楊 媛，石 磊，楊軍軍，張瑩瑩，張開春,3*

(1.北京市農(nóng)林科學(xué)院 林業(yè)果樹研究所，北京 100093；2.農(nóng)業(yè)部華北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100097；3.北京市落葉果樹工程技術(shù)研究中心，北京 100093)

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超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定草莓中鞣花酸

楊 媛1,2，石 磊1，楊軍軍1，張瑩瑩1，張開春1,3*

(1.北京市農(nóng)林科學(xué)院 林業(yè)果樹研究所，北京 100093；2.農(nóng)業(yè)部華北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100097；3.北京市落葉果樹工程技術(shù)研究中心，北京 100093)

建立了測(cè)定草莓中鞣花酸含量(包括游離鞣花酸和總鞣花酸)的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-MS/MS)分析方法。草莓中游離鞣花酸在酸性條件下用甲醇提取，經(jīng)C18分散固相萃取凈化后可直接測(cè)定；總鞣花酸經(jīng)酸性水解呈游離態(tài)再經(jīng)分散固相萃取凈化后進(jìn)行測(cè)定。凈化液經(jīng)C18色譜柱分離，以甲醇和0.5%甲酸水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，電噴霧負(fù)離子(ESI-)模式電離，超高效液相色譜-質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)測(cè)定，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：在10～500 ng/mL濃度范圍內(nèi)鞣花酸的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.998 1，游離鞣花酸的定量下限為0.5 mg/kg，總鞣花酸的定量下限為5.0 mg/kg。在低、中、高3個(gè)加標(biāo)濃度的回收實(shí)驗(yàn)中，游離鞣花酸的加標(biāo)回收率為86.7%～113.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，適用于草莓中鞣花酸的測(cè)定。

超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(UPLC-MS/MS)；游離鞣花酸；總鞣花酸；草莓

近年來(lái)，鞣花酸因其突出的抗氧化效果備受關(guān)注。有報(bào)道表明，鞣花酸廣泛存在于山莓[1]、草莓[2]、藍(lán)莓[3]、紅醋栗[4]、石榴[5]、胡桃[6]等水果和堅(jiān)果中。鞣花酸具有重要的抗菌[7]、抗炎[8]、抗氧化[9-12]、促進(jìn)傷口愈合[4]、心肌保護(hù)[13]、鎮(zhèn)痛[14]、腫瘤抑制[1,15]等功能，對(duì)癲癇病[16]、糖尿病及其并發(fā)癥[17]、動(dòng)脈硬化[18]、癌癥[19-21]等疾病的預(yù)防和治療效果備受關(guān)注，鞣花酸具有比維生素E更強(qiáng)的抗氧化脅迫作用[22]。

鞣花酸存在3種形式[1]:即與糖結(jié)合成醚的鞣花單寧，鞣花酸糖苷，以及少量的游離鞣花酸。目前，鞣花酸含量的分析方法有高效液相色譜法[23-24]、反滴定法[25]、紫外分光光度法[4,26]、薄層層析法[27-28]、高效毛細(xì)管電泳法[29]等，但國(guó)內(nèi)鮮有關(guān)于超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(UPLC-MS/MS)檢測(cè)鞣花酸的報(bào)道。在鞣花酸測(cè)定的多種方法中，反滴定法的操作比較繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力且溶劑用量大；分光光度法前處理采用萃取法比較繁瑣，且雜質(zhì)干擾影響測(cè)定結(jié)果；薄層層析法主要用于定性分析；高效毛細(xì)管電泳法前處理復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、溶劑用量大；高效液相色譜法是目前效率較高、定性定量準(zhǔn)確性好的一種檢測(cè)方法。而相比之下，超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有效率更高，溶劑試劑用量更少，定性、定量更準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)。

本研究針對(duì)富含鞣花酸的代表性水果草莓[30]，建立了分散固相萃取凈化、超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定草莓中游離鞣花酸和總鞣花酸，該方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性高，可用于其他水果中游離鞣花酸和總鞣花酸含量的測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Waters Xevo TQ-S(Acquity UPLC，ZspraYTM，ESI/APCI/ESCi?，Waters公司)；乙腈、甲醇(色譜純，Merck公司)，三氟乙酸(分析純，北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司)，鞣花酸(純度98.5%，Dr.Ehrenstorferg公司)，C18填料(Dikma公司)。除非另有說明，其他所用試劑均為分析純?cè)噭?；?shí)驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

1.2 樣品前處理

1.2.1 游離鞣花酸 準(zhǔn)確稱取1.00 g草莓勻漿樣品置于50 mL具塞刻度離心管中，加入甲醇-0.1%三氟乙酸水(80∶20)提取液定容至50 mL，渦旋混勻3 min，10 000 r/min離心5 min。取2 mL上清液加入20 mg C18粉末，渦旋振蕩3 min，5 000 r/min離心5 min。取上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜，濾液供UPLC-MS/MS測(cè)定。

1.2.2 總鞣花酸 稱取1.00 g 草莓勻漿樣品置于50 mL刻度離心管中，加入2 mol/L三氟乙酸溶液定容至50 mL，渦旋振蕩3 min，置于90 ℃水浴中加熱2 h。冷卻后10 000 r/min離心5 min，取1 mL上清液置于10 mL刻度離心管中，加入甲醇定容至10 mL，渦旋振蕩2 min。取2 mL上清液加入20 mg C18粉末，渦旋振蕩2 min，10 000 r/min離心5 min。取1.0 mL清液，過0.22 μm有機(jī)相濾膜，濾液供UPLC-MS/MS測(cè)定。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為1.0 mg/mL的乙腈溶液，避光存儲(chǔ)于4 ℃冰箱，用甲醇逐級(jí)稀釋為500，250，100，50，25，10 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使用前需新鮮配制。

1.4 檢測(cè)條件

1.4.1 液相色譜條件 色譜柱：Acquity UPLC BEH?C18(2.1×50 mm，1.7 μm)；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.5%甲酸水溶液；流速：0.2 mL/min；進(jìn)樣量：1.0 μL。梯度洗脫程序：0～2.5 min，90%B；2.5～3 min，90%～10%B；3～5 min，10%B；5～5.5 min，10%～90%B；5.5～8 min，90%B。

1.4.2 質(zhì)譜條件 掃描模式：電噴霧負(fù)離子模式ESI(-)；毛細(xì)管電壓：2 500 V；干燥氣流量：氮?dú)?500 L/H；去溶劑化溫度：350 ℃；霧化器壓力：7.0 bar；碰撞氣：氬氣；監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；定量離子對(duì)300.97>144.70，錐孔電壓82 V，碰撞電壓38 V；定性離子對(duì)300.97>228.71，錐孔電壓82 V，碰撞電壓28 V。

圖1 50 ng/mL鞣花酸的典型色譜質(zhì)譜圖Fig.1 MRM chromatograms of 50 ng/mL ellagic acid

圖2 鞣花酸的二級(jí)質(zhì)譜圖Fig.2 MRM spectrum of ellagic acid collision energy：38 eV

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本研究采用UPLC-MS/MS技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，由于二級(jí)質(zhì)譜的多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式與一級(jí)質(zhì)譜的單離子監(jiān)測(cè)方式相比專屬性更高，抗背景干擾能力更強(qiáng)，定量的準(zhǔn)確性更好，檢出限更低，因此本文以多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)鞣花酸；掃描方式的選擇主要依據(jù)物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，鞣花酸作為有機(jī)酸易失去1個(gè)質(zhì)子帶負(fù)電荷，理論上鞣花酸可采用負(fù)離子進(jìn)行掃描。研究證實(shí)，在含有甲酸的流動(dòng)相系統(tǒng)中，采用負(fù)離子方式掃描時(shí)鞣花酸的響應(yīng)較高，峰形較尖銳，因此，本研究選擇多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式負(fù)離子掃描方式檢測(cè)鞣花酸(見圖1)。

2.2 裂分途徑

圖2為碰撞電壓為38 eV條件下，鞣花酸的二級(jí)質(zhì)譜圖。根據(jù)鞣花酸的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和碎片質(zhì)荷比，推測(cè)鞣花酸在該質(zhì)譜條件下的裂分途徑如圖3所示。由圖3可見，鞣花酸(化合物(1))是含有4個(gè)羥基的對(duì)稱雙內(nèi)酯，在負(fù)離子模式下，容易失去1個(gè)氫離子帶上負(fù)電荷而形成較穩(wěn)定的分子離子即(2)，該離子由于分子的良好對(duì)稱性和苯環(huán)的π鍵共軛作用而能穩(wěn)定存在。鞣花酸有3個(gè)響應(yīng)較高的碎片離子，其中，m/z=283.82是分子離子丟失水分子的產(chǎn)物即(3)。m/z=228.71是(3)丟失兩分子CO的產(chǎn)物即(4)；m/z=144.70是(4)進(jìn)一步丟失3分子CO的產(chǎn)物即(5)。

圖3 負(fù)離子模式下鞣花酸的質(zhì)譜裂分示意圖Fig.3 Tentative assignment of fragmentation of ellagic acid under negative ion mode

2.3 前處理?xiàng)l件的選擇

2.3.1 游離鞣花酸提取溶劑的選擇 目前國(guó)內(nèi)報(bào)道的高效液相色譜法中，鞣花酸的提取多采用丙酮溶液浸泡6～8 h后超聲或回流提取，其操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，且提取后未經(jīng)凈化直接使用高效液相色譜儀檢測(cè)，易對(duì)色譜柱及檢測(cè)器造成污染。

鞣花酸屬于酸性物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)比較了乙腈、甲醇、乙腈-水(80∶20)、甲醇-水(80∶20)、乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(80∶20)、甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液(80∶20) 6種提取液對(duì)“章姬”樣品中添加5.0 mg/kg鞣花酸的提取效果。結(jié)果表明，鞣花酸在后2種溶劑中的提取回收率均大于90%，而在前4種溶劑中的提取回收率均不大于60%，表明后2種溶劑的提取效果較好。但樣品經(jīng)乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(80∶20)提取，C18凈化后，仍含有較多雜質(zhì)；而經(jīng)甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液(80∶20)提取，C18凈化后可有效去除雜質(zhì)。因此，實(shí)驗(yàn)選擇甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液(80∶20)作為樣品的最佳提取溶劑。

2.3.2 總鞣花酸水解條件的優(yōu)化 用“章姬”樣品比較了總鞣花酸在酸性條件(2 mol/L三氟乙酸水溶液)和堿性條件(10 mol/L氫氧化鈉溶液)的水解效果。結(jié)果表明，兩種水解方式下總鞣花酸的水解率相當(dāng)。但堿性水解后，反應(yīng)溶液還需進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)和萃取分液等步驟后，才能進(jìn)行稀釋、上機(jī)測(cè)定；而酸性水解后，反應(yīng)液可直接進(jìn)行稀釋、上機(jī)測(cè)定。因此，實(shí)驗(yàn)選擇步驟更為簡(jiǎn)化的酸性方式將總鞣花酸水解為游離鞣花酸。

2.4 線性范圍與定量下限

在優(yōu)化色譜條件下，測(cè)定了一系列濃度(500，200，100，50，25，10 ng/mL)的鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別以定量離子峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X，ng/mL)進(jìn)行回歸方程擬合。結(jié)果表明，在10～500 ng/mL濃度范圍內(nèi)，鞣花酸的線性關(guān)系良好，線性方程為Y=97.67X+2 396(r=0.998 1 )。該方法的最低定量濃度為10 ng/mL，根據(jù)前處理?xiàng)l件，鞣花酸的定量下限為0.5 mg/kg，總鞣花酸(以游離鞣花酸計(jì)算)的定量下限為5.0 mg/kg。

2.5 加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

選取“紅顏”、“章姬”、“甜查理”3種北京主栽草莓品種為游離鞣花酸加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的基質(zhì)，分別添加0.5，5.0，10 mg/kg游離鞣花酸，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3種代表基質(zhì)中游離鞣花酸的加標(biāo)回收率為86.7%～113.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.1%～9.5%(見表1)。表明方法的精密度和準(zhǔn)確度較好，能滿足檢測(cè)要求。

表1 草莓中游離鞣花酸的添加回收試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

平行稱取同一“章姬”勻漿樣品6份，分別置于50 mL具塞刻度離心管中，加入甲醇-0.1%三氟乙酸水(80∶20)提取液定容至50 mL，渦旋混勻3 min，10 000 r/min離心5 min。取2 mL上清液加入20 mg C18粉末，渦旋振蕩3 min，5 000 r/min離心5 min。取上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜，濾液供UPLC-MS/MS測(cè)定。結(jié)果表明，該樣品的游離鞣花酸含量為2.30 mg/kg，RSD為2.4%，具有良好的重復(fù)性。

平行稱取同一“章姬”勻漿樣品6份，分別置于50 mL刻度離心管中，加入2 mol/L三氟乙酸溶液定容至50 mL，渦旋振蕩3 min，置于90 ℃水浴中加熱2 h。冷卻后10 000 r/min離心5 min，取1 mL上清液置于10 mL刻度離心管中，加入甲醇定容至10 mL，渦旋振蕩2 min。取2 mL上清液加入20mg C18粉末，渦旋振蕩2 min，10 000 r/min離心5 min。取1.0 mL清液，過0.22 μm有機(jī)相濾膜，濾液供UPLC-MS/MS測(cè)定。結(jié)果表明，該樣品的總鞣花酸含量為26.54 mg/kg，RSD為1.3%，具有良好的重復(fù)性。

2.7 實(shí)際樣品分析

采用本方法對(duì)市售8種實(shí)際草莓樣品進(jìn)行分析，結(jié)果表明，不同品種草莓中所含的游離鞣花酸含量差別較小，但總鞣花酸含量有所差別(見表2)，但無(wú)論是游離鞣花酸還是總鞣花酸，幾種草莓間均不具有顯著性差異，即相互間未達(dá)到p<0.05顯著水平。

表2 8種草莓中鞣花酸含量的測(cè)定結(jié)果(n=2)

Table 2 Content of ellagica acid in eight strawberry samples (n=2)

SampleFreeellagicacid(mg/kg)Totalellagicacid(mg/kg)Benihoppe(紅顏)6806387Tochiotome(章姬)3863758SweetCharlie(甜查理)86112560TianXiang(天香)9849549YanXiang(燕香)5227806ShuXiang(書香)7959943DongXiang(冬香)118310777Toyonoka(豐香)4586855p?value090075

3 結(jié) 論

本文建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定草莓中鞣花酸(包括游離鞣花酸和總鞣花酸)，游離鞣花酸在酸性條件下用甲醇提取，經(jīng)C18分散固相萃取凈化后可直接測(cè)定；總鞣花酸經(jīng)酸性水解成游離態(tài)后，再進(jìn)行分散固相萃取凈化后，上機(jī)測(cè)定。方法前處理簡(jiǎn)單快捷，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定、靈敏度高、準(zhǔn)確性好，適合于草莓中鞣花酸的測(cè)定，同時(shí)也可為其他水果中鞣花酸的測(cè)定提供參考。

[1] Flores G，Ruiz del Castillo M L.J.FoodCompos.Anal.，2015,39:55-61.

[2] Ghorbanzadeh B，Mansouri M T，Hemmati A A，Naghizadeh B，Mard S A，Rezaie A.Pharmacol.Biochem.Behav.，2014,126:116-121.

[3] Priyadarsini K I，Khopde S M，Kumar S S，Mohan H.J.Agric.FoodChem.，2002,50:2200-2206.

[4] Gopalakrishnan L，Raman N R，Sethuraman S，Krishnan U M.Carbohydr.Polym.，2014,111:215-221.

[5] Buenrostro-Figueroa J，Huerta-Ochoab S，Prado-Barragánb A，Ascacio-Valdésa J，Sepúlvedaa L，Rodrígueza R，Aguilera-Carbóc A，Aguilar C N.ProcessBiochem.，2014,49:1595-1600.

[6] Mansouri M T，Naghizadeh B，Ghorbanzadeh B.Pharmacol.Biochem.Behav.，2014,120:43-49.

[7] Farbood Y，Sarkaki A，Dianat M，Khodadadi A，Haddad M K，Mashhadizadeh S.LifeSci.，2015,124:120-127.

[8] El-Shitany N A，El-Bastawissy E A，El-desoky K.Int.Immunopharmacol.，2014,19:290-299.

[9] Lee W J，Ou H C，Hsu W C，Chou M M，Tseng J J，Hsu S L，Tsai K L，Sheu W H.J.Vasc.Surg.，2010,52(5):1290-1300.

[10] Qiu Z，Zhou B，Jin L，Yu H，Liu L，Liu Y，Qin C，Xie S，Zhu F.FoodChem.Toxicol.，2013,59:428-437.

[11] Vattem D A，Shetty K.ProcessBiochem.，2003,39(3):367-379.

[12] Fukuda T，Ito H，Yoshida T.Phytochemistry，2003,63(7):795-801.

[13] Warpe V S，Mali V R，Arulmozhi S，Bodhankar S L,Mahadik K R.J.AcuteMed.，2015,5:1-8.

[14] Mansouri M T，Naghizadeh B，Ghorbanzadeh B.Pharmacol.Rep.，2015,67:473-477.

[15] Losso J N，Bansode R R，Trappey A，Bawadi H A，Truax R.J.Nutr.Biochem.，2004,15:672-678.

[16] Dhingra D，Jangra A.J.Funct.Foods，2014,10:364-369.

[17] Akileshwari C，Raghu G，Muthenna P，Mueller N H，Suryanaryana P，Petrash J M，Reddy G B.J.Funct.Foods，2014,6:374-383.

[18] Elhemely M A，Omar H A，Ain-Shoka A A，Abd El-Latif H A，Abo-Youssef A M，El Sherbiny G A.Beni-suefUniv.J.BasicAppl.Sci.，2014,3:239-246.

[19] Munagala R，Aqil F，Vadhanam M V，Gupta R C.CancerLett.，2013,339:175-184.

[20] Mertens-Talcott S U，Talcott S T，Percival S S.J.Nutr.，2003,133:2669-2674.

[21] Notka F，Meier G，Wagner R.AntiviralRes.，2004,64:93-102.

[22] Hassonna E A，Walter A C，Alsharif N Z，Stohs S J.Toxicology，1997，124:27-37.

[23] Nankar R P，Doble M.J.Funct.Foods，2015,15:1-10.

[24] Yang Y，Shi L，Zhang J，Li W S，Zhang K C，F(xiàn)eng X Y.NorthernHorticulture(楊媛，石磊，張佳，李文生，張開春，馮曉元.北方園藝)，2012,15:25-27.

[25] Zhang Q.J.NorthwestUniv.:Nat.Sci.Ed.(張強(qiáng).西北大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版)，1997，27(4):313-315.

[26] Chen J H，Wu D M，Wang Y M，Wu Z S.BiomassChem.Eng.(陳笳鴻，吳冬梅，汪詠梅，吳在嵩.生物質(zhì)化學(xué)工程)，2007,41(3):18-20.

[27] Lin T Y，Vine R P.J.FoodSci.，1990，55(6):1607-1609.

[28] Avachat A M，Patel V G.SaudiPharm.J.，2015,23:276-289.

[29] Zhou B H，Wu Z H，Li X J，Liu C，Zhang J.Chin.Pharm.(周本宏，吳振華，李小軍，劉春，張杰.中國(guó)藥房)，2005,16(24):1893-1894.

[30] Zheng Y L，Wang S Y，Wang C Y，Zheng W.LWT-FoodSci.Technol.，2007,40:49-57.

Determination of Ellagic Acid in Strawberry by UPLC-MS/MS

YANG Yuan1,2，SHI Lei1，YANG Jun-jun1，ZHANG Ying-ying1，ZHANG Kai-chun1,3*

(1.Institute of Forestry and Pomology，Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Beijing 100093，China;2.Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Horticultural Crops(North China)，Ministry of Agriculture，China，Beijing 100097，China;3.Beijing Engineering Research Center for Deciduous Fruit Trees，Beijing 100093，China)

A method was developed for the determination of ellagic acid(free ellagic acid and total ellagic acid) in strawberry by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS).In this work，the free ellagic acid was extracted from strawberry with 0.1%trifloroacetric acid-methane，purified by C18dispersive solid-phase extraction，and determined by UPLC-MS/MS.Total ellagic acid was hydrolyzed to free ellagic acid with 2 mol/L trifloroacetric acid aqueous，then purified with C18dispersive solid-phase extraction column，and determined by UPLC-MS/MS.Sample solution was separated on a C18column by gradient elution using methanol-0.5%formic acid aqueous as mobile phase.The linear range of 10-500 ng/mL for ellagic acid was obtained，with correlation coefficient of 0.998 1.The limit of quantitation was 0.5 mg/kg for free ellagic acid and 5.0 mg/kg for total ellagic acid.The recoveries at low，medium and high spiked levels ranged from 86.7%to 113.6%with relative standard deviations(RSD) not more than 10%.The results indicated that this approach was simple，sensitive and accurate，and was applicable for the determination of content of ellagic acid in strawberry.

ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS);free ellagic acid;total ellagic acid;strawberry

2016-06-15；

2016-07-25

科技創(chuàng)新能力建設(shè)專項(xiàng)(KJCX20140302，KJCX20150602)

10.3969/j.issn.1004-4957.2016.12.013

O656.63;S816.7

A

1004-4957(2016)12-1591-05

*通訊作者：張開春，博士，研究員，研究方向：果樹資源育種及果品質(zhì)量安全，Tel:010-82596007，E-mail:zkc8848@126.com