■庫(kù)麗扎達(dá)·木拉提

（新疆獸藥飼料監(jiān)察所，新疆烏魯木齊 830063）

飼料添加劑葉黃素為黃色至暗黃色的浸膏，常溫膏狀。葉黃素又名“植物黃體素”，分子式C40H56O2，分子量為568.85，經(jīng)溶劑萃取等工藝制得的浸膏，主要成分為葉黃素及其同分異構(gòu)玉米黃質(zhì)，本產(chǎn)品主要成分葉黃素作為飼料添加劑和著色劑添加到肉雞、蛋雞、鴨、魚飼料中，可使動(dòng)物皮膚脂肪變黃，蛋心變紅，使商品肉蛋品質(zhì)提升，營(yíng)養(yǎng)增加。本試驗(yàn)利用紫外分光光度法測(cè)定飼料中的葉黃素的含量。

1 試驗(yàn)方法

1.1 產(chǎn)品性狀

葉黃素為深棕色黏稠浸膏，常溫下流動(dòng)易溶于正己烷，不溶于水。

1.2 試驗(yàn)試劑和溶液

正己烷(分析純)、甲醇(分析純)、無水乙醇(分析純)、丙酮(分析純)、甲苯(分析純)、萃取劑 HEAT(正己烷+無水乙醇+丙酮+甲苯=10∶6∶7∶7)、40%氫氧化鉀-甲醇溶液(稱取分析純氫氧化鉀40 g于250 ml燒杯中，加15 ml純凈水迅速用玻璃棒攪拌溶解后，加入分析純甲醇50 ml，攪拌至澄清，移入100 ml容量瓶中，用分析純甲醇定容，搖勻靜置待用)、10%硫酸鈉水溶液(稱取無水硫酸鈉100 g于100 ml燒杯中，加純凈水溶解后移入100 ml容量瓶中，用純凈水定容至刻度)。

1.3 儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備、超聲波清洗器、紫外分光光度計(jì)、石英比色皿（1 cm）。

1.4 鑒別試驗(yàn)

取試驗(yàn)溶液。用分光光度計(jì)測(cè)定。以1 cm石英比色皿在420～480 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定試樣溶液的吸收光譜，應(yīng)在（445±1）nm、（473±1）nm的波長(zhǎng)處有最大吸收峰。

1.5 葉黃素含量測(cè)定

1.5.1 葉黃素含量計(jì)算

葉黃素在波長(zhǎng)(445±1)nm、(473±1)nm處有最大吸收峰，可根據(jù)該波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算其含量。

1.5.2 試樣溶液的制備

稱取約0.5 g試樣（精確至0.000 1 g）加入50 ml容量瓶中，加入25 ml左右HEAT至超聲波清洗劑中超聲約2 min，至試樣完全溶解；加HEAT定容，搖勻，移取5 ml稀溶液于100 ml容量瓶中，加入25 ml HEAT，輕搖溶解。移取2 ml 40%氫氧化鉀-甲醇溶液至容量瓶中，加蓋輕搖約1 min（誤差5 s）。空氣冷凝管加蓋后置（56±1）℃水浴上加熱皂化20 min（誤差10 s）；皂化完成后，立即將容量瓶取出于冷水中冷卻10 min，保證液溫降至室溫。向容量瓶中準(zhǔn)確加入30 ml正己烷溶劑，輕搖1 min（誤差5 s），用10%硫酸鈉水溶液定容。用200次/min的強(qiáng)度猛烈振搖2 min（誤差10 s），之后將容量瓶置于避光處1 h；移取上層液2 ml至150 ml容量瓶中，正己烷溶劑定容。

1.5.3 試樣的測(cè)定

將試樣分析液（1.5.2）置于1㎝石英池中，用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)(473±1)nm處測(cè)定吸收度A，以正己烷做空白對(duì)照。

1.5.4 計(jì)算和結(jié)果

X=2.118 64×A473×K/M。

式中：X——試樣中葉黃素（C40H56O2）含量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（g/kg）；

K——樣品上清液稀釋倍數(shù)；

M——樣品質(zhì)量(g)；

A473——吸光度。

1.6 葉黃素含量測(cè)定準(zhǔn)確度試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取5份試樣按1.5.2進(jìn)行試樣溶液制備在473 nm測(cè)定吸光度將樣品吸光度按1.5.4進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見表1。

1.7 葉黃素含量測(cè)定精密度試驗(yàn)

取測(cè)定準(zhǔn)確度試驗(yàn)的溶液按上法連續(xù)進(jìn)樣6次并將樣品吸光度按1.5.4進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見表2。

表1 試樣的測(cè)定結(jié)果

表2 精密度試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果

2 結(jié)論

用該方法測(cè)定飼料添加劑葉黃素含量，標(biāo)示含量為150 g/kg，經(jīng)測(cè)定5個(gè)樣品含量平均值為152.25 g/kg，RSD=1.4%,表明該樣品準(zhǔn)確度好；同一樣品平行測(cè)定6次結(jié)果為152.98 g/kg，RSD=0.3%，表明該樣品精密度良好。飼料添加劑葉黃素經(jīng)過準(zhǔn)確度試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果RSD均在規(guī)定的范圍內(nèi)，且有較好的準(zhǔn)確度與精密度。該方法合理、操作便捷，適合飼料添加劑葉黃素浸膏的檢測(cè)。