王世清 王全豪

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【實(shí)驗(yàn)研究】

解郁安神顆粒中梔子苷含量測定的比對

王世清1王全豪2

目的高效液相色譜法測定解郁安神顆粒中梔子苷含量的比對試驗(yàn)。方法采用回流法與超聲處理法分別進(jìn)行提取，兩臺高效液相色譜儀同時進(jìn)樣分析。結(jié)果回流與超聲處理兩種提取方法測得的解郁安神顆粒中梔子苷含量基本相同。但是，兩臺液相色譜儀測定的結(jié)果之間有較大偏差。結(jié)論超聲處理提取法避免了回流法燒瓶形成固體粘附物對梔子苷含量的影響，可以使用超聲處理法提取解郁安神顆粒中的梔子苷。

解郁安神顆粒；梔子苷；含量測定

2016年7月河南省食品藥品檢驗(yàn)所在全省轄區(qū)范圍內(nèi)組織中藥制藥廠、中藥飲片廠、各地市藥檢所進(jìn)行了一年一度的實(shí)驗(yàn)室比對試驗(yàn)，采用《中國藥典》2015年版一部解郁安神顆粒含量測定[1]的方法，以干燥品計(jì)算每克中梔子苷的含量。試驗(yàn)過程中除使用規(guī)定的回流法外，還采用超聲法提取，兩臺液相色譜儀同時測定，結(jié)果兩種提取方法所得結(jié)果基本相同?，F(xiàn)匯報如下供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器安捷倫 1260全自動高效液相色譜儀(美國)兩臺，分別是2008年與2015年安裝；色譜柱：Weters(Symmetry C18柱，5μm，柱長：250 mm，內(nèi)徑：4.6mm )、天津蘭博(Kromasil C18柱，5μm，柱長：250 mm，內(nèi)徑：4.6mm)；KS-500EII超聲波清洗機(jī)(寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥梔子苷參考物(規(guī)格：20mg，批號：151204，含量99.79%，成都普菲德生物技術(shù)有限公司)一支；解郁安神顆粒(規(guī)格：5g，批號：Z2016132-A、Z2016132-B，河南省食品藥品檢驗(yàn)所)共4袋，A、B樣各2袋；甲醇為分析純，液相流動相使用的乙腈為色譜純、水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件流動相：乙腈-水(15：85)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：236 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 μl

2.2 對照品溶液的制備精密稱取梔子苷參考物10.06 mg、9.01 mg，分別置100 ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取15 ml，置 50 ml量瓶中，各加甲醇至刻度,搖勻,即得。

2.3 供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取1 g(剩余樣品按照《中國藥典》2015年版四部水分測定法之烘干法[2]測定水分)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 20 ml，稱定重量，加熱回流40分鐘(回流速度約30滴/min)(另取1 g，不回流而是超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)40分鐘)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，分別注入兩臺液相色譜儀，同時測定[3～5]，即得。從表1可以看出0.10038874mg/ml濃度的對照品計(jì)算出來的結(jié)果明顯偏低，可能該濃度已超過該臺液相的線性范圍。從兩表結(jié)果可以看出超聲提取與回流的結(jié)果基本一致，可以使用超聲處理法提取解郁安神顆粒中的梔子苷，從而相互佐證。從表1和表2的含量可以看出，兩個液相的數(shù)據(jù)偏差較大?？梢匀膳_液相測得結(jié)果的平均值報告。結(jié)果見表1、表2。

3 討論

我們在比對試驗(yàn)前，先從市場購買解郁安神顆粒進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)回流后燒瓶壁上粘附一圈黃白色固體(蔗糖及處方成分)，超聲使之脫落、溶解，結(jié)果溶解不完全，致使平行試驗(yàn)的兩份之間誤差較大。對此，我們在第二次預(yù)試驗(yàn)的過程中，對粘附物先用粗玻璃棒慢慢研細(xì)，取出前觸碰內(nèi)壁，使棒上液體流下，再用甲醇3～5滴沖洗玻棒，洗液入瓶，然后超聲3～5分鐘，最后調(diào)節(jié)重量(少了滴加甲醇，過了放置揮發(fā))。

為了克服瓶壁固體粘附物對梔子苷的包埋，考慮到解郁安神顆粒本身為提取物，第二次預(yù)試驗(yàn)時增加了超聲處理法提取，結(jié)果理想，隨即決定比對試驗(yàn)增加超聲處理法提取樣品中的梔子苷。

比對試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)樣品的峰面積特別大，隨即將高濃度的對照品溶液裝機(jī)進(jìn)樣。從兩表峰面積可以看出，不同的色譜柱重復(fù)性不同，國產(chǎn)色譜柱雖然使用進(jìn)口填料，但重復(fù)性明顯不如原裝進(jìn)口色譜柱的好。另外，重復(fù)性的好壞也與液相的六通閥的清潔程度有關(guān)，可以在卸下色譜柱的情況下，用2.5 ml.min-1流速的甲醇以連續(xù)進(jìn)樣的方式?jīng)_洗六通閥，進(jìn)針數(shù)為6的倍數(shù)。

表1 解郁安神顆粒中梔子苷的含量測定(Weters柱、新安捷倫1260液相)

注：樣品A的水分為2.70%；樣品B的水分為2.64%

表2 解郁安神顆粒中梔子苷的含量測定(天津蘭博柱、老安捷倫1260液相)

[1] 國家藥典委員會.中國藥典一部[S].北京：中國醫(yī)藥出版社，2015:1660-1661.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典四部[S].北京：中國醫(yī)藥出版社，2015:59-61，103-104.

[3] 王世清.不同方法測定六味地黃丸(濃縮丸)中熊果酸含量的比較[J].中醫(yī)學(xué)報，2011,26(10):1215-1216.

[4] 王世清.冬凌草片中冬凌草甲素的含量測定[J].河南中醫(yī)，2013,33(8):1350-1351.

[5] 王世清.雙黃連口服液含量測定比對試驗(yàn)中的問題分析[J].中國藥業(yè)，2008，17(16):44-45.

1.河南省濮陽市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心(濮陽 457000)；2.河南省濮陽市惠成電子材料有限公司(濮陽 457000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.21.022

1003-8914(2016)-21-3113-02

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2016-07-28)