劉煒，楊曉鳳，雷紹榮

（四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心，四川成都610066）

氣相色譜法同時(shí)測定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量

劉煒，楊曉鳳，雷紹榮

（四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心，四川成都610066）

建立了毛細(xì)管柱氣相色譜法同時(shí)測定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的方法。樣品經(jīng)鹽酸酸化后，乙醚提取，經(jīng)HP-FFAP（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）毛細(xì)管柱分離后，采用火焰離子化檢測器（FID）檢測醬腌菜樣品中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量。結(jié)果表明，山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸含量分別在5.0～400 mg/L線性良好（r＞0.999），平均回收率為87.6%～97.7%，RSD（n＝5）在0.8%～3.7%。該方法快速、準(zhǔn)確，適用于同時(shí)測定醬腌菜樣品中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量。

山梨酸；脫氫乙酸；苯甲酸；氣相色譜；醬腌菜

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸是我國目前常用的食品防腐劑[1]。食品防腐劑可抑制食品中微生物的繁殖、殺死食品中含有的有害微生物，以此來防止食品變質(zhì)的化學(xué)過程，同時(shí)還不影響食品的味道[2]。據(jù)報(bào)道，過多地?cái)z入這些防腐劑會對人體造成傷害，如導(dǎo)致人體酸中毒、抽搐和過度深呼吸[3]，我國對食品防腐劑在食品中的使用都有嚴(yán)格的規(guī)定[4]。因此，對醬腌菜中常用的防腐劑山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量進(jìn)行檢測非常重要。

目前，檢測山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的方法有氣相色譜法[5-8]、氣相色譜-質(zhì)譜法[9]、液相色譜法[10-13]等；國標(biāo)方法主要有《GB/T5009.29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定》和《GB/T 5009.121—2003食品中脫氫乙酸的測定》[14-15]。在氣相色譜法中，3種防腐劑的前處理方法不盡相同，給日常的檢測工作無疑增加了難度及強(qiáng)度。因此，有必要建立一種同時(shí)測定山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的檢測方法。

本研究建立了一種同時(shí)測定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的檢測方法，樣品經(jīng)鹽酸酸化、乙醚提取，用氣相色譜火焰離子化檢測器分析，該法操作簡單快速，測定結(jié)果滿意，適合于同時(shí)測定醬腌菜樣品中3種防腐劑的含量。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與試劑

美國Agi7890A氣相色譜儀，配有自動進(jìn)樣品、FID檢測器；色譜柱為Agilent HP-FFAP石英毛細(xì)管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）。

丙酮為色譜純；乙醚、無水硫酸鈉、氯化鈉均為分析純。

山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品均購自Dr. Ehrenstorfer公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-FFAP石英毛細(xì)管柱；載氣為氮?dú)猓兌取?9.999%）；恒流模式，流量2 mL/min；尾吹氣為氮?dú)?，流量?8 mL/min；檢測器溫度為250℃，空氣流量400mL/min，氫氣流量30mL/min；進(jìn)樣口溫度為200℃，分流進(jìn)樣，分流比為10∶1，進(jìn)樣量為1 μL；柱溫采用升溫程序：初始溫度150℃，以30℃/min速率升至220℃，保持3 min；后運(yùn)行：220℃保持5 min。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制：分別稱取山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品各50.0 mg，分別置于3個50 mL容量瓶中，均用丙酮定容至刻度，制成濃度為1 000 mg/L的山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液，保存于4℃下。稱取山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品50.0 mg置于50 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，制成濃度均為1 000 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，保存于4℃下。使用前，用丙酮稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液。標(biāo)準(zhǔn)工作液系列的配制：丙酮稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)溶液得到5.0，10.0，50.0，100.0，200.0，400.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 樣品的前處理稱取2.50 g醬腌菜樣品于50 mL具塞比色管中，加入6 mol/L鹽酸1 mL后，分別用25 mL乙醚提取2次，每次振搖2 min后靜止，將上層乙醚提取液轉(zhuǎn)移至另一支具塞比色管，合并乙醚提取液。用40 g/L酸性氯化鈉溶液5 mL洗滌乙醚提取液1次，靜止2 min，棄去下層溶液。加入無水硫酸鈉，振搖1 min，將乙醚提取液于35℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，5 mL丙酮溶解定容后過0.45 μm濾膜備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱的選擇

考察了山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸在Agilent HP-5（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm），Agilent DB-17（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm），Agilent HP-FFAP（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）3種不同極性毛細(xì)管柱相同的程序升溫條件（初始溫度為60℃，以35℃/min速率升至220℃，保持10 min）下的色譜保留行為，結(jié)果如圖1所示。綜合山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸色譜峰的對稱性及峰高響應(yīng)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，極性FFAP柱分析山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸時(shí)峰形對稱，峰高較高，因此，本試驗(yàn)選擇HP-FFAP石英毛細(xì)管柱。

2.2 色譜條件的優(yōu)化及其色譜圖分析

柱溫對化合物的出峰時(shí)間和色譜峰形有較大的影響。在1.2色譜條件下，3種化合物色譜峰形較好，出峰時(shí)間短，實(shí)現(xiàn)了基線分離，且樣品中無干擾雜質(zhì)峰，表明試驗(yàn)條件良好。圖2為1.2色譜條件下山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品、醬腌菜空白樣品及醬腌菜空白加標(biāo)樣品的色譜圖。由圖2可知，山梨酸保留時(shí)間為2.589 min，脫氫乙酸的保留時(shí)間為2.894 min，苯甲酸的保留時(shí)間為3.634 min。

2.3 前處理方法的確定

一般生產(chǎn)時(shí)防腐劑添加的是山梨酸鉀或苯甲酸鈉或脫氫乙酸鈉，加鹽酸酸化后，會形成山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸，因此，極性大大減弱，這樣就較容易被弱極性的乙醚所提取，加入酸性氯化鈉后，由于鹽析作用，會使乙醚層中的微量水盡可能釋放出來，促進(jìn)分層。

另外，試驗(yàn)探討了乙醚用量對山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸萃取率的影響。用25 mL乙醚萃取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用25 mL乙醚萃取一次山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸的萃取率大于90%；經(jīng)過2次25 mL乙醚萃取，山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸能完全萃取。

因此，本試驗(yàn)選擇的前處理方法確定為1.3.2分析步驟的前處理方法。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限分析

在本試驗(yàn)條件下，采集不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品信號繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，3種防腐劑在質(zhì)量濃度為5.0～400.0 mg/L時(shí)，質(zhì)量濃度（C）與其峰面積（A）呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。以S/N＝3計(jì)，檢出限在0.12～0.21 mg/kg。3種防腐劑的相關(guān)系數(shù)和檢出限如表1所示。

表1 回歸曲線的基本參數(shù)

2.5 方法的準(zhǔn)確度和精密度分析

在不含有山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的醬腌菜樣品中分別添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為5.0，50.0，200 mg/kg，每個質(zhì)量分?jǐn)?shù)水平重復(fù)5次，按照1.3.2分析步驟處理樣品，進(jìn)行精密度與準(zhǔn)確度的測定，3種添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方法回收率及精密度列于表2。從表2可以看出，該方法的回收率在87.6%～97.7%，RSD在0.8%～3.7%，表明該方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性良好。在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心2015年1月至2016年4月間，有179個醬腌菜樣品使用本研究的方法同時(shí)高效檢測山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸項(xiàng)目，共有28個樣品有檢出，其中，23個樣品中僅山梨酸檢出未超標(biāo)，3個樣品中苯甲酸檢出未超標(biāo)，2個樣品中脫氫乙酸檢出未超標(biāo)。

表2 方法的回收率和精密度試驗(yàn)（n＝5）

3 結(jié)論

本研究方法對3種防腐劑山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的色譜分離效果良好、檢出限低、精密度高、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍廣、加標(biāo)回收率高，符合色譜檢測的要求。而且操作簡單、分析效率高，同時(shí)適合進(jìn)行大批量樣品的檢測，能滿足各級檢測機(jī)構(gòu)的實(shí)際檢測工作需要。

［1］周紅霞，張紅琳，黃娟，等.高效液相色譜法同時(shí)檢測液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉含量的研究[J].中國食品添加劑，2014（3）：208-212.

［2］Mas?owska J，Wi?d?ocha M.Thermal decomposition of some chemical compounds used as food preservatives and kinetic parameters of this process[J].Journal of Thermal Analysis and Calorimetry，2000，60：305-312.

［3］王萍，李潔，丁曉靜.短分離柱膠束液相色譜法同時(shí)測定醬油和食醋中的苯甲酸和山梨酸[J].色譜，2016，34（3）：327-331.

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2760—2011食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011.

［5］洪萍，應(yīng)杏秋，徐陸妹，等.毛細(xì)管氣相色譜法快速檢測食品中脫氫乙酸[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（8）：1882-1883.

［6］徐陸妹.毛細(xì)管氣相色譜法快速檢測食品中脫氫乙酸[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（9）：2199-2201.

［7］劉沛明.毛細(xì)管柱氣相色譜法同時(shí)測定月餅中苯甲酸、山梨酸、丙酸鈣及脫氫乙酸[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，42（22）：4077-4080.

［8］楊曉鳳，李克勤，韓梅，等.凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜法測定調(diào)味品中7種防腐劑[J].中國調(diào)味品，2011，36（9）：107-115.

［9］郝鵬飛，徐琴，牟志春，等.氣相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)測定葡萄酒中13種防腐劑[J].分析試驗(yàn)室，2013，32（7）：108-111.

［10］謝柏艷，馮光，辜華勝.高效液相色譜法同時(shí)測定食品中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸及糖精鈉[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22（1）：49-53.

［11］陳杰鋒，劉文麗.HPLC法測定肉制品中苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸[J].廣東化工，2014，41（13）：269-270.

［12］劉新江.水果罐頭中苯甲酸（鈉）、山梨酸（鉀）、脫氫乙酸（鈉）和糖精鈉的反相高效液相色譜法測定[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（11）：2647-2649.

［13］鄭曉冰，趙質(zhì)創(chuàng)，朱虹.高效液相色譜法同時(shí)測定醬油中6種防腐劑[J].食品科學(xué)，2011，32（22）：213-215.

［14］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［15］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.121—2003食品中脫氫乙酸的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

Simultaneous Determination of Sorbic Acid，Dehydroacetic Acid and Benzoic Acid in Pickled Vegetables by Capillary Gas Chromatography

LIUWei，YANGXiaofeng，LEI Shaorong
（Analysis and TestingCenter，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Chengdu 610066，China）

Amethod based on capillarygas chromatographywas developed todetect sorbic acid,dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables.After being acidified,samples were extracted with ether,separated on a capillary column（HP-FFAP,30.00 m× 0.32 mm×0.25 μm）and detected with a flame ionization detector（FID）.The result showed that the linear range was 5.0-400.0 mg/L and the linear correlation coefficients of sorbic acid,dehydroacetic acid and benzoic acid were greater than 0.999.The recoveries ranged from 87.6%to 97.7%with RSD（n=5）of 0.8%-3.7%.This method was stable,rapid and repeatable to detect the sorbic acid, dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables．

sorbic acid;dehydroacetic acid;benzoic acid;gas chromatography;pickled vegetable

TS255.53

A

1002-2481（2016）10-1484-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.10.14

2016-06-22

劉煒（1988-），女，重慶開縣人，研究實(shí)習(xí)員，主要從事食品安全分析研究工作。