馬黎婷 袁飛 周健 佘敏 石作宏△ 洪峰

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽(yáng) 550003)

HIV-1/2抗體唾液快速檢測(cè)試劑在貴陽(yáng)市MSM人群中的應(yīng)用及評(píng)價(jià)

馬黎婷1袁飛2周健2佘敏2石作宏2△洪峰1

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽(yáng) 550003)

艾滋病病毒Ⅰ/Ⅱ型抗體； 唾液； 快速檢測(cè)試劑； MSM

自1981年在美國(guó)舊金山的男男性接觸人群(men who have sex with men，MSM)中發(fā)現(xiàn)5例艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)病人以來(lái)[1]，全世界每天有超過(guò)7000例新感染病例并且遍布世界各地[2]。其中MSM是感染人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)的高危人群。經(jīng)性傳播是我國(guó)艾滋病最為主要的傳播途徑，而且男男同性性傳播增加明顯，MSM傳播HIV所占比例從2006年的2.5%增加到2013年的21.4%，已成為我國(guó)艾滋病病毒HIV感染率上升最快的人群之一[3]。因此，在MSM人群AIDS/HIV監(jiān)測(cè)中，采用快速HIV抗體檢測(cè)試劑提高M(jìn)SM人群的HIV感染檢出率，擴(kuò)大干預(yù)人數(shù)，是控制HIV在MSM人群中蔓延傳播的關(guān)鍵。本研究以MSM人群唾液為檢測(cè)標(biāo)本，對(duì)HIV-1/2抗體唾液快速檢測(cè)試劑進(jìn)行靈敏度和特異度的比較研究，進(jìn)一步驗(yàn)證唾液檢測(cè)試劑的準(zhǔn)確性，為唾液試劑在人群HIV1/2抗體篩查中的推廣應(yīng)用提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

采用滾雪球抽樣方法，選擇134名未知自己HIV感染狀況的自愿咨詢檢測(cè)HIV的MSM為研究對(duì)象，同時(shí)平行采集口腔黏膜滲出液和血液標(biāo)本；根據(jù)國(guó)家2009年版《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》標(biāo)準(zhǔn)評(píng)判其HIV感染狀況。所有研究對(duì)象在其知情同意后入選，不設(shè)排除標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.1 口腔黏膜滲出液的采集 用試劑袋中口腔拭子的布?jí)|端沿受試者上牙齦線慢慢來(lái)回擦拭，用時(shí)5～6 s，再用布?jí)|端的另一面擦拭下牙齦線，用時(shí)5～6 s，立即將口腔拭子的布?jí)|插入試劑袋內(nèi)裝有稀釋液的試管中，讓布?jí)|兩面緊貼試管壁，上下刮擦6～8次，完成取樣?？谇火つB出液樣本進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)并判讀結(jié)果，不予保存。

1.1.2 血液采集 用加有EDTA-K2抗凝劑的真空采血管抽取3～5 mL靜脈血，輕輕顛倒混勻3～4次，將采集的抗凝全血1500 r/min 離心15 min，吸出上層血漿20℃保存待檢。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 唾液標(biāo)本快速檢測(cè) 唾液樣本使用人類免疫缺陷病毒抗體口腔粘膜滲出液檢測(cè)試劑盒(北京瑪諾生物制藥有限公司生產(chǎn))進(jìn)行檢測(cè)(膠體金法)，批號(hào)20130302，按其使用說(shuō)明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.2.2 血液標(biāo)本檢測(cè) 血液樣本使用人類免疫缺陷病毒抗體(HIV1/2)檢測(cè)試劑(廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司及Standard Diagnostics Inc生產(chǎn))進(jìn)行初篩檢測(cè)(膠體金法)，批號(hào)20140528、20140415，按其使用說(shuō)明書進(jìn)行操作。如果初篩檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，則需要使用不同廠家生產(chǎn)的不同試劑進(jìn)行第二次初篩檢測(cè)，最后使用確證試劑進(jìn)行確證檢測(cè)。

1.2.3 確證檢測(cè) 血液樣本使用人類免疫缺陷病毒(HIV1/2型)抗體檢測(cè)試劑盒(MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司生產(chǎn))進(jìn)行HIV初篩檢驗(yàn)呈陽(yáng)性結(jié)果的血清樣本的確證檢測(cè)(免疫印跡法)，批號(hào)20120929，按其使用說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果對(duì)比

唾液檢測(cè)結(jié)果和血液檢測(cè)結(jié)果作對(duì)比，評(píng)價(jià)唾液檢測(cè)試劑的靈敏度和特異度。靈敏度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)×100%。

2 結(jié) 果

2.1 兩種檢測(cè)試劑結(jié)果對(duì)比

唾液檢測(cè)試劑和血液檢測(cè)試劑共檢測(cè)樣本134份，唾液檢出陽(yáng)性49份，血液檢出陽(yáng)性48份，唾液檢測(cè)陰性85份，血液檢出陰性86份。見(jiàn)表1。

表1 唾液試劑和血液試劑試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比(n=134)

2.2 兩種檢測(cè)試劑確證結(jié)果對(duì)比

見(jiàn)表2。

表2 唾液與血液試劑確證結(jié)果對(duì)比(n=134)

2.3 唾液檢測(cè)試劑的評(píng)估結(jié)果

由表1和表2可以得出本次唾液檢測(cè)試劑的靈敏度為97.9%(47/48)，特異度為97.7%(84/86)，由靈敏度和特異度可以計(jì)算出唾液檢測(cè)試劑檢測(cè)的正確率為95.6%(97.9%+97.7%-100%)。

2.4 唾液檢測(cè)試劑和血液檢測(cè)試劑相關(guān)特性比較

對(duì)比唾液檢測(cè)試劑和血液檢測(cè)試劑的特性顯示，唾液和血液初篩試劑的共同點(diǎn)是都可以在室溫下進(jìn)行操作，都可以通過(guò)肉眼判讀結(jié)果；不同點(diǎn)在于唾液試劑不需要采血，也不需要特殊的實(shí)驗(yàn)室和儀器；免疫印跡法確證試劑操作比初篩試劑還要復(fù)雜，需要特殊的實(shí)驗(yàn)室和判讀結(jié)果儀器，初篩實(shí)驗(yàn)需要使用酶標(biāo)儀、洗板機(jī)及規(guī)范的初篩實(shí)驗(yàn)實(shí)，免疫印跡法需要具備規(guī)范的確證實(shí)驗(yàn)室。

3 討 論

近年來(lái)，中國(guó)大中城市MSM 人群規(guī)模和AIDS疫情呈現(xiàn)日趨上升趨勢(shì)，貴陽(yáng)、重慶、成都、昆明等西南主要城市MSM人群HIV感染率在10%以上，高于全國(guó)平均水平[4]。本研究調(diào)查134名MSM，HIV感染檢出率高達(dá)35.8%，由于AIDS的不可治愈，預(yù)防控制HIV傳播是減少AIDS對(duì)健康危害的唯一措施，早檢測(cè)、早發(fā)現(xiàn)、早治療是預(yù)防控制HIV傳播的有效措施之一。

傳統(tǒng)的HIV抗體檢測(cè)試劑都是檢測(cè)血液樣本，這類試劑必須在規(guī)定場(chǎng)所(如艾滋病篩查/確證實(shí)驗(yàn)室)中使用，而且采集血液具有損傷性，對(duì)醫(yī)務(wù)人員等存在職業(yè)暴露的潛在危害，檢測(cè)結(jié)果等待時(shí)間長(zhǎng)，不適于對(duì)可疑人群實(shí)施規(guī)?；钠詹楹秃Y查，所以，在長(zhǎng)期實(shí)踐中，人們?nèi)找嬲J(rèn)識(shí)到理想中的HIV檢測(cè)方法應(yīng)該具有無(wú)損傷性、安全性、靈敏性等特點(diǎn)[5]。隨著HIV抗體檢測(cè)試劑的發(fā)展，2004年美國(guó)FDA批準(zhǔn)了Ora Quick公司生產(chǎn)的唾液HIV快速檢測(cè)試劑盒，2006年我國(guó)企業(yè)生產(chǎn)的以尿液和唾液作為標(biāo)本進(jìn)行艾滋病快速檢測(cè)的試劑也已面市，國(guó)家2009年版《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》已將唾液HIV-1/2抗體檢測(cè)列入，但該試劑目前在國(guó)內(nèi)還沒(méi)有廣泛地應(yīng)用到人群中，一方面可能是由于唾液檢測(cè)試劑價(jià)格偏高(該檢測(cè)屬于自愿支付)，另一方面HIV感染高危人群如MSM對(duì)唾液檢測(cè)試劑結(jié)果還存在不信任態(tài)度[6]。本研究結(jié)果表明，與血液試劑檢測(cè)結(jié)果比較，唾液試劑靈敏度為97.9%，特異度為97.7%，和其他研究者的結(jié)果有一定差異，可能的原因一是本研究樣本量較小，雖然只有2例假陽(yáng)性，1例假陰性，但對(duì)靈敏度和特異度的計(jì)算影響較大，二是本研究檢測(cè)出的49例陽(yáng)性中有2例假陽(yáng)性在試紙上顯示弱陽(yáng)性，檢測(cè)區(qū)的指示線為淡紅色，為防止漏檢陽(yáng)性將其判讀為陽(yáng)性，在一定程度上間接影響了靈敏度和特異度。綜合本研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，可以認(rèn)為唾液檢測(cè)試劑是一種比較可靠的HIV快速檢測(cè)試劑。

由于唾液檢測(cè)試劑具有無(wú)創(chuàng)、快速、無(wú)需特殊檢測(cè)場(chǎng)所、無(wú)需特殊檢測(cè)儀器、剩余樣本不必按生物危害樣本處理等優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于非血源性的個(gè)人檢測(cè)如老人、小孩、吸毒者等難于采集血樣的人群以及不必抽血檢測(cè)的人群的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，當(dāng)唾液HIV抗體快速檢測(cè)試劑可以進(jìn)入到家庭、娛樂(lè)場(chǎng)所、特殊高危人群等部分公共場(chǎng)所和個(gè)人生活環(huán)境時(shí)，可以更好地推進(jìn)HIV預(yù)防工作開(kāi)展，擴(kuò)大HIV檢測(cè)覆蓋面，及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的感染者。在擴(kuò)大艾滋病檢測(cè)可及性的政策背景下，HIV快速檢測(cè)方法必將受到更多的關(guān)注。

[1] 劉楊, 黃薇, 孟建彤, 等.一種口腔滲出液中HIV抗體檢測(cè)試劑的 實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2012,2(7):1576-1577.

[2] 姜鳳云.艾滋病的流行趨勢(shì)及預(yù)防控制策略[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012,10(34):470-471.

[3] 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心. 2014年7月全國(guó)艾滋病性病疫情及主要防治工作進(jìn)展[J]. 中國(guó)艾滋病性病,2014, 20(9):629.

[4] 張國(guó)磊, 姜影, 梁欣，等.HIV唾液快速檢測(cè)在公園場(chǎng)所MSM 人群中的應(yīng)用[J].中國(guó)艾滋病性病,2013,19(4):261-263.

[5] 李曉娜, 鄭吉龍, 關(guān)一夫. 唾液中HIV抗體快速檢測(cè)診斷膠體金免疫層析試紙條的研制[J]. 遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào), 2013,36(2):250-254.

[6] 許瑜楠，齊嘯，李東亮，等. 北京市男男性行為者HIV唾液快檢支付意愿調(diào)查[J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生,2013, 29(12):1721-1725.

R512.91；R446.62

B

1000-744X(2016)02-0204-03

2015-05-20)

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