王永博，錢 凈，陳慧琳

(1.昆明醫(yī)科大學臨床檢驗診斷學專業(yè)碩士研究生，昆明 650011；2.昆明醫(yī)科大學附屬甘美醫(yī)院檢驗科，昆明 650011；3.云南省昆明市盤龍區(qū)婦幼保健中心 650011)

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·論 著·

不同標本類型間髓過氧化物酶水平的檢測分析*

王永博1，錢 凈2△，陳慧琳3

(1.昆明醫(yī)科大學臨床檢驗診斷學專業(yè)碩士研究生，昆明 650011；2.昆明醫(yī)科大學附屬甘美醫(yī)院檢驗科，昆明 650011；3.云南省昆明市盤龍區(qū)婦幼保健中心 650011)

目的 探討不同標本類型間髓過氧化物酶(MPO)檢測結果的差異性、抗凝劑的選擇及檢測結果的比對。方法 同時采集165例健康體檢人群含乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)、肝素鈉兩種抗凝劑的血漿標本及不含抗凝劑的普通生化管的血清標本，分別檢測3種標本類型中MPO水平，并對各組檢測結果進行統計學分析。結果 同一例體檢者不同抗凝劑的血漿標本間及與不含抗凝劑的血清標本間MPO檢測結果差異有統計學意義(P<0.05)。結論 不同標本類型對血液標本中MPO水平檢測結果差異較大，建議各個實驗室檢測時根據不同抗凝劑制訂相應的參考區(qū)間；由于EDTA-K2抗凝血漿不受體外白細胞中MPO釋放的影響，推薦采用EDTA-K2抗凝血作為檢測MPO水平的首選。

髓過氧化物酶； 抗凝劑； 標本類型； 參考區(qū)間

冠心病已成為現代社會病死率最高的疾病之一，而心肌梗死又是冠心病人群猝死率最高的病因[1]。髓過氧化物酶(MPO)作為一種重要的含鐵溶酶體，存在于髓系細胞(主要是中性粒細胞和單核細胞)的嗜苯胺藍顆粒中，是髓細胞的特異性標志，是過氧化物酶家族中重要的成員。當機體出現炎性反應時，MPO迅速從中性粒細胞中釋放到循環(huán)系統中，參與機體的炎性反應[2]。有研究顯示，在確診的冠心病患者粥樣斑塊中，有大量具有MPO活性的中性粒細胞、巨噬細胞等浸潤，提示MPO對粥樣斑塊的形成及演變具有重要的作用[3]。文獻[4-5]研究表明，MPO通過促進脂質等蛋白質的過氧化反應來促進炎性反應，參與動脈粥樣硬化過程的發(fā)生、發(fā)展。但目前國內關于MPO的實驗室檢測尚未推廣，尤其是MPO檢測時不同標本類型的選擇更是沒有統一標準，本文就不同標本類型間MPO的檢測差異及抗凝劑的選擇進行探討，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年3～4月在昆明醫(yī)科大學附屬甘美醫(yī)院健康體檢者142例，其中男72例、女70例，年齡21～87歲，平均56歲。將142例研究對象按年齡進行分組，分為小于30歲、30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲、60～<70歲、≥70歲共6組。研究對象納入標準：(1)無任何影響檢測結果的生理指征;(2)未服用藥物或進行飲食治療;(3)發(fā)育、精神正常，無心血管及臟器的器質性疾病;(4)3個月內無輸血和手術史;(5)女性不在月經期、妊娠期或哺乳期;(6)無酗酒史。排除標準:(1)急、慢性感染性疾病;(2)肝、腎功能不全;(3)骨髓移植術;(4)風濕性瓣膜性心臟病;(5)嚴重創(chuàng)傷或腫瘤;(6)免疫性疾病及其他影響炎癥指標的疾病。

1.2 儀器與試劑 采用Olympus AU5421全自動生化分析儀檢測標本中MPO水平，試劑由北京九強生物技術股份有限公司提供的膠乳增強免疫比濁法檢測MPO試劑盒。校準品批號15-0424，質控品批號15-0424，試劑批號150424，均由廠家提供。

1.3 方法

1.3.1 質量控制 首先對檢測系統進行方法學驗證，性能驗證通過后對給定的校準品校準，然后對提供的配套質控品進行測定，保證配套質控品的測量結果必須在靶值范圍內，以保證后續(xù)實驗結果的可靠性。

1.3.2 標本的收集及測量 將符合入選和排除標準的健康體檢者血清標本采集后2 h內，室溫下4 000 r/min，離心10 min，分離出血清及血漿標本，將血漿分為乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿和肝素鋰抗凝血漿，分裝EP管并做好標記，置于-80 ℃冰箱保存以備檢測。待標本收集完成后，集中檢測，來評價不同標本類型間MPO水平檢測結果的差異性。

1.4 統計學處理 采用SPSS16.0統計軟件進行數據處理。數據分布的正態(tài)性檢驗采用Kolmogorov-Smirnow檢驗，組間比較用非參數秩和檢驗，其中不同年齡組MPO(多組間)比較采用Kruskal-WzllisH檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各年齡組中3種標本類型的MPO檢測結果 對3種標本類型的標本MPO檢測值進行正態(tài)性檢驗(Kolmogorov-Smirnow檢驗)，EDTA-K2抗凝血漿、血清與肝素鋰抗凝血漿正態(tài)性檢驗結果Z分別為2.954、1.328、1.364(P<0.05)，數據均為偏態(tài)分布資料。各年齡組中3種標本類型檢測的MPO水平結果差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 不同性別間3種標本類型的MPO水平檢測結果 不同性別間3種標本的MPO水平比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 各年齡組中3種標本類型的MPO檢測結果(ng/mL)

表2 3種不同標本類型的不同性別的MPO檢測結果(ng/mL)

3 討 論

MPO是由活化的中性粒細胞、巨噬細胞、單核細胞等在機體炎癥過程中分泌到細胞外液的一種含鐵血紅素蛋白酶。而炎癥在冠心病等心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起到了十分重要的作用。Anatoliotakis等[6]研究表明，MPO作為炎性反應的標志物可以促進基質蛋白聚糖的降解，并最終促使動脈粥樣硬化斑塊失去穩(wěn)定。也有學者發(fā)現在急性心肌梗死患者外周血中MPO水平也明顯升高，提示有助于早期診斷急性心肌梗死[7]。還有研究發(fā)現，在急性心肌梗死患者胸痛癥狀發(fā)作后2 h內MPO就已明顯升高，并可以被實驗室檢測到，而被臨床廣泛應用于判斷心肌細胞受損的cTNT需要在心肌梗死發(fā)生后3～6 h才升高[8-9]。MPO作為一項炎癥指標，目前已被認為是穩(wěn)定性冠心病以及急性心肌損傷最有潛力的心肌生物標志物之一，是未來發(fā)生心肌梗死的獨立影響因素[10]。

鑒于MPO的檢測對臨床心血管疾病的重要意義，在新研制試劑的試驗方法時，實驗室能夠真實地反映患者血液中MPO濃度水平顯得尤為重要。本實驗是在國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)課題支持下，針對北京九強生物技術股份有限公司研制的膠乳增強免疫比濁法檢測血液中MPO水平的試劑盒展開研究的。選擇不同種類標本類型進行研究，以期為臨床選擇何種標本類型提供實驗室依據。本研究結果顯示，3種不同類型標本MPO水平差異有統計學意義(P<0.05)。各年齡組間3種標本類型的MPO水平差異無統計學意義(P>0.05)，此結論與Sawicki等[11]研究發(fā)現一致。且含抗凝劑的兩組標本MPO水平明顯低于不含抗凝劑組，考慮可能原因有(1)不含抗凝劑的普通生化管組血液凝固時，存在于多形核中性粒細胞中的MPO釋放到血清中；(2)白細胞、血小板等聚集時釋放出部分MPO到血清中；造成血清檢測結果明顯高于血漿檢測結果。這與Shih等[12]的研究一致；而兩抗凝劑組結果也存在差異，肝素抗凝劑組MPO水平明顯高于EDTA-K2抗凝組，考慮可能為(1)過量的肝素抗凝劑會引起白細胞聚集，導致中性粒細胞中MPO的釋放；(2)肝素刺激白細胞脫顆粒和血液凝固過程引起；有研究顯示，肝素抗凝血漿保存在-20 ℃以下相對穩(wěn)定，但在室溫下保存2 h將會導致MPO水平增加4倍[13]。另有研究表明，肝素能夠依賴性地降低多形核白細胞的百分比和抑制他們的呼吸(以減少MPO從胞內的嗜苯胺藍顆粒中釋放)[14]。Scheffer等[15]研究顯示，MPO水平在EDTA-K2抗凝管中，室溫下在上機檢測前2 h不隨時間而改變。結合以上研究觀點及本研究結果，考慮由于EDTA-K2抗凝血漿不受體外白細胞MPO釋放的影響，可以準確反映循環(huán)血液中MPO水平，建議采用EDTA-K2抗凝血漿來檢測MPO水平。

本研究存在的問題：(1)未對標本進行及時檢測，而是保存后集中檢測，可能會對實驗結果造成一定的影響；(2)研究對象均是空腹血清標本，欲知與非空腹血清標本之間檢測是否有差別，仍需進一步研究證明；(3)本研究標本量不夠大，尚需擴大標本量進一步研究證明。同時實驗室必須根據自身實際情況選擇合適的標本類型并建立適合的參考區(qū)間，以便更好地服務臨床、更好地為患者提供有價值的檢測結果。

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Detection and analysis of myeloperoxidase level in different types of samples*

WANGYongbo1，QIANJing2△,CHENHuilin3

(1.MasterPostgraduateStudentofClinicalLaboratoryDiagnosis,KunmingMedicalUniversity,Kunming,Yunnan650011,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedGanmeiHospital,KunmingMedicalUniversity,Kunming,Yunnan650011,China;3.CenterofMaternalandChild>HealthCareofPanlongDistrict,Kunming,Yunnan650011,China)

Objective To explore the difference of myeloperoxidase(MPO)detection results among different types of samples,anticoagulant selection and comparison of detection results.Methods The plasma samples containing EDTA-K2or heparin and serum samples of common biochemical tube without containing anticoagulant were collected from 165 persons undergoing healthy physical examination.The MPO level in 3 kinds of sample was detected.Then the detection results in each group were performed the statistical analysis.Results The MPO detection results had statistical difference between plasma samples with different anticoagulants and between plasma samples with different anticoagulants and serum sample without anticoagulant in the same person(P<0.05).Conclusion Different samples types have larger difference in MPO detection results.It is suggested that each laboratory should formulate the corresponding reference intervals according to different anticoagulants; because EDTA-K2anticoagulation plasma is not affected by the release of MPO from in vitro leukocytes,it is recommended to adopt EDTA-K2anticoagulation blood as the first selected of MPO level detection.

myeloperoxidase; anticoagulant; types of samples; reference intervals

國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)資助項目(2011AA02A111)。

王永博，男，技師，主要從事臨床生物化學檢驗研究?！?/p>

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.003

A

1673-4130(2016)23-3246-03

2016-03-06

2016-05-24)