許政旭，朱詩(shī)國(guó)，羅 俊，潘年松，劉英波

藥 學(xué)

黔產(chǎn)莪術(shù)和種子中提取揮發(fā)油的具體成分異同比較＊

許政旭，朱詩(shī)國(guó)，羅 ?。四晁?，劉英波

目的 研究黔產(chǎn)莪術(shù)和莪術(shù)種子中揮發(fā)油質(zhì)控成分的檢定方法與含量范圍。方法 建立高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定黔產(chǎn)莪術(shù)與莪術(shù)種子中吉馬酮和呋喃二烯含量方法：色譜柱為C18（4．6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～20 min，60%A～95%A；20～35 min，95%A），流速為1 ml／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為216 nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量10 μl。結(jié)果 吉馬酮和呋喃二烯的檢測(cè)濃度分別在4．18～83．6 μg／mL（r=0．9999），10．21～204．2 μg／ml（r=1．0000）范圍呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系；吉馬酮和呋喃二烯的平均回收率 （n=6）分別103．2%（RSD=1．44%，102．2%（RSD=1．28%），重復(fù)性實(shí)驗(yàn)（n=6）RSD分別為0．90%，2．10%。結(jié)論 黔產(chǎn)莪術(shù)與莪術(shù)種子中提取的揮發(fā)油的質(zhì)量，可以用揮發(fā)油中所含吉馬酮和呋喃二烯含量進(jìn)行控制?？刂品秶牵呵a(chǎn)莪術(shù)揮發(fā)油中吉馬酮，呋喃二烯含量依次是85．87%～100．10%，59．07%～78．92%；黔產(chǎn)莪術(shù)種子揮發(fā)油中吉馬酮，呋喃二烯含量依次是65．69%～80．47%，59．94%～68．41%。

HPLC；黔產(chǎn)莪術(shù)；黔產(chǎn)莪術(shù)種子；揮發(fā)油；吉馬酮；呋喃二烯

黔產(chǎn)莪術(shù)和莪術(shù)種子來(lái)源于四川崇州引種的莪術(shù)種子，由遵義綠普森農(nóng)業(yè)有限公司在遵義市湄潭縣種植并提供研究用樣品，經(jīng)遵義市食品藥品檢驗(yàn)所鑒定為廣西莪術(shù)（Curcuma Kwangsiensis S．G．Lee et C．F．Liang）種，黔產(chǎn)莪術(shù)和莪術(shù)種子為同株異位：其根莖中的主根（大頭）是黔產(chǎn)莪術(shù)，側(cè)根（二頭、三頭、奶頭）是種子；須根末端膨大的塊根是黔產(chǎn)郁金。本文對(duì)黔產(chǎn)莪術(shù)和莪術(shù)種子經(jīng)水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油進(jìn)行進(jìn)一步定量研究，建立了同時(shí)測(cè)定黔產(chǎn)莪術(shù)和莪術(shù)種子揮發(fā)油中吉馬酮和呋喃二烯2種有效成分的高效液相色譜法，并檢定黔產(chǎn)莪術(shù)和莪術(shù)種子揮發(fā)油中吉馬酮和呋喃二烯含量。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)材料Agilent 1100系列高效液相色譜儀（G1379A脫氣機(jī)，G1316A柱溫箱，G1311A四元梯度泵，G2171A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1313A二極管陣列檢測(cè)器）和Agilent Chemstation工作站；TB-215D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

呋喃二烯對(duì)照品，供含量測(cè)定用99．4%計(jì)，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111824-210002；吉馬酮對(duì)照品，供含量測(cè)定用99．8%計(jì)，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111665-201103；乙腈為色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 （批號(hào)：20150112）；水為娃哈哈純凈水；無(wú)水乙醇為分析純；黔產(chǎn)莪術(shù)和種子揮發(fā)油樣品（自制）來(lái)源信息見(jiàn)表1。

表 1 莪術(shù)油樣品來(lái)源信息

1．2 方法

1．2．1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（4．6 mm× 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～20 min，60%A～95%，20～35 min，95%A）；流速：1 ml／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：216 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10 μl；對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

圖 1 對(duì)照品（A）及樣品（B）HPLC色譜圖

1．2．2 溶液的制備 （1）對(duì)照品溶液的制備。分別精密稱(chēng)取吉馬酮和呋喃二烯適量，至10 ml容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為0．418 mg／ml，1．021 mg／ml的混合對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液的制備。精密稱(chēng)取莪術(shù)油0．1 g于50 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇定容，搖勻，精密量取5 ml至25 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0．45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液。

2 結(jié)果

2．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取對(duì)照品的溶液適量，吉馬酮和呋喃二烯分別配成濃度為4．18～83．6 μg／ml，10．21～204．2 μg／ml的系列溶液，并按色譜條件分別進(jìn)樣10 μl，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得吉馬酮和呋喃二烯的回歸方程分別為：Y=24．891X+30．217（r= 0．9999）；Y=26．132X+75．118（r=1．0000）

2．2 精密度試驗(yàn)分別精密吸取對(duì)照品溶液吉馬酮（33．44 μg／ml）和呋喃二烯（81．68 μg／ml）各10 μl，按色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定吉馬酮和呋喃二烯的峰面積，結(jié)果分別為RSD=0．41%（n=6），RSD= 0．17%（n=6），表明儀器精密度良好。

2．3 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液（編號(hào)001）10 μl，制備后0，2，4，8，12，18，24 h進(jìn)樣，吉馬酮和呋喃二烯峰面積的RSD分別為0．16%，1．00%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，共6份，制備供試品溶液，按色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別計(jì)算含量和RSD，吉馬酮和呋喃二烯的平均含量（n=6）分別為80．47 mg／g，59．94 mg／g；RSD分別為0．90%，2．10%。

2．5 加樣回收率取已經(jīng)測(cè)定含量的樣品6份，約10 mg，精密稱(chēng)定，按樣品中各成分的含有量精密加入混合對(duì)照品溶液（吉馬酮0．400 mg／ml，呋喃二烯0．333 mg／ml）2 ml，制備供試品溶液，依法測(cè)定峰面積并計(jì)算回收率，吉馬酮和呋喃二烯的平均回收率（n=6）分別為103．2%，102．2%，RSD分別為1．44%，1．28%。

2．6 樣品含量測(cè)定取各批次莪術(shù)油，制備供試品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算吉馬酮和呋喃二烯的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表 2 莪術(shù)油中吉馬酮、呋喃二烯的含量測(cè)定結(jié)果（mg／g，n=2）

3 討論

莪術(shù)為姜科植物蓬莪術(shù) （Curcuma phaeocaulis Val）、廣西莪術(shù) （Curcuma Kwangsiensis S．G．Lee et C．F．Liang）或溫莪術(shù)種子 （Curcuma wen yujinY．H．Chen et C．Ling）的干燥根莖［1］。具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化，調(diào)劑免疫，促進(jìn)傷口愈合等作用，臨床應(yīng)用十分廣泛［2-4］。揮發(fā)油中主要含有倍半萜類(lèi)物質(zhì)，被確定的有莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮、莪術(shù)烯、莪術(shù)內(nèi)酯等有效成分［5］。目前，吉馬酮，呋喃二烯，莪術(shù)醇，莪術(shù)二酮等倍半萜類(lèi)成分被認(rèn)為是莪術(shù)油的主要藥理活性成分，莪術(shù)油的含量測(cè)定多以吉馬酮，莪術(shù)醇，莪術(shù)二酮，呋喃二烯為指標(biāo)［6-9］。莪術(shù)油主要為單貼，倍半萜及其衍生物，其中不同成分如吉馬酮，呋喃二烯，莪術(shù)二酮等具有較強(qiáng)的揮發(fā)性［7-9］，可以采氣相色譜法（GC）進(jìn)行測(cè)定，但由于呋喃二烯等為熱敏性在高溫下易轉(zhuǎn)化為莪術(shù)烯［8］，GC法無(wú)法測(cè)定其真實(shí)含量。本實(shí)驗(yàn)參照相關(guān)文獻(xiàn)［1-7］建立了HPLC梯度洗脫法，為同時(shí)測(cè)定黔產(chǎn)莪術(shù)和種子揮發(fā)油中吉馬酮和呋喃二烯的含量提供了方法學(xué)參考。

根據(jù)2010版《藥典》［1］中規(guī)定：三種莪術(shù)品種只要求了揮發(fā)油總量不少于1．5%，對(duì)揮發(fā)油的具體成分，僅注明了溫莪術(shù)揮發(fā)油中吉馬酮和呋喃二烯含量不少于7．5%和10．0%，其余品種沒(méi)有要求。本實(shí)驗(yàn)研究所得結(jié)果，為黔產(chǎn)莪術(shù)及其種子中揮發(fā)油的進(jìn)一步質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：257-258，388．

［2］項(xiàng)秀娣，呂圭源，陳素紅，等．莪術(shù)油質(zhì)量控制及藥理研究進(jìn)展［J］．中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2010，27（11）：979-982．

［3］吳海霞，孫志明，王 勤．莪術(shù)油的藥理學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展概況［J］．中國(guó)中醫(yī)藥導(dǎo)刊，2011，13（1）：79-83．

［4］曾建紅，黃鳳香，廖 迎．莪術(shù)油的含量測(cè)定和抗腫瘤作用的新進(jìn)展［J］．腫瘤藥學(xué)，2012，2（1）：19-22．

［5］展曉日，曾昭武，孟凡莉，等．莪術(shù)油藥學(xué)研究進(jìn)展［J］．杭州師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，10（5）：454-458．

［6］王佳麗，王 秀，夏 泉，等．莪術(shù)油中3種倍半萜類(lèi)化合物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖抑制作用的研究［J］．中成藥，2014，36（7）：1535-1539．

［7］張 鵬，祝 明，唐登峰，等．HPLC同時(shí)測(cè)定莪術(shù)油中3種倍半萜類(lèi)成分的含量［J］．藥物分析雜志，2009，29（11）：1825-1827．

［8］姚慧娟，姚慧敏，卜書(shū)紅，等．RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定莪術(shù)油自乳化軟膠囊中6種倍半帖成分的含量［J］．中國(guó)藥房，2013，24（11）：1010-1012．

［9］牛 沖，張冬梅，劉明潔．復(fù)方莪術(shù)油栓中呋喃二烯及莪術(shù)醇的測(cè)定［J］．中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（2）：131-133．

［2015-09-21收稿，2015-10-20修回］ ［本文編輯：李思睿］

Comparison on the components of extracted volatile oil from Guizhou curcuma zedoary and from their seeds

XV Zheng-xu①，ZHU Shi-guo，LUO Jun，et al．①Department ofPharmacologyofGuizhou Medical University，Guizhou，Guiyang 550025，China

Objective To study the methods of the quality control and the content ranges on Guizhou curcumazedoaryand seedsextracted volatileoil．Methods HPLC simultaneousdetectinggermacroneand furanodiene contents in Guizhou curcuma zedoary and its seeds was taken：The column was Diamonsil C18analytical column（4．6 mm×250 mm，5 mm）with gradient elution （60%A-95%A，20-35 min，0-20 min，95%A）of acetonitrile（A）-water（B）at the flow rate of 1 ml／min；Detection wave length was 216 nm，and the column temperature was maintained at 35℃，injected 10 μl．Results The detected concentration on germacrone and furandiene respectively were 4．18-83．6 μg／ml（r=0．9999），10．21-204．2 μg／ml（r=1．0000）which showed a good linear relationship；the average recoveries were（n=6）103．2%（RSD=1．44%），102．2%（RSD=1．28%），The experimental repeatability of RSD（n=6）were 0．90%，2．10%．Conclusion From Guizhou curcuma zedoary and its seeds extrated volatile oil quality can be controlled by controlling the germacrone and furanodiene contents．Controlling area on germacrone and furanodiene in Guizhou curcuma zedoary extrated oil respectively were 85．87%-100．10%，59．07% 78．92；Germacrone and furanodiene in its seeds extrated oil respectively were 65．69%-80．47%，59．94%-68．41%．

HPLC；Guizhou curcumazedoary；The seed ofGuizhou curcuma zedoary；Germacrone；Furanodiene

R944．1

A

10．14172/j．issn1671-4008．2016．03．025

貴州省廳校聯(lián)合項(xiàng)目（黔科合LG字［2011］006號(hào)）；貴州省社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目（黔科合SY（2008）3027號(hào)）。

550025貴州貴陽(yáng)，貴州醫(yī)科大學(xué)藥理教研室（許政旭，朱詩(shī)國(guó)，羅?。?63002貴州遵義，遵義醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校（潘年松，劉英波）

羅俊，Email：724730885＠qq．com