，研究其變化趨勢，并通過調(diào)查活禽市場的管理狀況、生物安全措施、活禽來源、檢疫情況、歷史監(jiān)測情況，等等，對活禽市場病原感染的風險因素進行定性分析，找出能降低該地區(qū)活禽攤位禽流感感染的措施。

1.2 病例定義

1.2.1 陽性禽。檢測為H5H7H9亞型禽流感陽性的禽。

1.2.2 陽性攤位。該攤位樣品中至少有1份檢測為H5H7H9禽流感陽性。

1.2.3 陽性市場。該市場樣品中至少有1份檢測為H5H7H9亞型禽流感陽性。

1.3 活禽市場的確定

以整個縣作為研究區(qū)域，對該區(qū)域內(nèi)的所有市場進行列表。因該區(qū)域沒有大型批發(fā)市場，僅有6個小型零售或零售兼批發(fā)市場，市場數(shù)少于10個，所以對該縣所有市場進行采樣。

1.4 市場內(nèi)及活禽攤位和活禽個體的抽樣

采取基于風險、發(fā)現(xiàn)疫病的原則進行采樣[5]。該區(qū)域共有15個活禽攤位，數(shù)量偏少，每次都全部采集。

根據(jù)參考文獻，黃羽肉雞最容易攜帶H7亞型禽流感病毒，因此攤位或檔內(nèi)優(yōu)先采集黃羽肉雞等存放時間較長的肉雞，沒有肉雞時按比例采集鵪鶉、鴿子、鴨等活禽。數(shù)量不足時，全部采集。

估計市場活禽最大存欄量在200只左右，每個攤位最大存欄100只，按照高風險群與攤位整群占比50%，高風險群的風險為低風險群的5倍，預(yù)期流行率p=10%，試驗敏感性Se=95%，Error=5%， CI=95%，按證明無疫的方法采樣，每個市場至少采集28份樣品，每個攤位至少采集17份樣品。在本次采樣中，每次采集所有攤位，每個攤位至少采集10份以上活禽咽喉和泄殖腔混合拭子，5份以上環(huán)境樣品，總計15份以上，6個市場15個攤位至少應(yīng)抽樣225份[6]。根據(jù)文獻報道，活禽市場中環(huán)境樣品的陽性率要高于活禽近30倍，因此攤位樣品的陽性檢出率相對多于預(yù)期的樣品數(shù)[7]。環(huán)境樣品優(yōu)先采集的位置如下：①殺雞案板邊緣；②殺雞抹布；③存放胴體或頻死雞的器具；④稱量工具；⑤殺雞用的刀柄；⑥雞群共同的飲水或污水；⑦已宰殺肉禽存放的臺面；⑧動物內(nèi)臟等廢棄物處理區(qū)域；⑨清潔地面的拖把；⑩雞籠內(nèi)側(cè)。每份均獨立放入離心管，加入保存液保存送檢[8]。具體抽樣數(shù)量見表1、表2。

表1 活禽市場不同時間的采樣數(shù)量 （單位：份）

表2 不同活禽市場不同時間點的采樣數(shù)量（單位：份）

1.5 開展問卷調(diào)查

首先由每個市場填寫一份調(diào)查表，內(nèi)容包括：市場規(guī)模布局、活禽來源、管理措施、消毒措施、衛(wèi)生狀況、以往感染監(jiān)測情況等。采樣過程中，采樣人員針對每個攤位填寫采樣調(diào)查表，內(nèi)容涉及攤位名稱、存欄量、日銷售量、活禽來源、衛(wèi)生狀況、檢疫狀況等。

1.6 實驗室檢測

首先將采集的樣品按攤位每5個樣品混合為1份[6]，采用THERMO公司全自動核酸提取儀提取病毒核酸，然后用Invitrogen公司A型禽流感熒光RT-PCR檢測試劑盒進行檢測。對檢測結(jié)果陽性的樣品，再用熒光RT-PCR 檢測H7、H5 和 H9 亞型禽流感病毒。如果H7、H5 和 H9亞型檢測結(jié)果為陽性，確定攤位為禽流感陽性。試劑公司提供的試劑盒靈敏性95%、特異性99%。

1.7 數(shù)據(jù)處理與分析

1.7.1 數(shù)據(jù)的錄入。將調(diào)查問卷、實驗檢測結(jié)果統(tǒng)一錄入EXCEL，處理數(shù)據(jù)的應(yīng)答率、完整性、可用性、可靠性、錯誤等情況[8]。

1.7.2 數(shù)據(jù)的分析。將所有變量進行統(tǒng)計學分析，應(yīng)用 SPSS 22、EXCEL 2007和EPI INFO 7.1.5進行[8-9]。

2 結(jié)果

2.1 活禽市場現(xiàn)狀及統(tǒng)計

該縣共有6個活禽市場，其中5個在城區(qū)，主要為零售，1個在郊區(qū)，主要為批發(fā)兼零售。各市場活禽攤位數(shù)差異較大，6個市場共有12～15個攤位，每個市場攤位數(shù)1～6個，3個攤位及以下的市場占比64.8%?；钋荽鏅诜矫妫菂^(qū)攤位存欄較少，存欄50只以下的攤位占比85.3%，日交易量50只以下攤位占比74.7%，郊區(qū)零售兼批發(fā)的市場存欄一般在300～800只之間。這些市場管理粗放，均未開展消毒、清群休市措施，清潔主要是清水沖洗。該縣市場活禽存欄及交易情況統(tǒng)計結(jié)果見表3。

2.2 總體檢測情況

分別在2016 年1月、3月、5月、8月，對該縣6個活禽農(nóng)貿(mào)市場進行了4批次共計51 攤/次的采樣調(diào)查，共采集 995份活禽口咽/泄殖腔棉拭子和環(huán)境拭子。結(jié)果檢測到H7亞型禽流感病毒陽性樣品最多，總計檢測到市場陽性7場/次，陽性率為16.667%～50.000%；檢測到H5亞型禽流感病毒市場陽性6場/次，陽性率為0～33.333%；檢測到H9 亞型禽流感病毒市場陽性1場/次，陽性率為0～16.667%。檢測出H7、H5亞型禽流感同時陽性2場/次，占總陽性市場的14.286%。

表3 市場活禽存欄及交易采樣情況統(tǒng)計

2.3 時間分布

不同檢測月份的樣品陽性率差異較大。其中，1月份檢測到的禽流感陽性最多，3月份最低（表4）。

表4 不同時間各亞型禽流感陽性率統(tǒng)計（單位：%）

2.4 空間分布

在1—8月的4次監(jiān)測中，各市場間的陽性率差異較大。其中，城關(guān)農(nóng)貿(mào)市場檢出禽流感陽性的次數(shù)最多，共檢出禽流感陽性6次；第二市場的禽流感陽性率最低，未檢出陽性（表5、表6）。

表5 不同活禽市場各亞類型禽流感檢測陽性次數(shù)統(tǒng)計 （單位：場次）

表6 不同市場檢測的陽性攤位情況

2.5 不同類型陽性樣品的分布

王劍波先生：在這一領(lǐng)域可以說是一個超級大風口。因為我們知道，隨著汽車智能化的演進，人機交互系統(tǒng)的屏幕越來越大，另外還需要有觸控功能，這對外層玻璃蓋板的技術(shù)要求也越來越高。如果我們回顧手機屏幕的發(fā)展歷史就會發(fā)現(xiàn)，以前基本是塑料屏幕，隨著智能手機的普及，大猩猩玻璃的應(yīng)用場景越來越廣泛。這樣的爆發(fā)式發(fā)展正在汽車行業(yè)內(nèi)重演。到2024年，1/3以上的汽車屏幕會變成3D曲面形式，這給大猩猩玻璃帶來了更高要求。我們的產(chǎn)品要足夠硬、足夠輕、耐刮擦、能承受汽車使用環(huán)境的溫差等。關(guān)于汽車風窗，使用大猩猩玻璃制作的汽車風窗玻璃強度大、重量輕，光學性能更好。

對不同類型活禽樣品以及環(huán)境樣品進行抽樣檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，禽流感陽性率最高的為雞棉拭子，共檢測到雞棉拭子樣品來源陽性市場10次，環(huán)境樣品來源陽性市場4次，雞源陽性市場占總陽性市場的71.429%，高于環(huán)境樣品。1月份檢出的市場陽性均來源雞樣品。

從病原類型來看，雞棉拭子陽性樣品中，H7亞型禽流感最多，總計檢出8份，占 H7亞型禽流感總檢出數(shù)的88.889%；H5亞型從雞樣品和環(huán)境樣品各檢出一半；H9亞型僅從環(huán)境樣品中檢出；未從鴿子和鴨棉拭子中檢出禽流感病毒。

2.6 市場內(nèi)陽性攤位的分布

從活禽市場攤位來看，1月份檢出陽性的攤位最多，15個攤位中5個為陽性，占比33.333%，其中H7亞型陽性攤位數(shù)占到總攤位的26.667%（表7）。從各市場陽性攤位數(shù)的比例來看，城關(guān)農(nóng)貿(mào)市場的陽性攤位數(shù)最高。從攤位的不同樣品類型檢測情況看，雞拭子樣品的陽性攤位為8攤/次，占比19.608%，環(huán)境樣品的陽性攤位占比11.111%。

表7 不同抽樣時間點、不同攤位的禽流感檢測結(jié)果

2.7 活禽市場禽流感感染相關(guān)因素分析

由于市場數(shù)量太少，對本次調(diào)查中涉及的活禽市場規(guī)模、管理狀況、生物安全措施、以往感染監(jiān)測情況等因素無法進行OR值分析。本次調(diào)查主要對不同月份、不同病原類型的禽流感病毒進行無重復(fù)雙因素分析，對同一類型病原進行不同檢測時間的比較。

對不同病原類型的檢測結(jié)果進行方差分析，結(jié)果F值為3.206 897，P>0.05，對不同日期的檢測結(jié)果進行方差分析，結(jié)果F值為0.689 655，P>0.05，差異均不顯著（表8）。

表8 活禽市場不同時間、不同病毒類型的無重復(fù)雙因素方差分析

3 討論

通過多次橫斷面研究，發(fā)現(xiàn)該縣活禽市場的H7亞型禽流感流行率高于H5亞型，這可能跟本次研究的重點是H7亞型禽流感，采樣時偏重于采集容易感染H7亞型禽流感的宿主有關(guān)。

本研究調(diào)查中存在不應(yīng)答或信息不完整情況，會導致偏倚。此種情況只能根據(jù)相關(guān)調(diào)查人員的反饋，盡量補充完整，并通過培訓、不同隊伍組合、實驗室比對等方法矯正，來控制偏倚。此外，因多次進行橫斷面調(diào)查，問卷中有些信息可以前后比對，加上研究對象有限，對相互矛盾信息比較容易重新確認。

本研究也存在眾多不足。首先，一個縣的農(nóng)貿(mào)市場情況同質(zhì)化程度很高，問卷的回答可能會一致，導致有些相關(guān)因素無法開展比較，如消毒方式、市場結(jié)構(gòu)、廢棄物處理等；各市場、各攤位的生物安全措施以及衛(wèi)生狀況基本相同，也無法比較差異。其次，一個縣的農(nóng)貿(mào)市場數(shù)量太少，一次抽樣，根本無法進行風險因素分析，只能用定性的方法來推斷。本研究采用多次調(diào)查、一次分析，因每次調(diào)查時攤位狀況不同，是否有科學意義，需要進一步驗證。

4 結(jié)論與建議

本次調(diào)查認為，該縣活禽市場存在H7、H5、H9亞型禽流感感染；不同時間、不同禽流感病毒類型對市場感染狀況的影響均無顯著性差異。

由此，建議加強活禽市場改造，提升活禽市場基礎(chǔ)設(shè)施條件，加強活禽市場生物安全和衛(wèi)生管理，對市場進行關(guān)閉消毒，直到病原檢測陰性為止；引導活禽市場攤主規(guī)范日常經(jīng)營行為，不要隨意拋棄病死動物及其附屬物，要及時開展消毒，盡量從本地采購或購買活禽，主動索取、檢查是否有檢疫證明；冬春季節(jié)應(yīng)加強對禽流感的防范，減少家禽與人員的直接接觸。

致謝：

本次調(diào)查得到該縣工作人員的大力支持，在技術(shù)上得到中國獸醫(yī)現(xiàn)場流行病學培訓班（CFETPV）各位老師的傾力指導，在此一并表示感謝！

[1]農(nóng)業(yè)部. 農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局局長張仲秋就H7N9流感防控答記者問[EB/OL].（2014-01-29）[2016-10-24]. http://www.moa. gov.cn/ zwllm/zwdt/201401/t20140129_3752039.htm.

[2]彭聰，彭南秀，段曉冬，等. 廣州市活禽交易市場休市效果評估隊列研究[J]. 中國動物檢疫，2016，33（8）：3-7.

[3]曹藍，陳藝韻，魯恩潔，等. 廣州市2015年禽類市場禽流感流行病學監(jiān)測[J]. 中國動物檢疫，2016，33（8）：8-12.

[4]鐘錦輝，彭聰，彭南秀，等. 基于禽流感病毒檢測的活禽零售市場“零存欄”效果評估[J]. 中國動物檢疫，2016，33（8）：13-16.

[5]農(nóng)業(yè)部. 關(guān)于印發(fā)《全國家禽H7N9流感剔除計劃》的通 知 [A/OL].（2014-06-25）[2016-10-24]. http://www.moa. gov.cn/ govpublic/SYJ/201406/t20140625_3950377.htm.

[6]PFEIFFER D U. Veterinary epidemiology：An introduction[M]. 2th ed. New Jersey： Wiley-Blackwell，2010：63-72.

[7] INDRIANI R，SAMAAN G，GULTOM A，et al. Environmental sampling for avian infuenza virus A（H5N1）in live-bird markets，Indonesia[J]. Emerging Infectious Diseases，2010，16（12）：1889-1895.

[8]沈朝建，王幼明. 獸醫(yī)流行病學調(diào)查與監(jiān)測-抽樣技術(shù)手冊[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2014：74-83.

[9] BERNARD T，BARBARA D，NOEZ S，et al. 實用流行病學與群發(fā)病控制[M]. 蓋華武，姜雯，譯. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011：75-134.

[10]黃保續(xù). 獸醫(yī)流行病學[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010：82-117.

（責任編輯：朱迪國）

Investigation on Infection Status of Influenza Virus in Live Bird Markets in a County of Eastern Coastal Areas in China

Li Zhonghua1，Liu Hualei2，Zhang Haiming3，Yan Quanlin1
（1. Fujian Animal Disease Control Center，F(xiàn)uzhou，F(xiàn)ujian 350003；2. China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao，Shandong 266032；3. Guangzhou Animal Health Supervision Institution，Guangzhou，Guangdong 510440）

In order to acquaint the infection status of infuenza virus（AIV）and analyze related risk factors in live bird markets（LBMs），so as to adopt suitable intervening measures to decrease its prevalence rate，4 cross-investigations were carried out in a eastern coastal county. Based on the four continuous cross-sectional studies，the results showed that the prevalence rate of H7 subtype avian infuenza was relatively high that was 16.667%～50.000% in LBMs of the county，while that of H5 and H9 subtype influenza were 0～33.333% and 0～16.667%，respectively. In addition，a large difference among various markets，various amounts of the market stalls，various types of the collected samples was found. Then the time factor and various types of pathogens were analyzed，and the difference of AI prevalence status was not signifcant among various time points. As a conclusion，this investigation showed there were multiple pathogens in LBMs of the county，which indicated the bio-safety measures should be strengthened.

avian infuenza virus（AIV）；live bird markets（LBMs）；cross-investigation；risk factors

book=19,ebook=25

S851.3

B

1005-944X（2017）01-0019-05

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.01.005

科技部科技基礎(chǔ)性工作專項（2012FY111000）