劉紅 丁小強(qiáng) 王華 陳洪宇 俞小芳

低氧預(yù)處理BMSCs對大鼠AKI修復(fù)能力的影響及其機(jī)制研究

劉紅 丁小強(qiáng) 王華 陳洪宇 俞小芳

目的 探討低氧預(yù)處理大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）移植對大鼠缺血-再灌注（I/R）急性腎損傷（AKI）的修復(fù)作用及其可能機(jī)制。方法 采用200μmol/L氯化鈷（CoCl2）低氧預(yù)處理大鼠BMSCs。夾閉雙側(cè)腎蒂40min建立大鼠I/R AKI模型，按隨機(jī)數(shù)字表法分為頸動脈注射細(xì)胞培養(yǎng)基組（control組）、常氧培養(yǎng)BMSCs移植組（normoxia+BMSCs組）及低氧預(yù)處理BMSCs移植組（Co+BMSCs組），每組24只。BMSCs移植再灌注后24、48、72h及1周時每組各處死大鼠6只，采用開胸心腔內(nèi)采血方法采集血樣檢測血清尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平，取腎臟組織觀察形態(tài)學(xué)變化和腎小管間質(zhì)損傷程度并評分；采用ELISA法和RT-PCR法檢測再灌注后24h大鼠腎臟組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維母細(xì)胞生長因子（bFGF）、肝細(xì)胞生長因子（HGF）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）的表達(dá)水平。 結(jié)果 (1)再灌注后24h，Co+BMSCs組、normoxia+BMSCs組大鼠BUN、Scr水平均低于control組（均P＜0.05），且Co+BMSCs組低于normoxia+BMSCs組（P＜0.05）；腎小管間質(zhì)損傷程度以control組最重，normoxia+BMSCs組次之，Co+BMSCs組最輕；再灌注后48h，Co+BMSCs組大鼠腎小管上皮細(xì)胞修復(fù)最明顯，normoxia+BMSCs組次之；再灌注后1周，Co+BMSCs組大鼠BUN、Scr水平仍低于normoxia+BMSCs組和control組（均P＜0.05），normoxia+BMSCs組和control組出現(xiàn)了明顯的腎小管上皮細(xì)胞萎縮及間質(zhì)纖維化等慢性改變，而Co+BMSCs組無此改變。（2）再灌注后24h，normoxia+BMSCs組大鼠 bFGF表達(dá)水平高于 control組（P＜0.05），而 Co+BMSCs組的 bFGF表達(dá)水平明顯高于normoxia+BMSCs組（P＜0.05）；normoxia+BMSCs組大鼠HGF表達(dá)水平高于control組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），而Co+BMSCs組的bFGF表達(dá)水平均高于normoxia+BMSCs組和control組（均P＜0.05）；3組大鼠VEGF和IGF-1表達(dá)水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論 與常氧培養(yǎng)BMSCs移植相比，低氧預(yù)處理后的BMSCs移植能更有效改善I/R大鼠腎功能、修復(fù)腎臟組織損傷，其作用機(jī)制可能與低氧預(yù)處理能更有效地促進(jìn)BMSCs旁分泌HGF和bFGF等有關(guān)。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 低氧 急性腎損傷 旁分泌

急性腎損傷（acute kidney injury，AKI）是臨床常見的危重癥，發(fā)病率和病死率非常高。以血液凈化為主的治療措施雖使AKI的療效有了很大改進(jìn)，但臨床上尚未發(fā)現(xiàn)能有效促進(jìn)腎小管損傷修復(fù)的治療方法。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs）不僅具有干細(xì)胞多向分化潛能、支持造血、調(diào)節(jié)免疫等功能，還具有低免疫源性、易于獲取、來源豐富等特點，被認(rèn)為是最有希望能用于AKI臨床治療的首選干細(xì)胞[1]。但從動物實驗和早期的臨床試驗結(jié)果來看，BMSCs對腎臟損傷修復(fù)作用不盡如人意。目前體外擴(kuò)增BMSCs大多在常氧條件下進(jìn)行，而生理狀況下BMSCs在骨髓內(nèi)的生長環(huán)境是低氧的，體外常氧培養(yǎng)可能導(dǎo)致BMSCs的遷移、分泌功能下降。本研究采用化學(xué)低氧劑氯化鈷（CoCl2）模擬低氧環(huán)境，研究低氧預(yù)處理后BMSCs移植對大鼠腎臟缺血-再灌注（ischemia repeffusion，I/R）AKI修復(fù)作用的影響，并探討低氧預(yù)處理后BMSCs旁分泌相關(guān)因子血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維母細(xì)胞生長因子（bFGF）、肝細(xì)胞生長因子（HGF）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）的表達(dá)在其中的可能作用，從而為優(yōu)化BMSCs移植治療AKI提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料 100～130 g（細(xì)胞移植供體）及350～400 g（細(xì)胞移植受體）清潔級雄性SD大鼠（復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院實驗動物中心），LG-DMEM培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶、胎牛血清（美國GIBCO公司），CoCl2、VEGF檢測試劑盒、bFGF檢測試劑盒、HGF檢測試劑盒、IGF-1檢測試劑盒（武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司），Power SYBRR Green PCR Master Mix（日本TAKARA公司），引物合成（上海生物工程有限公司）。Transwell板（美國Corning公司），二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱（美國Thermo Forma公司），倒置相差顯微鏡（美國Olympus公司），超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備廠），流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coμlter公司）。

1.2 方法

1.2.1 BMSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定 取100～130 g雄性SD大鼠為細(xì)胞供體，采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)BMSCs，取P3代細(xì)胞采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定其表面標(biāo)志物，具體操作參考文獻(xiàn)[2]。

1.2.2 低氧預(yù)處理BMSCs 采用化學(xué)低氧劑CoCl2（濃度200 μmol/L）預(yù)處理大鼠BMSCs（培養(yǎng)24h），具體操作參考文獻(xiàn)[2]。

1.2.3 建立I/R AKI模型 4%戊巴比妥鈉（40mg/kg體重）腹腔注射麻醉大鼠，暴露腎臟，分離雙側(cè)腎蒂，無創(chuàng)傷動脈夾持續(xù)夾閉雙側(cè)腎蒂40min，夾閉5min后可觀察到腎臟明顯瘀血呈紫色，40min后恢復(fù)再灌注，可看到腎臟很快由紫黑色逐漸轉(zhuǎn)為鮮紅色，表明再灌注成功。

1.2.4 制備細(xì)胞懸液及細(xì)胞移植 將P3代細(xì)胞消化傳代后隨機(jī)分成常氧培養(yǎng)組（normoxia組）和低氧預(yù)處理組（Co組），消化洗滌后用不含F(xiàn)BS的LG-DMEM重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個/ml。大鼠再灌注成功后即刻再次麻醉，結(jié)扎頸動脈遠(yuǎn)心端，向頸動脈注入細(xì)胞懸液，注射完畢后結(jié)扎近心端。

1.2.5 動物實驗分組 將大鼠I/R AKI模型采用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，分別為頸動脈注射細(xì)胞培養(yǎng)基組（control組）、常氧培養(yǎng)BMSCs移植組（normoxia+BMSCs組）及低氧預(yù)處理BMSCs移植組（Co+BMSCs組），每組24只。各組大鼠移植成功后24、48、72h和1周時分別處死6只，采用開胸心腔內(nèi)采血方法采集血樣5ml，分離血清，應(yīng)用尿素酶-GLDH法檢測血清尿素氮（BUN）濃度，應(yīng)用酶標(biāo)法檢測血清肌酐（Scr）濃度，并取腎臟組織制備石蠟切片后行HE染色。

1.2.6 腎臟組織形態(tài)學(xué)觀察 采用盲法原則由病理科醫(yī)師在光鏡下觀察切片中腎臟組織的形態(tài)學(xué)變化，并進(jìn)行腎小管間質(zhì)損傷程度分級（采用Jablonski評分法）。每例切片200倍光鏡下隨機(jī)選取皮髓交界處10個不重疊視野，正常計0分，受損腎小管間質(zhì)＜25%計1分，25%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分，以此作半定量分析計算其平均值，評分值越高代表損傷程度越重。

1.2.7 旁分泌相關(guān)因子及腎功能指標(biāo)檢測 用雙抗體夾心ELISA方法檢測移植24h后I/R大鼠腎臟組織中VEGF、bFGF、HGF及IGF-1水平，操作方法參照試劑盒說明書。

1.2.8 RT-PCR檢測旁分泌相關(guān)因子mRNA表達(dá) 按TAKARA試劑盒說明書用Trizol試劑提取移植24h后I/R大鼠腎臟組織總RNA。將總RNA用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。取1 μl進(jìn)行20μl體系的RTPCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s；95℃變性5s，60℃復(fù)制20s，72℃延伸30s，共40個循環(huán)。在PCR循環(huán)中，當(dāng)熒光強(qiáng)度大于儀器軟件計算出的循環(huán)閾（Ct）值時，樣本被認(rèn)為是陽性。利用檢測到的Ct值，以βactin mRNA為內(nèi)參照，計算目的基因mRNA相對表達(dá)量。所有樣本重復(fù)測定3次。各基因上、下游引物序列見表1。

表1 各基因引物序列

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件；計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 3組I/R大鼠各時點BUN、Scr水平比較 見表2。

表2 3組I/R大鼠各時點BUN、Scr水平比較

由表2可見，3組I/R大鼠BUN和Scr水平均在24h時達(dá)到峰值。在24h及1周時，3組I/R大鼠BUN、Scr水平比較有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05）；兩兩比較，24h時，Co+BMSCs組、normoxia+BMSCs組大鼠BUN、Scr水平均低于control組（均P＜0.05），且Co+BMSCs組大鼠BUN、Scr水平均低于normoxia+BMSCs組（P＜ 0.05）；1周時，Co+BMSCs組大鼠BUN、Scr水平仍均低于normoxia+BMSCs組和control組（均P＜0.05），而normoxia+BMSCs組與control組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。3組I/R大鼠48、72h時的BUN、Scr水平比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）。

2.2 3組I/R大鼠各時點腎臟組織形態(tài)學(xué)比較 見圖1。

圖1 3組I/R大鼠各時點腎臟組織形態(tài)學(xué)比較（HE染色，×200）

由圖1可見，再灌注后24h，腎小管上皮細(xì)胞壞死、脫落、大量管型形成，以control組損傷最重，normoxia+ BMSCs組次之，Co+BMSCs組損傷最輕；再灌注48h后上皮細(xì)胞增生修復(fù)，其中Co+BMSCs組修復(fù)最明顯，normoxia+BMSCs組次之，control組修復(fù)最差；再灌注1周后control組和normixa+BMSCs組出現(xiàn)不同程度的慢性化改變，如腎小管上皮細(xì)胞萎縮、管腔擴(kuò)張、間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤等，而Co+BMSCs組無明顯上述慢性化改變。

2.3 3組I/R大鼠各時點腎小管間質(zhì)損傷程度評分比較 見表3。

表3 3組I/R大鼠各時點腎小管間質(zhì)損傷程度評分比較（分）

由表3可見，再灌注后24h時，control組大鼠腎小管間質(zhì)損傷程度評分高于normixa+BMSCs組及Co+BMSCs組（均P＜0.05），而Co+BMSCs組大鼠腎小管間質(zhì)損傷程度評分低于normixa+BMSCs組（P＜0.05）；隨著時間的延長，各組大鼠腎小管間質(zhì)損傷程度逐漸減輕，在48、72h及1周時，腎小管間質(zhì)損傷程度評分仍以control組最高（均P＜0.05），Co+BMSCs組最低（均P＜0.05）。

2.4 3組 I/R大鼠再灌注后 24hVEGF、bFGF、HGF、IGF-1蛋白、mRNA表達(dá)水平比較 見表4。

表4 3組I/R大鼠再灌注后24hVEGF、bFGF、HGF、IGF-1蛋白、mRNA表達(dá)水平比較

由表4可見，再灌注后24h，Co+BMSCs組I/R大鼠bFGF和HGF蛋白、mRNA表達(dá)水平均高于normixa+ BMSCs組和control組（均P＜0.05），normixa+BMSCs組I/R大鼠bFGF蛋白、mRNA表達(dá)水平均高于control組（均P＜0.05）；3組I/R大鼠VEGF和IGF-1蛋白、mRNA表達(dá)水平比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）。

3 討論

I/R是AKI常見病因，已有多項研究表明，在缺血性AKI動物模型中直接輸注BMSCs可以改善腎功能，促進(jìn)腎臟修復(fù)。Herrera等[3]發(fā)現(xiàn)經(jīng)尾靜脈注射BMSCs可以促進(jìn)AKI大鼠的腎功能恢復(fù)，隨后Semedo等[4]動物實驗亦發(fā)現(xiàn)輸注BMSCs可以保護(hù)急性缺血性腎損傷，減少腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤，加速腎小管上皮細(xì)胞增生。但也有研究表明，單純的BMSCs在缺血微環(huán)境中存活和分化能力十分有限，da Silva等[5]研究發(fā)現(xiàn)直接輸注BMSCs治療AKI時，由于到達(dá)受損區(qū)域的細(xì)胞數(shù)量有限、細(xì)胞活力下降，導(dǎo)致治療效果甚微；Brunswig-Spickenheier等[6]研究表明BMSCs移植治療不能改善豬的I/ R損傷。因此，常規(guī)的BMSCs移植對AKI的治療作用仍然存在質(zhì)疑。

事實上，由于腎臟發(fā)生I/R后受損區(qū)域內(nèi)存在嚴(yán)重的缺氧、劇烈的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，BMSCs對移植區(qū)域內(nèi)的這一微環(huán)境變化非常敏感，極易發(fā)生細(xì)胞死亡從而直接影響B(tài)MSCs移植的治療效果。低氧預(yù)處理是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)有力的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，通過預(yù)先短暫的低氧刺激啟動機(jī)體對隨后長時間缺氧損傷的保護(hù)反應(yīng)。目前已有研究證實低氧預(yù)處理BMSCs移植可加速促進(jìn)大鼠心肌梗死后心功能的恢復(fù)[7]。

本研究結(jié)果表明Co+BMSCs組I/R大鼠相較于normixa+BMSCs組，腎功能明顯改善，腎小管上皮細(xì)胞及間質(zhì)損傷明顯減輕，損傷腎臟明顯修復(fù)，再灌注后24h時改善作用最為明顯，且在移植后1周時Co+BMSCs組I/R大鼠腎臟亦未出現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞萎縮等慢性化改變，說明與常氧培養(yǎng)BMSCs相比，低氧預(yù)處理BMSCs移植能夠明顯增強(qiáng)對急性損傷腎臟的保護(hù)作用。

目前關(guān)于移植BMSCs腎臟保護(hù)作用的機(jī)制尚未明確，有研究認(rèn)為BMSCs可直接轉(zhuǎn)分化為腎小管上皮細(xì)胞參與損傷修復(fù)[3]，但目前這一研究結(jié)果仍存在較大爭議；更多的研究認(rèn)為BMSCs到達(dá)受損區(qū)域后通過迅速旁分泌一系列細(xì)胞因子和生長因子減輕缺血區(qū)域內(nèi)腎小管上皮細(xì)胞凋亡、促進(jìn)其再生，即BMSCs的旁分泌作用[8]。BMSCs釋放的最常見的旁分泌相關(guān)細(xì)胞因子和生長因子包括HGF、VEGF、bFGF、IGF-1、基質(zhì)源因子-1 （SDF-1）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、IL-6、血管生成素-1（Ang-1）及血小板起源的生長因子（PDGF）和粒細(xì)胞集落刺激因子（GCSF）等[9]。目前多數(shù)研究認(rèn)為，在AKI腎小管修復(fù)過程中，移植的BMSCs在局部炎癥細(xì)胞和因子的刺激下分泌上述細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子通過旁分泌作用的方式下調(diào)損傷腎臟局部CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等多種促炎細(xì)胞數(shù)量，而上調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等抗炎細(xì)胞數(shù)量，并降低局部促炎因子表達(dá)，進(jìn)而抑制AKI相關(guān)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)腎功能恢復(fù)[10]。而在AKI病程早期，此時BMSCs尚不可能分化為腎小管上皮細(xì)胞，旁分泌功能被認(rèn)為是其早期腎臟保護(hù)作用的主要機(jī)制。Togel等[11]研究發(fā)現(xiàn)BMSCs移植治療腎臟I/R后24h時，受損腎臟組織中高表達(dá)一些抗炎遞質(zhì)和腎臟保護(hù)因子如IL-10、bFGF、TGF和IGF-1，從而證實旁分泌作用在急性缺血性腎損傷修復(fù)中起到主要作用。在眾多細(xì)胞因子中，bFGF、HGF具有促使新生血管重建、促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡等作用[11]，VEGF是重要的促血管生成因子，可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，延緩細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)[12]，IGF-1能夠促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，加速細(xì)胞分化、增殖，提高細(xì)胞成熟速度[13]。

本研究檢測了再灌注后24h I/R大鼠腎臟組織中VEGF、bFGF、HGF和IGF-1的表達(dá)水平，結(jié)果顯示低氧預(yù)處理BMSCs可明顯促進(jìn)bFGF和HGF的表達(dá)，從而增強(qiáng)BMSCs旁分泌作用，促進(jìn)損傷腎臟組織修復(fù)。但本研究中Co+BMSCs組I/R大鼠相較于normixa+BMSCs組VEGF和IGF-1的表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)差異，考慮化學(xué)低氧預(yù)處理的干預(yù)可能未達(dá)到兩者的有效低氧濃度，其機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示低氧預(yù)處理BMSCs移植能夠更好地減輕I/R大鼠腎損傷，促進(jìn)損傷腎臟修復(fù)，其作用機(jī)制可能與低氧預(yù)處理促進(jìn)BMSCs旁分泌相關(guān)因子bFGF和HGF的表達(dá)有關(guān)。低氧預(yù)處理BMSCs移植也許是一種有前景的AKI細(xì)胞治療方法。

[1] Bianco P,Riminueei M,Gronthes S,et al.Bone marrow stromal stem cells：nature,biology,and potential applications[J].Stem Cells,200l,19(3)：180-192.

[2] 劉紅,俞小芳,丁小強(qiáng),等.低氧預(yù)處理對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移能力的影響[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2012,92(10)：709-711.

[3] Herrera M B,Bussolati B,Bruno S,et al.Mesenchymal stem cells contribute to the renalrepair of acute tubular epithelial injury[J].Int J MolMed,2004,14(6)：1035-1041.

[4] Semedo P,Wang P M,Andreucci T H,et al.Mesenchymal stem cells ameliorate tissue damages triggered by renal ischemia and reperfusion injury[J].Transplant Proc,2007,39(2)：421-423.

[5] da Silva LB,Palma P V,Cury P M,et al.Evaluation ofstem celladministration in a modelof kidney ischemia-reperfusion injury[J].Int Immunopharmacol,2007,7(13)：1609-1616.

[6] Brunswig-Spickenheier B,Boche J,Westenfelder C,et al.Limited immune-modulating activity of porcine mesenchymal stromal cells abolishes their protective efficacy in acute kidney injury[J]. Stem Cells Dev,2010,19(5)：719-729.

[7] Volkmer E,Kallukalam B C,Maertz J,et al.Hypoxic preconditioning of hMSC overcomes hypoxia-induced inhibition of osteogenic differentiation[J].Tissue Eng Part A,2010,16(1)：153-164.

[8] Lindoso R S,Araujo D S,Adao-Novaes J,et al.Paracrine interaction between bone marrow-derived stem cells and rena epithelial cells[J].CellPhysiolBiochem,2011,28(2)：267-278.

[9] Samper E,Diez-Juan A,Montero J A,et al.Cardiac Cell Therapy：Boosting Mesenchymal Stem Cells Effects[J].Stem Cell Rev, 2013,9(3)：266-280.

[10] Bassi E J,de Almeida D C,Moraes-Vieira P M,et al.Exploring the role of soluble factors associated with immune regulatory properties of mesenchymal stem cells[J].Stem Cell Rev,2012,8 (2)：329-342.

[11] Togel F,Weiss K,Yang Y,et al.Vasculotropic,paracrine actions ofinfused mesenchymalstem cells are important to the recovery from acute kidney injury[J].Am J PhysiolRenalPhysiol,2007,292 (5)：1626-1635.

[12] Zhang Q,Chang Q,Cox R A,et al.Hyperbaric oxygen attenuates apoptosis and decreases inflammation in an ischemic wound mode[J].J Invest Dermatol,2008,128(8)：2102-2112.

[13] Togel F,Cohen A,Zhang P,et al.Autologous and allogeneic marrow stromal cells are safe and effective for the treatment of acute kidney injury[J].Stem Cells Dev,2009,18(3)：475-485.

Effects of hypoxia-preconditioning of bone marrow derived mesenchymal stem cells on rat acute kidney injury

LIU Hong,DING Xiaoqiang,WANG Hua,et al.Department of Nephrology，Hangzhou Hospital of TCM，Hangzhou310007，China

【 Abstract】 Objective To investigate the effects and mechanism of hypoxia-preconditioning of bone marrow derived mesenchymal stem cells(BMSCs)on acute ischemia/reperfusion(I/R)injury of rat kidney.Methods Hypoxia-preconditioning was performed on BMSCs by treatment with 200μmol/L CoCl2for 24h.I/R model was induced by cross-clasped for 40min followed by reperfusion in 72 SD rats and the animals were divided into 3 groups with 24 in each group.Rats in control group received carotid injection of cell culture medium,rats in normoxic BMSCs group received carotid injection of normoxia-cultured BMSCs and rats in hypoxic BMSCs group received carotid injection of hypoxia-preconditioned BMSCs.The renal function was estimated by measurement of serum creatinine(Scr)and blood urea nitrogen(BUN),and histological changes were observed by hematoxylin and eosin(HE)staining at 24h,48h,72h and 1wk after injection.The protein and mRNA expressions of VEGF,bFGF,HGF and IGF-1 in kidney were detected by ELISA and real-time PCR,respectively. Results At 24h after reperfusion,the BUN and Scr levels in both two BMSCs groups were significantly lower than those in control group(P＜0.05),and the levels in hypoxic BMSCs group was even lower than those in normoxic BMSCs group(P＜0.05),the renal tubulointerstitial damage of hypoxic BMSCs group was significantly lower than that of the normoxic BMSCs group and the control group(P＜0.05).at 48h after reperfusion,the renal tubular epithelial cells of the hypoxic BMSCs group recovered earlier than other two groups at 1 week after reperfusion,the BUN and Scr levels of hypoxic BMSCs group was still significantly lower than those of other two groups(P＜0.05),and there were nochronic changes in the hypoxic BMSCs group.The protein and mRNA levels of HGF and bFGF of hypoxic BMSCs group were significantly higher than those of the other two groups(P＜0.05),and the levels of HGF and bFGF in normoxic BMSCs group was higher than those in the control group. Conclusion Infusion of hypoxia-preconditioned BMSCs can enhance the recovery of IR injure of rat kidney,which may be attributable to the up-regulation of paracrine factors of HGF and bFGF after hypoxia preconditioning in BMSCs.

Mesenchymalstem cells Hypoxia Acute kidney injury Paracrine

2015-12-15）

（本文編輯：李媚）

國家自然科學(xué)基金（81570600）；上海青年醫(yī)師培養(yǎng)資助計劃（20141089）；復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院優(yōu)秀青年計劃(2015ZSYX QN23)

310007 杭州市中醫(yī)院腎內(nèi)科（劉紅、王華、陳洪宇）；復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院腎內(nèi)科（丁小強(qiáng)、俞小芳）

俞小芳，E-mail:yu.xiaofang@zs-hospital.sh.cn