李蘭芳 曾姣娥

(1.長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系，湖北 荊州 434020；2.荊州市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北 荊州 434020)

分泌型卷曲相關(guān)蛋白5與2型糖尿病大血管病變相關(guān)性研究

李蘭芳1曾姣娥2

(1.長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系，湖北 荊州 434020；2.荊州市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北 荊州 434020)

目的 觀察2型糖尿病大血管病變患者血清分泌型卷曲相關(guān)蛋白5(Sfrp5)、白介素-10(IL-10)水平的變化，探討其在T2DM大血管病變中的臨床意義。方法 150例T2DM患者分為實驗組和對照組，實驗組為T2DM合并大血管病變(IMT≥0.90 mm)患者100例；對照組為T2DM無大血管病變(IMT<0.90 mm)患者50例。另選取50例正常健康人作為正常組。分別檢測各組血清Sfrp5、IL-10含量，同時測定各組空腹血糖(FBG)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)等指標(biāo)。結(jié)果 與正常組相比，實驗組、對照組血清Sfrp5、IL-10水平顯著降低(P<0.01，P<0.05)，且實驗組低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。相關(guān)分析顯示，Sfrp5、IL-10分別與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負(fù)相關(guān)(r=-0.336、-0.256、-0.293、-0.455、-0.653、-0.667、-0.72，P均<0.01；r=-0.219、-0.242、-0.208、-0.417、-0.543、-0.305、-0.392，P均<0.01 )，而Sfrp5、IL-10之間呈正相關(guān)(r=0.347P<0.01)。結(jié)論 T2DM大血管病變患者的血清Sfrp5、IL-10水平降低，并與T2DM大血管病變呈負(fù)相關(guān)。檢測Sfrp5、IL-10水平可作為診斷T2DM大血管病變的新指標(biāo)。

2型糖尿病大血管病變 ； 分泌型卷曲相關(guān)蛋白5； 白介素-10

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大血管病變主要是指腦動脈、頸動脈、冠狀動脈、下肢動脈等大血管粥樣硬化，是T2DM致死、致殘的主要原因。其病理學(xué)變化基礎(chǔ)是動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)。AS是多種因素參與的慢性炎癥反應(yīng)過程。分泌型卷曲相關(guān)蛋白5(secreted frizzled related protein 5,Sfrp5)是Ouchi等[1]于2010年發(fā)現(xiàn)的一種抗炎脂肪因子, 作為wnt信號通路的抑制劑，可通過競爭結(jié)合wnt信號胞外配體wnt5α蛋白，調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化、減輕肥胖、改善脂代謝紊亂及胰島素抵抗、抵抗炎癥反應(yīng)等起到抗AS的作用。近年來，白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)被認(rèn)為是一種抗炎細(xì)胞因子，在粥樣硬化病變形成和穩(wěn)定方面有重要作用。本研究通過觀察T2DM大血管病變患者血清中Sfrp5和IL-10水平變化，探討其在T2DM大血管病變中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇2015年3月至2015年7月于華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬荊州醫(yī)院內(nèi)分泌科門診及住院部收治的T2DM患者150例，其中男性75例，女性75例；年齡25～70歲，平均(53.98±10.27)歲。根據(jù)IMT檢測結(jié)果分為兩組：實驗組為T2DM合并大血管病變(IMT≥0.90 mm)100例，年齡26～70歲，平均(56.30±9.16)歲；對照組為T2DM無大血管病變(IMT<0.90 mm)50例，年齡25～70歲，平均(49.34±10.88)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合2型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)(按1999年WHO專家委員會公布的糖尿病診斷和分型標(biāo)準(zhǔn))；(2)年齡25～70歲，性別不限；(3)病程5～20年；(4)糖化血紅蛋白7%～11%；(5)BMI20～30kg/m2；(6)無吸煙史。排除標(biāo)準(zhǔn)： 1型糖尿病及繼發(fā)性糖尿??；糖尿病急性并發(fā)癥；育齡期或哺乳期婦女；嚴(yán)重心肝腎功能不全；精神行為障礙；有腫瘤、器官移植及獲得性免疫缺陷綜合征病史；糖尿病及大血管病變外的其它潛在炎性反應(yīng)相關(guān)因素：各種急、慢性感染。另選取來自華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬荊州醫(yī)院體檢中心健康體檢者50名作為正常組，性別不限，年齡25～63歲，平均(45.12±8.53)歲，無糖尿病、高血壓病、冠心病等其它慢性病史和吸煙史，IMT檢測正常。實驗組、對照組、正常組平均年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 指標(biāo)檢測

1.2.1 一般指標(biāo)檢測 固定專人采用同一測量工具測量身高、體質(zhì)量,并計算體質(zhì)量指數(shù)BMI(BMI=體質(zhì)量/身高2)，根據(jù)2000年 WHO 推薦的亞洲成年人肥胖診斷標(biāo)準(zhǔn)，BMI≥25為超重，BMI≥28為肥胖，BMI<25為正常。研究對象禁食8～12 h，于次日清晨抽肘靜脈非抗凝血5 mL。標(biāo)本送我院檢驗科應(yīng)用全自動生化分析儀測定FBG、HbAlC、TC、TG、LDL-C水平，其中TC、TG、LDL-C采用酶法測定，HbA1C采用高效液相色譜法測定。

1.2.2 Sfrp5、IL-10指標(biāo)檢測 研究對象禁食8～12 h，于次日清晨抽肘靜脈5 mL放入常規(guī)試管靜置1 h，3 000r/min離心10 min后取血清2 mL，測定Sfrp5、IL-10含量。Sfrp5采用ELISA法測定(美國TSZ公司試劑盒，日本西門子BEP3全自動酶標(biāo)儀)，IL-10采用電化學(xué)發(fā)光法(美國TSZ公司試劑盒，羅氏電化學(xué)發(fā)光分析儀 cobas e601)。

1.2.3 影像學(xué)指標(biāo)檢測 采用美國西門子S2000型彩色多普勒超聲儀行頸動脈超聲檢查，探頭頻率8.0 MHz，所有入選人員均由同一超聲檢查醫(yī)師檢查。受檢者取平臥頭仰位，頭偏向?qū)?cè)，充分暴露受檢者頸動脈部位。對受檢者雙側(cè)頸動脈進行測量，縱向觀察包括左右兩側(cè)頸總動脈主干段(分叉前2 cm處)、頸動脈分叉部及頸內(nèi)動脈(分叉前l(fā) cm處)；動脈后壁表現(xiàn)為“雙線型”圖像，內(nèi)線為內(nèi)膜與管腔的分界線，外線為中外膜分界線，其間距離即為內(nèi)膜中層厚度。左右兩側(cè)共6點的平均值作為頸動脈內(nèi)膜中層厚度(carotid intima-media thickness IMT)，結(jié)果進入數(shù)據(jù)分析。根據(jù)2010年《中國高血壓防治指南》，將數(shù)值≥0.90 mm診斷為IMT增厚，≥1.3 mm定義為斑塊形成，<0.90 mm為正常，測量3次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 一般指標(biāo)比較

實驗組、對照組FBG、TG、TC、LDL-C、HbAlc水平均高于正常組(P<0．01)；實驗組FBG水平高于對照組(P<0.01)，實驗組與對照組相比TG、TG、TC、HbAlc、BMI水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見表1。三組實驗對象中，超重或肥胖患者血清Sfrp5水平低于正常患者血清Sfrp5水平(P<0.01)，結(jié)果見表2。

表1 各組一般指標(biāo)比較

注：與正常組比較，aP<0.01；與對照組相比，bP>0.05，cP<0.01。

表2 BMI不同受試者Sfrp5、IL-10水平比較

2.2 三組Sfrp5、IL-10水平比較

實驗組血清Sfrp5、IL-10水平均低于正常組(P<0．01)，對照組血清Sfrp5、IL-10水平均低于正常組(P<0．05),實驗組血清Sfrp5、IL-10水平均低于對照組(P<0.01)。見表3。

表3 三組Sfrp5、IL-10水平比較

注：與正常組比較，aP<0.05；與正常組比較，bP<0.01；與對照組比較，cP<0.01。

2.3 相關(guān)性分析

數(shù)據(jù)整理后發(fā)現(xiàn)，Sfrp5水平與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.336、-0.256、-0.293、-0.455、-0.653、-0.667、-0.72，P均<0.01)；IL-10與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.219、-0.242、-0.208、-0.417、-0.543、-0.305、-0.392，P均<0.01)；Sfrp5與IL-10呈正相關(guān)(r=0.347，P<0.01)。

3 討 論

T2DM大血管病變是多重因素相互作用的結(jié)果。T2DM患者的肥胖、糖脂代謝異常、胰島素抵抗、炎癥反應(yīng)等均是T2DM大血管病變的促發(fā)因素，其中通過調(diào)節(jié)因子增強炎癥信號表達而觸發(fā)的血管炎癥反應(yīng)是引起大血管病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

Sfrp5是繼脂聯(lián)素后被發(fā)現(xiàn)的又一重要的具有抗炎作用的脂肪因子，其生物學(xué)作用主要是通過與wnt相互作用或與Frizzled受體競爭結(jié)合wnt蛋白形成無功能的復(fù)合體實現(xiàn)的[2-3]。研究顯示，Sfrp5在肥胖動物模型脂肪組織中表達水平下調(diào)[1]。肥胖患者體質(zhì)量減輕后血清Sfrp5含量明顯升高[4]。Lv等[5]發(fā)現(xiàn)，高胰島素水平能抑制Sfrp5表達。本研究結(jié)果顯示，在實驗組和對照組中，BMI≥25患者血清Sfrp5水平明顯低于BMI<25患者血清Sfrp5水平(P<0.01)，說明肥胖患者血清Sfrp5水平是降低的，這與前人研究結(jié)果一致。同時，與正常組相比，實驗組、對照組血清Sfrp5水平均降低(P<0.01，P<0．05)，說明2型糖尿病患者的胰島素抵抗能抑制Sfrp5表達，亦與前人研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，實驗組血清Sfrp5水平降低(P<0．05)，進一步相關(guān)性分析顯示Sfrp5與糖尿病病程、BMI、FBG、HbAlC、高脂血癥呈不同程度負(fù)相關(guān)，說明Sfrp5的變化與糖尿病大血管病變相關(guān)。它可能是通過肥胖、胰島素抵抗、高胰島素血癥、脂代謝紊亂、炎癥反應(yīng)等機制引起或加重糖尿病大血管病變。推測其可能的分子學(xué)機制是Sfrp5拮抗wnt5參與的Wnt/Ca2+/pkC信號通路的激活，降低炎癥因子的表達，減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷而發(fā)揮抗AS的作用[6]。

IL-10是一類由活化的單核細(xì)胞、T2型T細(xì)胞和B細(xì)胞等分泌的多功能高活性蛋白質(zhì)多肽分子，是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的樞紐之一。研究[7]已證實IL-10在人類AS斑塊中定位及表達，且能有效阻斷AS的發(fā)生發(fā)展。它能從以下幾個方面調(diào)節(jié)和控制炎癥反應(yīng), 減輕炎癥損傷, 從而發(fā)揮對血管內(nèi)皮和心臟的保護作用:(1)抑制單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞產(chǎn)生IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ、MCP-1等促炎細(xì)胞因子[8]；(2)通過下調(diào)黏附分子CD18和CD62L表達，從而抑制單核黏附血管內(nèi)皮細(xì)胞[9]；(3)下調(diào)IL-6誘發(fā)的前凝血劑活性劑，抑制外周血單核細(xì)胞組織因子(TF)的表達及活性, 從而防止血栓形成[10]；(4)抑制巨噬細(xì)胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPS)9活性, 增加基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑1(T1MP-1)水平,起到穩(wěn)定斑塊的作用[9]。本研究結(jié)果顯示，與正常組相比，實驗組、對照組血清IL-10水平顯著降低(P<0.01，P<0.05)，且實驗組低于對照組(P<0.05)；相關(guān)分析顯示IL-10與TC、TG、LDL-C、FBG、HBA1c、糖尿病病程、BMI呈不同程度負(fù)相關(guān)。說明血清IL-10水平與T2DM大血管病變的發(fā)生密切相關(guān)，而Sfrp5與IL-10之間呈正相關(guān)。

綜上所述，Sfrp5、IL-10在T2DM大血管病變的形成過程中具有重要作用，均參與了T2DM大血管病變的發(fā)生、發(fā)展，T2DM患者血清Sfrp5、IL-10水平的降低促進了T2DM大血管病變的進程。因而聯(lián)合測定Sfrp5、IL-10有可能成為預(yù)測T2DM大血管病變的新指標(biāo)，為臨床有效防治T2DM患者的大血管病變提供依據(jù)；但還需大樣本進一步研究證實。

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Correlative research between Sfrp5 and macroangiopathy in type 2 diabetes

LiLanfang1,ZengJiaoe2.

1.ClinicalMedicalCollege,YangtzeUniversity,Jingzhou434020,China. 2.DepartmentofEndocrinology,JingzhouCentralHospital,Jingzhou434020,China.

Objective To investigate the expression levels of serum Secreted frizzled related protein 5(Sfrp5), interleukin-10 (IL-10) in type 2 diabetes mellitus (T2DM) with macroangiopathy, and to carry out clinical significance. Methods 150 patients with type 2 diabetes were selected. According to carotid intima-media thickness (IMT)examination, which were divided into xperimental group (IMT≥0.90mm)100 cases and control group(IMT<0.90mm)50 cases. Other 50 normal persons were normal group. The levels of Sfrp5, IL-10, fasting plasma glucose (FBG), cholesterol (TC), triglycerides (TG), Low density lipoprotein (LDL), glycated hemoglobin (HbA1c) were investigated. Statistical comparison was performed by single-factor analysis of variance and linear correlation analysis. Results The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in xperimental group and control group were significantly lower than those of control group(P<0.01,P<0.05). The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in xperimental group were significantly lower than those of normal group (P<0.01). Correlation analysis showed that plasma levels of sfrp5 and IL-10 were negatively correlated with TC, TG, LDL-C, FBG, HBA1c, the courses of T2DM and BMI(r=-0.336, -0.256, -0.293, -0.455, -0.653, -0.667, -0.72，P<0.01；r=-0.219, -0.242, -0.208, -0.417, -0.543, -0.305, -0.392，P<0.01). Sfrp5 was positively correlated with IL-10(r=0.347P<0.01). Conclusion The levels of serum Sfrp5 and IL-10 in T2DM macroangiopathy are significantly decreased, and they are negatively correlated with T2DM macroangiopathy. The measurement of them may be a new indicator of T2DM macroangiopathy, the therapy foucs on these two cytokines can provide new clinical evidence for the prevation and treatment of macroangiopathy in T2DM.

T2DM macroangiopathy; Secreted frizzled related protein 5; Interleukin-10

R587.1

A

1000-744X(2016)02-0149-04

2015-11-13)

△通信作者,E-mail:nfmzeng@163.com