程光嘉 劉順林 王金志

CPNE3蛋白在肺腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

程光嘉 劉順林 王金志

目的 探討CPNE3蛋白在肺腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 收集肺腺癌組織標(biāo)本82例（肺腺癌組）、癌旁肺組織標(biāo)本20例（對(duì)照組），采用免疫組化SP法檢測CPNE3蛋白的表達(dá)情況，并分析CPNE3蛋白在不同性別、年齡、腫瘤分化程度、大小、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)差異。結(jié)果 肺腺癌組CPNE3蛋白高表達(dá)53例（64.6%）、低表達(dá)29例（35.4%），對(duì)照組高表達(dá)0例（0%）、低表達(dá)20例（100%），肺腺癌組CPNE3蛋白高表達(dá)率明顯大于對(duì)照組（χ2=12.67，P＜0.01）。CPNE3蛋白的表達(dá)在不同TNM分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者及不同組織標(biāo)本中的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）；在不同性別、年齡、分化程度及腫瘤大小患者中的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論 CPNE3蛋白在肺腺癌組織中表達(dá)增高，并與肺癌的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；CPNE3蛋白可作為評(píng)估肺癌患者病變范圍和預(yù)后的標(biāo)志物。

CPNE3蛋白 肺腺癌 臨床

肺癌是全球因腫瘤死亡的主要原因之一，嚴(yán)重威脅人類健康。而非小細(xì)胞肺癌在所有類型肺癌中占80%左右，其中腺癌占40%左右。檢測肺腺癌組織中CPNE3蛋白的表達(dá)，有助于研究CPNE3蛋白在肺癌發(fā)病機(jī)制中的作用。本研究采用免疫組化SP法檢測肺腺癌組織、癌旁組織中CPNE3蛋白的表達(dá)情況，旨在探討CPNE3蛋白檢測在肺腺癌組織中的臨床意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2010年1月至2015年6月手術(shù)切除并經(jīng)病理確診、未經(jīng)其他治療的肺腺癌組織標(biāo)本82例（肺腺癌組），其中蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院50例，奉化市人民醫(yī)院32例。患者男41例，女41例，年齡44～76（61.25±5.56）歲；均行胸部CT、腹部B超、骨掃描及頭顱CT或MRI等檢查；TNM臨床分期：Ⅰ～Ⅲa期67例，Ⅲb～Ⅳ期15例；術(shù)前淋巴結(jié)穿刺細(xì)胞學(xué)和（或）手術(shù)切除淋巴結(jié)病理證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例。同時(shí)取癌旁組織標(biāo)本20例（離病變組織2cm以上，均經(jīng)病理證實(shí)為正常肺組織）作為對(duì)照。

1.2 方法 每個(gè)蠟塊取4μm厚連續(xù)切片作免疫組化染色，兔抗人CPNE3單克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，免疫組化SP試劑盒購自北京中山金橋生物有限公司。采用免疫組化SP法檢測肺癌組織中CPNE3的表達(dá)。先將切片置于二甲苯中脫蠟，10min/次，共2次，乙醇梯度水化處理，3%H2O2消除內(nèi)源性過氧化物酶，EDTA修復(fù)液常規(guī)修復(fù)：微波爐中高火5min、解凍2min、中低火20min加熱以充分暴露抗原位點(diǎn)，待其自然冷卻后，加A液室溫封閉15min，兔抗人CPNE3 4℃孵育過夜15min，1×PBST漂洗3次，5min/次；然后加B液室溫孵育15min，1×PBST漂洗3次，5min/次；再加C液室溫孵育15min，1×PBST漂洗3次，5min/次，DAB顯色10min，終止顯色，蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇固定，封片，觀察。采用抗體稀釋液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷 光鏡顯微鏡下觀察組織標(biāo)本的著色程度。CPNE3蛋白陽性表達(dá)主要表現(xiàn)為細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，也有少量為胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色。高倍鏡下隨機(jī)取4個(gè)不同視野，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)及核陽性細(xì)胞數(shù)，按陽性細(xì)胞數(shù)所占的百分比計(jì)分：陽性細(xì)胞率≤10%為1分、＞10%且≤50%為2分、＞50%且≤75%為3分、＞75%為4分；同時(shí)，根據(jù)染色的強(qiáng)弱程度計(jì)分：陰性1分，弱染色2分，中等染色3分，強(qiáng)染色4分。通過兩者的乘積來判斷結(jié)果：≤6分為低表達(dá)，＞6分為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 CPNE3在兩組標(biāo)本中的表達(dá)情況 肺腺癌組CPNE3高表達(dá)53例（64.6%），低表達(dá)29例（35.4%）；對(duì)照組高表達(dá)0例（0%），低表達(dá)20例（100%）。肺腺癌組CPNE3高表達(dá)率高于對(duì)照組（χ2=12.67，P＜0.01）。免疫組化染色見圖1。

圖1 CPNE3在肺腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)（a：CPNE3在肺腺癌細(xì)胞核中呈高表達(dá)；b：CPNE3在肺腺癌細(xì)胞核中呈低表達(dá)；c：CPNE3在癌旁組織中呈低表達(dá)；SP法，×400）

2.2 肺腺癌組CPNE3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

由表1可見，CPNE3的表達(dá)在不同TNM分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不同組織標(biāo)本比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）；在不同性別、年齡、分化程度及腫瘤大小方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

3 討論

CPNE3是Copines基因家族成員之一，是一類分布廣泛、進(jìn)化保守的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，其結(jié)構(gòu)特征是在N端有2個(gè)C2結(jié)構(gòu)域，是Ca2+和磷脂分子的結(jié)合位點(diǎn)，與突觸結(jié)合蛋白和蛋白激酶C的C2結(jié)構(gòu)域同源；在C端有1個(gè)血管性血友病因子（vWF）A結(jié)構(gòu)域，與整聯(lián)蛋白A結(jié)構(gòu)域部分同源[1]，在擬南芥中，vWF的同源結(jié)構(gòu)vWA的功能是結(jié)合并募集靶標(biāo)蛋白在C2結(jié)構(gòu)域的輔助作用下實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的靶標(biāo)蛋白的膜定位[2]。

CPNE3可能具有激酶活性，用CPNE3抗體與K562和Daudi的細(xì)胞提取液免疫共沉淀得到具有激酶活性的復(fù)合物，體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)CPNE3能磷酸化磷脂堿性蛋白和H1組蛋白[3]。最新研究發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌中CPNE3以一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移促進(jìn)因子的角色出現(xiàn)[4]，在乳腺癌中CPNE3和ErbB2（又名CD340）相互作用促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移。原位組織芯片分析發(fā)現(xiàn)，CPNE3在乳腺癌、前列腺癌和卵巢癌中有不同程度的表達(dá)，表明CPNE3在這些腫瘤中可能發(fā)揮一定的作用[5]。

惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是相當(dāng)復(fù)雜的臨床病理問題，相關(guān)機(jī)制目前尚未完全明了。越來越多的分子標(biāo)志物如癌胚抗原（CEA）、鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原（SCC）、神經(jīng)元特異烯醇化酯（NSE）等用于肺癌的臨床診斷，但這些標(biāo)志物在預(yù)測腫瘤的早期診斷及轉(zhuǎn)移上缺乏特異性及敏感性。為了研究CPNE3與肺腺癌的臨床病理關(guān)系，本研究通過免疫組化方法檢測82例肺腺癌與20例癌旁組織中CPNE3蛋白表達(dá)情況并結(jié)合相關(guān)臨床病理資料進(jìn)行分析。研究發(fā)現(xiàn)，CPNE3在肺腺癌組織中的表達(dá)較癌旁組織明顯增高，而且其表達(dá)情況在不同TNM分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不同標(biāo)本來源比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在不同性別、年齡、分化程度及腫瘤大小方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CPNE3可能在肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展等機(jī)制上起重要作用，在肺腺癌發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移的晚期起著重要作用，其有可能成為預(yù)測肺腺癌高度轉(zhuǎn)移的新的標(biāo)志物。

表1 肺腺癌組CPNE3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

[1]Ghislat G,Knecht E.New Ca(2+)-dependent regulators of autophagosome maturation[J].Commun Integr Biol,2012,5(4): 308-311.

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Expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma and its clinical significance

CHENG Guangjia，LIU Shunlin,WANG Jinzhi. Department of Respiratory Medicine,Fenghua People's Hospital,Fenghua 315500,China

Objective To investigate the expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma and its clinical significance. Methods The expression of CPNE3 protein was detected by immunohistochemical SP method in 82 specimens of lung adenocarcinoma and 20 specimens of adjacent normal lung tissue.The relationship of CPNE3 expression with sex,age, tumor size,degree of differentiation,staging and lymph nodes metastasis was analyzed. Results The expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma was significantly higher than that in adjacent normal lung tissue(P＜0.01).The expression levels of CPNE3 in stageⅢb and IV lung adenocarcinoma were significantly higher than those in stage I,ⅡandⅢa(P＜0.05).The CPNE3 expression levels of were higher in lung adenocarcinoma with lymph node metastasis than those without lymph node metastasis(P＜0.05). Conclusion The increased expression of CPNE3 in lung adenocarcinoma is correlated with TNM staging and lymph node metastasis,indicating that CPNE3 may serve as a new marker for evaluation of the severity and prognosis of lung cancer.

CPNE3 protein Lung adenocarcinoma Clinical

2016-04-09）

（本文編輯：馬雯娜）

315500 奉化市人民醫(yī)院呼吸科（程光嘉）；蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸科（劉順林）；蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院（王金志）

劉順林，E-mail：liusl.123@163.com