■胡慶勇 胡 聰 斯大勇 張日俊

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193）

近年來，隨著生活水平的提高，我國(guó)居民在對(duì)禽蛋的需求量保持穩(wěn)中有升的同時(shí)，越來越注重對(duì)綠色、健康、營(yíng)養(yǎng)的蛋品質(zhì)追求。而在當(dāng)今的集約化、高密度的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中，以沙門氏菌、大腸桿菌、巴氏桿菌等為代表的細(xì)菌性疾病頻發(fā)[1]，致使抗生素的大量、過度使用，引發(fā)的畜禽產(chǎn)品藥物殘留、耐藥性等問題日益嚴(yán)峻，嚴(yán)重地制約了養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。為提高動(dòng)物機(jī)體免疫力，改善畜產(chǎn)品質(zhì)量，保護(hù)人類健康，尋求一種安全、無污染、無殘留的抗生素替代品迫在眉睫。微生態(tài)制劑是基于動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡開發(fā)出來的一種綠色環(huán)保的活菌飼料添加劑，能顯著改善畜禽腸道環(huán)境，提高對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收利用率，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，具有無殘留、無耐藥性的優(yōu)點(diǎn)[2]。然而鮮有關(guān)于其作用機(jī)理，調(diào)控蛋品質(zhì)代謝途徑方面的研究報(bào)道，因此，本文對(duì)飼料中常用的益生菌，及其作用機(jī)理和對(duì)蛋品質(zhì)的調(diào)控途徑做了介紹，旨在為微生態(tài)制劑的實(shí)際應(yīng)用提供理論參考。

1 常用的益生菌

益生菌的概念起初由Lilly and Stillwell提出，用來描述一種細(xì)菌產(chǎn)生的能夠促進(jìn)其他細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)。隨著對(duì)其研究的深入，其概念也在不斷地更新和完善?，F(xiàn)在多指一種或多種的活菌飼料添加劑，具有改善腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)機(jī)體健康等功能[3]。益生菌種類繁多，理想的益生菌菌種通常具有以下特征[3-4]：①能抵抗酸、膽汁消化，經(jīng)胃腸道后仍能保持一定活性；②能夠定植于腸道上皮細(xì)胞或黏膜；③能夠產(chǎn)生抑菌物質(zhì)；④調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)能，但不產(chǎn)生炎癥反應(yīng)；⑤對(duì)動(dòng)物機(jī)體無毒害作用，能夠調(diào)節(jié)微生物平衡。在我國(guó)農(nóng)業(yè)部公布的允許使用的飼料添加劑名錄中，常用的益生菌有芽孢桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌、酵母菌、黑曲霉、米曲霉等。而養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用較多的有乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌三類[4]。

1.1 乳酸菌

乳酸菌是一類能發(fā)酵糖類產(chǎn)生乳酸的無芽孢、革蘭氏染色陽(yáng)性菌的總稱。乳酸菌作為機(jī)體內(nèi)的益生菌，能夠很好地耐受胃酸，同時(shí)具有較好的抗鹽性，并能產(chǎn)生有機(jī)酸，降低腸道pH值，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制其他有害菌的生長(zhǎng)；乳酸菌產(chǎn)生的細(xì)菌素等抑菌物質(zhì)能夠調(diào)節(jié)機(jī)體胃腸道菌群平衡、保持微生態(tài)穩(wěn)態(tài)[5]；飼喂乳酸菌能夠提高食物消化率，降低血清膽固醇，控制內(nèi)毒素，抑制腸道內(nèi)腐敗菌生長(zhǎng)繁殖[6]。近來有研究報(bào)道，乳酸菌生長(zhǎng)代謝過程中產(chǎn)生的胞外多糖，具有多種生理功能，能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力，還具有抗腫瘤的作用[7]。

1.2 芽孢桿菌

芽孢桿菌是一種以孢子形式直接添加到飼料中的桿菌或球菌，相比乳酸菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求簡(jiǎn)單、代謝速度快、抗逆性強(qiáng)、易于保藏和貯存[8]?？莶菅挎邨U菌和地衣芽孢桿菌具有很強(qiáng)的產(chǎn)蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的能力，能夠補(bǔ)充內(nèi)源酶的不足，破壞飼料中植物細(xì)胞壁，消除或減弱抗?fàn)I養(yǎng)成分，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收，提高飼料轉(zhuǎn)化率[9]?？莶菅挎邨U菌的脂磷壁酸和肽聚糖-磷壁酸復(fù)合物還具有免疫佐劑的功能，能夠提高機(jī)體免疫功能。

1.3 酵母菌

飼用酵母一般由酵母及其培養(yǎng)物組成，是一種富含蛋白的單細(xì)胞飼料。飼用酵母富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括天冬氨酸、蘇氨酸等氨基酸，B族維生素、生物素，以及錳等各種微量元素[10]。酵母細(xì)胞壁中的甘露聚糖和β-葡聚糖等，能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能[11]。還有研究指出酵母細(xì)胞壁中的β-葡聚糖等對(duì)霉菌毒素具有良好的吸附功能，且對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的影響很小[12]，是一種理想的霉菌毒素吸附劑。

2 蛋品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)

雞蛋品質(zhì)是養(yǎng)殖戶和消費(fèi)者都關(guān)注的重要性狀。在實(shí)際生產(chǎn)中，經(jīng)常需要根據(jù)消費(fèi)者的不同需求，對(duì)蛋重、蛋殼、蛋黃以及一些營(yíng)養(yǎng)素進(jìn)行調(diào)控。品種、飼料、營(yíng)養(yǎng)水平、飼養(yǎng)方式和環(huán)境溫度都是影響雞蛋品質(zhì)的重要因素。而近年來，應(yīng)用益生菌對(duì)蛋品質(zhì)進(jìn)行調(diào)控的報(bào)道屢見不鮮。益生菌對(duì)蛋品質(zhì)調(diào)控的研究，多集中在對(duì)蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋白比率、蛋黃比率、蛋黃色澤、哈氏單位以及蛋黃脂肪酸含量等方面。蛋重是鮮蛋分級(jí)的一個(gè)重要標(biāo)志，在一定范圍內(nèi)，蛋重越大，等級(jí)越高，日糧能量水平是影響蛋重的最主要因素。蛋殼的質(zhì)量主要與日糧中鈣的種類、含量、鈣磷比例以及一些微量元素有關(guān)。哈氏單位是衡量雞蛋蛋白品質(zhì)的重要指標(biāo)，一定程度上哈氏單位越高，表示蛋白黏稠度越好、蛋白品質(zhì)越高。蛋黃的主要成分是類胡蘿卜素，包含胡蘿卜素和葉黃素兩部分；蛋黃色澤作為消費(fèi)者十分關(guān)注的一個(gè)蛋品質(zhì)指標(biāo)，鮮艷的色澤往往更能吸引消費(fèi)者；在一定程度上，飼喂含色素較高的日糧可以加深蛋黃色澤，另外日糧中添加維生素E以及抗氧化劑也可以提高蛋黃顏色[13]。

3 益生菌對(duì)蛋品質(zhì)影響

微生物飼料添加劑在蛋雞生產(chǎn)上的使用效果，國(guó)內(nèi)外報(bào)道很多，但結(jié)果不盡相同。造成差異的原因很多，一方面與所用菌株的種類、生產(chǎn)工藝、加工貯存條件等有關(guān)；另一方面蛋雞的品種、日齡、飼喂的日糧類型也可能影響試驗(yàn)結(jié)果。但絕大多數(shù)報(bào)道都表明日糧中添加益生菌可以不同程度提高蛋雞的生產(chǎn)性能，改善雞蛋品質(zhì)。

鄭學(xué)斌等用（1.5×109CFU/g枯草芽孢桿菌、乳酸菌及其代謝物和載體等混合物）的益生菌飼料飼喂蛋雞，結(jié)果表明，含0.01%、0.02%的益生菌組比對(duì)照組蛋中膽固醇含量極顯著降低，脂肪含量顯著降低，蛋白含量顯著提高，灰分含量顯著提高，且效果優(yōu)于土霉素試驗(yàn)組。龍愛琳等分別用枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌和戊糖片球菌（107CFU/g）飼喂蛋雞，三種益生菌對(duì)蛋黃顏色、蛋黃重、蛋重、蛋殼平均厚度、蛋形指數(shù)和蛋白高度都有顯著影響。其原因可能是高劑量益生菌對(duì)機(jī)體生理機(jī)能起到較好的調(diào)節(jié)作用，可以產(chǎn)生乙酸、丙酸等短鏈脂肪酸，降低腸道pH值，促進(jìn)鈣磷等礦物質(zhì)離子化，促進(jìn)機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)、鈣、鐵和維生素D等物質(zhì)的吸收，進(jìn)而提高蛋品質(zhì)。還有一種解釋是益生菌通過促進(jìn)蛋雞采食量增加，使機(jī)體內(nèi)鈣的攝入總量增加來提高蛋重。Mikulski等[14]用乳酸片球菌飼喂蛋雞，其結(jié)果表明益生菌能夠提高蛋重，增加蛋殼厚度，蛋比重等指標(biāo)，并且蛋黃中膽固醇含量比對(duì)照組降低10%以上，不飽和脂肪酸含量得到提高。Ramasamy等[15]用1 g/kg含12株乳酸菌混合物的日糧（109CFU/g）飼喂蛋雞，其結(jié)果表明蛋重相比于空白組有顯著增加，其原因是益生菌提高了宿主對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收效率。在日糧中添加8.0×108CFU/kg乳酸片球菌能夠增加蛋黃中亞油酸和亞麻油酸等多不飽和脂肪酸的含量[14]，且使蛋黃色澤加深，其機(jī)理可能是促進(jìn)類胡蘿卜素的吸收，改善了蛋黃著色，從而提高了蛋黃質(zhì)量。

Mahdavi等[16]用一種由枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌組成的微生態(tài)制劑飼喂蛋雞，其結(jié)果表明，不同添加量的微生態(tài)制劑都顯著降低血漿中膽固醇和甘油三酯的含量和蛋黃中膽固醇含量，而其他與蛋品質(zhì)相關(guān)的性狀并沒有顯著變化。Saleh等[17]研究結(jié)果表明，在飼料中添加泡盛曲霉能夠顯著降低蛋黃中脂肪以及膽固醇含量，同時(shí)蛋黃中亞油酸、亞麻油酸、α-亞油酸的含量得到顯著提高；其機(jī)理可能是泡盛曲霉產(chǎn)生了去飽和酶，將飽和脂肪酸還原為不飽和脂肪酸[18]。另外一些關(guān)于益生菌的研究中，其對(duì)蛋品質(zhì)調(diào)控的試驗(yàn)結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上并不顯著，但蛋雞的生長(zhǎng)性能、血液生化指標(biāo)等都有改善的趨勢(shì)，對(duì)動(dòng)物機(jī)體健康狀況有一定的提高作用。

4 益生菌的作用機(jī)理

4.1 改善腸道黏膜屏障

由腸上皮細(xì)胞以及腸上皮細(xì)胞之間的緊密連接組成的腸道機(jī)械屏障是抵御外來異物入侵的第一道屏障，能夠有效防止病原菌、腸毒素透過腸黏膜進(jìn)入血液。機(jī)體內(nèi)的一些致病菌，例如大腸桿菌，會(huì)產(chǎn)生腸毒素等，破壞腸上皮細(xì)胞之間的緊密連接，提高腸黏膜的通透性，導(dǎo)致毒素等透過腸道屏障進(jìn)入血液，引發(fā)炎癥反應(yīng)，溶血癥等一系列危害。而植物乳桿菌等有益菌卻能夠促進(jìn)occludin、caco-2、zo-1、zo-2和細(xì)胞骨架蛋白的表達(dá)量，從而加強(qiáng)腸上皮細(xì)胞之間的緊密連接[19]，降低腸黏膜的通透性。通過促進(jìn)黏膜蛋白的分泌量和增加黏蛋白的厚度來降低腸道屏障的通透性。許多益生菌能夠產(chǎn)生丁酸，丁酸作為上皮細(xì)胞的主要能量之一，能夠促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖分化，抑制炎癥，維持和促進(jìn)腸道正常功能[20]。

4.2 調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)

通過競(jìng)爭(zhēng)性地排除、頡頏病原菌保持腸道正常菌群結(jié)構(gòu)；有研究指出乳酸菌作為一種益生菌能夠產(chǎn)生乳酸、乙酸、丁酸等有機(jī)酸、過氧化氫以及細(xì)菌素等物質(zhì)來抑制其他病原菌的增殖，形成一層生物屏障，保持腸道菌群的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。并且絕大多數(shù)益生菌能夠聚集和粘附，可以競(jìng)爭(zhēng)性地粘附在腸道黏膜表面，生成一層菌群膜，形成生物屏障來保護(hù)機(jī)體健康[3]。

4.3 產(chǎn)生消化酶，促進(jìn)消化吸收，提高采食量和消化率

有些益生菌能夠產(chǎn)生脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶等多種酶類，合成氨基酸、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。除此之外，微生物還能夠通過發(fā)酵對(duì)纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等機(jī)體不能降解的物質(zhì)進(jìn)行利用，產(chǎn)生有利于宿主生長(zhǎng)的短鏈脂肪酸。

4.4 分解有毒有害物質(zhì)

枯草芽孢桿菌等可在大腸中產(chǎn)生氨基酸氧化酶、氨基轉(zhuǎn)移酶及分解硫化物的酶，將一些有害菌產(chǎn)生的吲哚化合物、硫化物氧化成無臭無味無毒物質(zhì)，從而降低血液及排泄物中的有害氣體濃度，減少排放量，改善飼養(yǎng)環(huán)境，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能[21]。

4.5 激活機(jī)體的免疫功能

侵入機(jī)體的病原菌能夠和腸上皮細(xì)胞結(jié)合，誘導(dǎo)組織、巨噬細(xì)胞程序性死亡，誘發(fā)炎癥反應(yīng)。益生菌不僅能夠通過直接頡頏病原菌、抑制病原菌的生長(zhǎng)的途徑來減少炎癥反應(yīng)，間接調(diào)節(jié)免疫功能外；還能直接刺激免疫器官組織的生長(zhǎng)發(fā)育，調(diào)節(jié)特異性和非特異性免疫來發(fā)揮作用。飼喂乳酸桿菌、雙歧桿菌、芽孢桿菌等益生菌后能夠調(diào)整腸道菌群平衡，活化腸黏膜內(nèi)相關(guān)淋巴組織，使SIgA抗體分泌增加，誘導(dǎo)T、B淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，通過淋巴細(xì)胞再循環(huán)激活全身免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[22]。益生菌常被作為一種免疫佐劑應(yīng)用在生產(chǎn)實(shí)踐中，譬如和疫苗聯(lián)合使用可以具有提高免疫保護(hù)率、增加抗體滴度、延長(zhǎng)免疫期的能力。

飼料中常見的益生菌往往通過上述一種或多種途徑來發(fā)揮其益生功能，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能，保持機(jī)體健康生長(zhǎng)。

5 益生菌對(duì)蛋黃膽固醇代謝影響

長(zhǎng)期食用含膽固醇較高的食物可能誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化、脂肪沉積等疾病。在人們追求綠色健康的生活方式前提下，越來越多的人開始注重追求膽固醇含量低的雞蛋；一直以來，也有很多通過益生菌調(diào)控來降低雞蛋里膽固醇含量的報(bào)道。在大多數(shù)動(dòng)物中，膽固醇是通過分解代謝，最后從糞便中排出體外；但是對(duì)于蛋雞而言，絕大多數(shù)都是通過雞蛋排除體外。雞蛋中的膽固醇來源于血清中[23]，益生菌是通過調(diào)控血液中膽固醇含量，進(jìn)而影響雞蛋中膽固醇的含量。

膽固醇在機(jī)體內(nèi)是無法徹底氧化分解的，只能轉(zhuǎn)化為類固醇激素、維生素D3、膽酸等物質(zhì)。有關(guān)益生菌降低蛋黃中膽固醇含量的機(jī)理有很多。其中一條通路就是膽酸途徑。在肝臟內(nèi)由膽固醇合成的初級(jí)膽汁酸，與?；撬帷⒏拾彼峤Y(jié)合生成結(jié)合形式的膽酸和脫氧膽酸，進(jìn)而在小腸末端被重吸收運(yùn)回肝臟。有研究發(fā)現(xiàn)擬桿菌、雙歧桿菌、梭桿菌、梭狀芽孢桿菌、乳酸桿菌和鏈球菌等能夠水解這些結(jié)合形式的膽酸，進(jìn)而干擾膽固醇的肝腸循環(huán)[24]。有研究報(bào)道[25]，有些類型的乳酸菌能夠產(chǎn)生膽鹽水解酶，對(duì)膽鹽進(jìn)行水解，導(dǎo)致糞便中排出的膽酸增多，從而使沉積在脂蛋白中的膽固醇含量減少。

某些固氮菌和啤酒酵母的類固醇營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，可以生成7-脫氫膽固醇氧化酶，能夠?qū)⒛懝檀挤纸獬?-脫氫膽固醇，后者經(jīng)光照途徑可以生成維生素D3，通過膽固醇轉(zhuǎn)化的途徑，減少體內(nèi)膽固醇含量[26]。

另外有研究報(bào)道，腸道微生物發(fā)酵產(chǎn)生的短鏈脂肪酸也可能影響膽固醇代謝。乙酸作為生成膽固醇的前體物質(zhì)，在一定程度上會(huì)增加機(jī)體膽固醇含量；而丙酸則又有降低血脂含量的趨勢(shì)[24，27]。丙酸鹽和乙酸影響機(jī)體膽固醇含量的能力強(qiáng)弱，與微生物種類、組成、發(fā)酵產(chǎn)酸的底物、產(chǎn)生的短鏈脂肪酸比例以及在體內(nèi)的消化吸收速率等因素有關(guān)。

除了上述的加快膽固醇轉(zhuǎn)化排泄的途徑，還可以抑制膽固醇的自身合成來進(jìn)行調(diào)控。在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)，膽固醇是以乙酰輔酶A為底物，經(jīng)過30余步的酶促反應(yīng)最終生成27碳的膽固醇。在合成通路中，HMG-COA是其中的一個(gè)限速酶[28]。斯達(dá)汀（Statin），一種從橘青霉真菌中提取出來的HMG-COA的抑制劑，被認(rèn)為是一種健康安全的降低膽固醇的藥物。Saleh等[29]研究結(jié)果表明，益生菌泡盛曲霉降低膽固醇的機(jī)理可能是產(chǎn)生像斯達(dá)汀一樣的物質(zhì)，產(chǎn)生HMG-COA還原酶抑制劑，從而影響HMG-COA的活性，最終抑制膽固醇的合成。張劍鋒[30]研究指出，在日糧中添加2%益生菌和0.015%低聚木糖的混合物，可以在轉(zhuǎn)錄水平極顯著降低HMGCOA mRNA的表達(dá)量，抑制膽固醇的合成。而僅添加益生菌則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這可能與低聚木糖能選擇性的促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng)，使動(dòng)物腸道中有益菌的數(shù)量占據(jù)優(yōu)勢(shì)，進(jìn)而對(duì)機(jī)體膽固醇代謝有極顯著影響。以上研究表明益生菌是可以通過對(duì)膽固醇合成途徑進(jìn)行調(diào)控，影響宿主的膽固醇合成來調(diào)控膽固醇含量。

6 總結(jié)

關(guān)于益生菌對(duì)蛋品質(zhì)的研究結(jié)果不盡相同，其原因可能受到多方面的影響；一方面與益生菌產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品中活菌數(shù)以及添加量有關(guān)；另一方面也取決于蛋雞的品種、周齡、健康狀況以及飼養(yǎng)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)水平等因素。在正常狀態(tài)下，蛋雞的各種生理機(jī)能都處于較高的水平，可能會(huì)掩蓋益生菌的益生效果，導(dǎo)致其作用效果難以達(dá)到顯著水平，從而表現(xiàn)出對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率影響不顯著。但是在各種應(yīng)激狀態(tài)下，蛋雞的生產(chǎn)性能受到破壞，腸道健康受到影響，益生菌則能利用自己的特性來減輕機(jī)體受到的各種損害，最大程度的發(fā)揮益生效果。因此，在比較益生菌的作用效果時(shí)，應(yīng)綜合考慮各種影響因素，才能得出準(zhǔn)確結(jié)論。隨著對(duì)益生菌研究的不斷深入，相信益生菌一定會(huì)在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中得到更加廣泛地應(yīng)用。