李俊英，葛文超 ，王藝芳，方建華

(河南省紅十字血液中心檢驗(yàn)科，鄭州 450053)

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·論 著·

不同群體無(wú)償獻(xiàn)血者核酸檢測(cè)的結(jié)果分析及應(yīng)用

李俊英，葛文超 ，王藝芳，方建華△

(河南省紅十字血液中心檢驗(yàn)科，鄭州 450053)

目的 通過(guò)對(duì)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本核酸檢測(cè)(NAT)的結(jié)果分析，評(píng)價(jià)不同獻(xiàn)血者的血液安全性及核酸檢測(cè)的必要性，同時(shí)針對(duì)獻(xiàn)血者性別、年齡和職業(yè)差異的特點(diǎn)，完善無(wú)償獻(xiàn)血宣傳和人群篩選策略，保證血液安全。方法 對(duì)鄭州地區(qū)2012年9月至2014年8月259 329例無(wú)償獻(xiàn)血者NAT結(jié)果進(jìn)行分析，并對(duì)陽(yáng)性獻(xiàn)血者依據(jù)不同性別、年齡及職業(yè)進(jìn)行回顧性統(tǒng)計(jì)。結(jié)果 在259 329例經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)陰性的獻(xiàn)血者中檢出144例核酸陽(yáng)性標(biāo)本，核酸陽(yáng)性率為0.056%。不同性別、年齡和職業(yè)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中，男性獻(xiàn)血者核酸陽(yáng)性率(0.075%)比女性獻(xiàn)血者(0.023%)明顯偏高(P<0.01)；核酸陽(yáng)性率以36～45歲最高(0.088%)，18～25歲最低(0.022%)；不同職業(yè)人群中以農(nóng)民的核酸陽(yáng)性率(0.095%)較高，公務(wù)員(0)、醫(yī)務(wù)工作者(0)、學(xué)生的核酸陽(yáng)性率(0.018%)較低。結(jié)論 實(shí)施NAT能更好地保證血液的安全性；學(xué)生、公務(wù)員及女性血液NAT陽(yáng)性率較低，應(yīng)為血站重點(diǎn)招募人群。

核酸檢測(cè)； 獻(xiàn)血者； 核酸陽(yáng)性率

輸血在臨床救治中發(fā)揮著不可替代的作用，但輸血亦存在風(fēng)險(xiǎn)[1]，尤其是可導(dǎo)致乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)的傳播。目前，核酸檢測(cè)(NAT)技術(shù)是世界上最先進(jìn)、最精確的疾病檢測(cè)手段。人體感染了病毒，體內(nèi)就會(huì)不斷復(fù)制并產(chǎn)生大量病毒，這一過(guò)程要先于體內(nèi)對(duì)病毒的識(shí)別和產(chǎn)生免疫反應(yīng)[2]。此外，NAT還可以檢出因病毒變異、免疫靜默感染而漏檢的血液，因此，開(kāi)展NAT是保障血液安全的重要手段。目前，歐美、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家的采供血機(jī)構(gòu)已經(jīng)全面使用NAT技術(shù)結(jié)合1遍血清學(xué)方法進(jìn)行血液篩查[3]。我國(guó)自2010年6月在全國(guó)15家采供血機(jī)構(gòu)開(kāi)展第1批NAT試點(diǎn)工作以來(lái)，成效顯著。為了解鄭州地區(qū)不同性別、年齡、職業(yè)的獻(xiàn)血者NAT陽(yáng)性率的流行特點(diǎn)，對(duì)2012～2014年本中心無(wú)償獻(xiàn)血者NAT結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年9月至2014年8月鄭州市無(wú)償獻(xiàn)血者經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)為陰性的標(biāo)本259 329例。

1.2 儀器與試劑 全自動(dòng)Hamilton STAR加樣儀；全自動(dòng)Hamilton Microlab FAME酶免分析儀；兩套核酸檢測(cè)系統(tǒng)：Roche Cobas s 201血液核酸篩查系統(tǒng)(包括Hamilton STAR全自動(dòng)混樣儀、Cobas Ampliprep 核酸提取儀和Taqman Analyzer核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀)及上?？迫A血液核酸篩查系統(tǒng)(包括Hamilton STAR全自動(dòng)混樣、提取儀及ABI 7500 實(shí)時(shí)熒光擴(kuò)增儀)。酶免試劑：乙肝表面抗原(HBsAg)(北京萬(wàn)泰和珠海麗珠)，丙肝抗體(抗-HCV)(北京萬(wàn)泰和上海科華)；艾滋抗原抗體(HIV Ag/Ab)(北京萬(wàn)泰和法國(guó)BIO-RAD公司)；NAT試劑：Cobas TaqScreen MPX 1.0 test NAT試劑盒(批號(hào)R01528，R07643，S00983)；科華HBV、HCV、人類(lèi)免疫缺陷病毒-1型(HIV-1)NAT試劑盒(批號(hào)20111110、20130610、20131020)。以上試劑均批檢合格，且在有效期內(nèi)使用。

1.3 檢測(cè)方法 當(dāng)日采用兩種不同廠(chǎng)家的ELISA試劑對(duì)獻(xiàn)血者的標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，次日從核酸組挑除ELISA反應(yīng)性標(biāo)本，ELISA陰性標(biāo)本隨機(jī)采用一種核酸篩查系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。NAT混檢有反應(yīng)性、拆分亦有反應(yīng)性的標(biāo)本判為陽(yáng)性。

1.4 質(zhì)量控制 通過(guò)陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品來(lái)控制試劑盒的質(zhì)量和檢測(cè)的有效性，標(biāo)本的采集、運(yùn)輸?shù)綑z測(cè)均嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作，核酸實(shí)驗(yàn)人員均參加過(guò)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨檢中心舉辦的NAT培訓(xùn)班且考核成績(jī)合格。此外本實(shí)驗(yàn)室每年定期參加省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨檢中心和中國(guó)國(guó)際輸血感染預(yù)防和控制(CITIC)舉辦的血站核酸擴(kuò)增檢測(cè)項(xiàng)目的室間質(zhì)評(píng)，成績(jī)均合格。

1.5 核酸陽(yáng)性獻(xiàn)血者的分組比較 本血液中心核酸陽(yáng)性獻(xiàn)血者以性別、年齡、職業(yè)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 核酸陽(yáng)性率情況 2012年9月至2014年8月本中心共進(jìn)行NAT標(biāo)本259 329例，檢出核酸陽(yáng)性標(biāo)本144例，陽(yáng)性率為0.56‰。

2.2 不同性別、年齡及職業(yè)人群NAT陽(yáng)性率的比較 見(jiàn)表1～3。男性獻(xiàn)血者核酸陽(yáng)性率高于女性， 36～45歲核酸陽(yáng)性率最高，農(nóng)民的核酸陽(yáng)性率較其他職業(yè)人群偏高。

表1 不同性別NAT陽(yáng)性率的比較

注：不同性別NAT陽(yáng)性率的比較，χ2=29.35，P<0.01。

表2 不同年齡組NAT陽(yáng)性率的比較

注：不同年齡組NAT陽(yáng)性率的比較，χ2=36.57,P<0.01。

表3 不同職業(yè)NAT陽(yáng)性率的比較(%)

注：因公務(wù)員、醫(yī)務(wù)工作者NAT陽(yáng)性數(shù)均為0，采用Fisher確切概率法，不同職業(yè)人群NAT陽(yáng)性率的比較,χ2=32.15,P<0.01。

3 討 論

輸血相關(guān)病毒性傳染病不僅成為輸血界的重要議題，而且成為整個(gè)衛(wèi)生界甚至全社會(huì)的焦點(diǎn)[4]。目前，國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)普遍采用兩遍ELISA檢測(cè)，由于該試劑和方法上的局限性，存在一定的漏檢，給臨床用血安全造成了隱患。近年來(lái)，我國(guó)越來(lái)越多的采供血機(jī)構(gòu)開(kāi)展了靈敏度、特異度較高的NAT技術(shù)，更好地保障了臨床用血安全。

從本研究的結(jié)果來(lái)看，本中心在259 329例ELISA陰性標(biāo)本中共檢出144例NAT陽(yáng)性標(biāo)本，陽(yáng)性率為0.056%。根據(jù)其乙肝五項(xiàng)及對(duì)獻(xiàn)血者追蹤的結(jié)果可知，大多數(shù)為原發(fā)性隱匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)病例[5]，而輸注含有OBI血液的受血者則有可能導(dǎo)致感染HBV的風(fēng)險(xiǎn)[6]。144例NAT陽(yáng)性標(biāo)本中，有1例為HIV RNA陽(yáng)性，1例HCV RNA陽(yáng)性，初步推測(cè)本地區(qū)的HIV RNA和HCV RNA陽(yáng)性率約為1/25.9萬(wàn)，低于深圳市HCV RNA陽(yáng)性率(1/13.1萬(wàn))、遼寧省血液中心HIV RNA陽(yáng)性率(1/17.7萬(wàn))[7]，以及任芙蓉等[2]報(bào)道的合格血液中HCV的漏檢率1/4.4萬(wàn)。各地陽(yáng)性率的差異，可能與ELISA篩查試劑、NAT試劑、本地區(qū)的疾病流行水平，以及研究樣本量的大小有關(guān)，尤其是研究樣本量的大小，在低陽(yáng)性率時(shí)樣本量對(duì)陽(yáng)性率的影響更加明顯[8]。盡管以上研究報(bào)道的NAT陽(yáng)性率不盡相同，但是均說(shuō)明無(wú)償獻(xiàn)血者中存在ELISA的漏檢，NAT是一種強(qiáng)有力的篩查補(bǔ)充。

將259329例ELISA陰性但NAT陽(yáng)性的獻(xiàn)血者按性別、年齡及職業(yè)分別分組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)3種分類(lèi)方法的組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從表3可以發(fā)現(xiàn)：(1)鄭州地區(qū)男性獻(xiàn)血者NAT陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于女性。估計(jì)與男性的生活不規(guī)律、飲酒較多、身體狀況很多處于亞健康，更易受到病毒的感染有關(guān)。(2)從不同年齡組間NAT陽(yáng)性率差異來(lái)看，36～<45歲年齡組獻(xiàn)血者的NAT陽(yáng)性率最高，其次為≥45歲的年齡組。估計(jì)該兩組年齡段的人群出生在中國(guó)六七十年代的生育高峰期，當(dāng)時(shí)國(guó)家未實(shí)施新生兒乙型肝炎疫苗接種，醫(yī)療衛(wèi)生條件和防范意識(shí)差，導(dǎo)致該年齡段NAT陽(yáng)性率較高。而35～<45歲年齡組的人群，他們社會(huì)活動(dòng)多，應(yīng)酬多，接觸傳染源的機(jī)會(huì)也多，所以也更容易感染，陽(yáng)性率最高。而18～<25歲年齡組的人群，可能與我國(guó)從1992年開(kāi)始實(shí)施HBV計(jì)劃免疫有關(guān)，HBV嬰幼兒免疫大大降低了低年齡組人群中的HBV流行率，并且其中有很大一部分是在校學(xué)生，生活單純，接觸病原感染的機(jī)會(huì)較少，所以該年齡段的人群NAT陽(yáng)性率最低。(3)從不同職業(yè)分布來(lái)看，農(nóng)民的NAT陽(yáng)性率最高，估計(jì)由于他們平時(shí)生活條件較差，工作壓力較大，對(duì)衛(wèi)生意識(shí)和健康不夠重視，其次為技術(shù)人員和其他。其中其他(不明職業(yè))獻(xiàn)血者在無(wú)償獻(xiàn)血中發(fā)揮主力軍的作用，是獻(xiàn)血比例最高的人群，因?yàn)橛捎谏鐣?huì)分工越來(lái)越細(xì)，有些職業(yè)范疇難以確定，再者他們可能由于某些原因不愿透露自己的職業(yè)。本研究顯示公務(wù)員、醫(yī)務(wù)工作者的NAT陽(yáng)性率為0，估計(jì)該群體平時(shí)注重自己的身體，經(jīng)常體檢，合格率較高，同時(shí)也可能因該群體獻(xiàn)血人數(shù)太少有關(guān)。除了公務(wù)員、醫(yī)務(wù)工作者，學(xué)生的NAT陽(yáng)性率最低(0.018%)，可能學(xué)生因生活單純，注射過(guò)乙型肝炎疫苗，因此陽(yáng)性率較低，因此這部分人群可以作為重點(diǎn)目標(biāo)人群進(jìn)行獻(xiàn)血招募。針對(duì)以上情況分析，本中心已定期與鄭州市區(qū)的高校和機(jī)關(guān)事業(yè)單位聯(lián)系，獻(xiàn)血車(chē)進(jìn)校園、進(jìn)機(jī)關(guān)、進(jìn)醫(yī)院、進(jìn)企事業(yè)單位為他們提供更方便的獻(xiàn)血服務(wù)，進(jìn)一步擴(kuò)大該團(tuán)體的招募獻(xiàn)血，目前該部分人群比例正在不斷提高；同時(shí)加強(qiáng)工作人員培訓(xùn)，強(qiáng)化征詢(xún)技巧與策略，從低危人群中招募獻(xiàn)血志愿者。

為消除不同檢測(cè)試劑對(duì)不同人群NAT陽(yáng)性率差異的影響，作者針對(duì)兩種NAT試劑各自篩查出的NAT陽(yáng)性獻(xiàn)血者，依照不同性別、年齡、職業(yè)做了單獨(dú)分析比較，發(fā)現(xiàn)羅氏試劑的結(jié)果分析與表3結(jié)果一致；科華試劑在獻(xiàn)血者不同性別、年齡組的差異，與整體聯(lián)合分析的結(jié)果一致，均為男性獻(xiàn)血者NAT陽(yáng)性率高于女性；36～45歲獻(xiàn)血者的NAT陽(yáng)性率最高，18～<25歲獻(xiàn)血者的NAT陽(yáng)性率最低，但在職業(yè)分布上，以技術(shù)人員陽(yáng)性率最高，其次為農(nóng)民，估計(jì)與科華試劑檢出的陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)較少，而職業(yè)分類(lèi)較多，受檢測(cè)樣本量的影響較大有關(guān)。

綜上所述，通過(guò)對(duì)獻(xiàn)血者的標(biāo)本實(shí)施NAT，能使輸血感染相關(guān)病毒的風(fēng)險(xiǎn)降到最低，極大程度地保障血液安全；另外從以上數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析可以看出：鄭州地區(qū)獻(xiàn)血者人群的人口學(xué)特征是，45歲以下占主體、男性為主、其他職業(yè)人群為主，女性、18～<25歲及公務(wù)員、醫(yī)務(wù)工作者、學(xué)生的NAT陽(yáng)性率較低，這為有針對(duì)地動(dòng)員更多女性和年輕的獻(xiàn)血者參加獻(xiàn)血，及時(shí)調(diào)整招募策略，以及采取措施鼓勵(lì)更多獻(xiàn)血者重復(fù)獻(xiàn)血，提供了一定的參考數(shù)據(jù)。

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Analysis and application of nucleic acid testing results among different groups of blood donors

LIJunying,GEWenchao,WANGYifang,FANGJianhua△

(DepartmentofClinicalLaboratory,HenanProvincialRedCrossBloodCenter,Zhengzhou,Henan450053,China)

Objective To analyze the results of nucleic acid testing(NAT) and to evaluate the blood safety of different blood donors and necessity of NAT,meanwhile to perfect the voluntary blood donation propaganda and population screening strategy for ensuring the blood safety.Methods The results of NAT in 259 329 voluntary blood donors in Zhengzhou area from September 2012 to August 2014 were analyzed.Then the positive blood donors were retrospectively analyzed according to different genders,ages and occupations.Results Among 259 329 negative blood donors detected by ELISA,144 cases of NAT positive samples were detected,the nucleic acid positive rate was 0.056%.The different genders,ages and occupations had statistically significant difference in the NAT results.Among them,male donors had a significantly higher NAT positive rate than female(0.075%vs. 0.023%,P<0.01).The NAT positive rate was highest in the age group of 36-45 years old(0.088%)and lowest in the age group of 18-25 years old(0.022%);in different occupational groups,the NAT positive rate in the farmers group was higher(0.095%),but which in civil servants,medical workers and students group(0,0,0.018%).Conclusion The NAT implementation can better ensure the blood safety,students,civil servants and the females should serve as the focus recruited populations due to lower NAT positive rate.

nucleic acid testing; blood donors; NAT positive rate

李俊英，女，主管技師，主要從事血液檢驗(yàn)研究。△

，E-mail:xyzxjyk@yahoo.com.cn。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.24.014

A

1673-4130(2016)24-3421-03

2016-09-01

2016-10-20)