汪雁歸 楊天倫 毛蕭蕭 鄒 燕

(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院心內(nèi)科，湖南 長沙 410008)

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人參皂甙對老年癡呆性大鼠模型心功能的影響

汪雁歸 楊天倫 毛蕭蕭 鄒 燕1

(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院心內(nèi)科，湖南 長沙 410008)

目的 研究人參皂甙對老年癡呆性大鼠模型心功能的影響及機制。方法 采用AlCl3溶液背部皮下注射復(fù)制慢性鋁中毒老年癡呆性大鼠模型，并進(jìn)行人參皂甙灌胃治療，分析大鼠治療前后心功能變化及心肌氧化酶類、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)控蛋白表達(dá)。結(jié)果 老年癡呆性大鼠模型記憶過程明顯受到影響，且心肌組織中MDA、LVEDP、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)控蛋白和MMP2/9、TIMP1/2表達(dá)明顯增強而SOD、CAT、LVSP水平明顯降低(P<0.05)；人參皂甙干預(yù)后上述指標(biāo)得到明顯恢復(fù)(P<0.05)。結(jié)論 老年癡呆性大鼠心功能存在異常，人參皂甙可以通過調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能蛋白的表達(dá)而改善心功能異常。

人參皂甙；癡呆；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)

阿爾茨海默病(AD)又稱老年癡呆，患者表現(xiàn)為明顯的認(rèn)知功能障礙，且通常表現(xiàn)為心臟功能異?！?〕。但是其確切的發(fā)病機制尚不明確，目前臨床上也無特效的治療藥物。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)控蛋白是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受到劇烈外部刺激后表達(dá)急劇增強的一類蛋白，參與了多種病理模型的心功能異常〔2～4〕。本研究探討人參皂甙對老年癡呆性大鼠模型心功能的影響。

1 資料與方法

1.1 動物及分組 清潔級SD大鼠，購自延邊大學(xué)實驗動物中心，許可證號：SCXK(吉)-2011-0007。36只大鼠隨機分為對照組、模型組和人參皂甙組(n=12)。所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，除對照組外，其余大鼠背部皮下注射AlCl3溶液(1.5%)，每2 d注射1次，共注射2個月，造成慢性鋁中毒老年癡呆大鼠模型，對照組給予等量的生理鹽水背部皮下注射。在模型復(fù)制期間，人參皂甙組大鼠灌胃治療(100 mg/kg)，1次/d，對照組和模型組給予等劑量的生理鹽水。所有動物均自由飲食。

1.2 試劑與儀器 冷凍離心機購自德國Eppendorf公司；752型分光光度計購自Bio Rad公司；AlCl3購自北京化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水購自百特公司；酶標(biāo)儀購自Bio Rad公司；酶標(biāo)板購自Costar公司。其余試劑為市售分析純。

1.3 學(xué)習(xí)記憶指標(biāo)分析 參照以往的方法〔5〕，對各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶指標(biāo)進(jìn)行分析：對大鼠進(jìn)行Y型迷路實驗，記錄30次訓(xùn)練中的正確與錯誤次數(shù)。

1.4 ELISA檢測 超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所；CAT蛋白檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；PERK、CHOP蛋白檢測試劑盒購自R&D公司；IRE-1和ATF6蛋白檢測試劑盒購自O(shè)mega公司；(TIMP)1和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2蛋白檢測試劑盒購自Abcam公司；MMP9、TIMP2蛋白檢測試劑盒購自Santa Cruz公司。所有操作過程均按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件，計量資料用單因素方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 老年癡呆性大鼠模型記憶過程變化及人參皂甙的干預(yù)分析 老年癡呆性大鼠模型記憶過程明顯受到影響，與對照組相比差異顯著(P<0.05)；人參皂甙干預(yù)后癡呆大鼠模型的記憶過程得到明顯改善(P<0.05)。見表1。

2.2 老年癡呆性大鼠模型心肌氧化酶水平變化及人參皂甙的干預(yù)分析 老年癡呆性大鼠模型，SOD和CAT水平明顯降低而MDA水平明顯升高(P<0.05)；人參皂甙干預(yù)后癡呆大鼠模型的上述指標(biāo)得到明顯恢復(fù)(P<0.05)。見表2。

2.3 老年癡呆性大鼠模型心功能變化及人參皂甙的干預(yù)分析 老年癡呆性大鼠模型LVSP、±dp/dtmax明顯降低而LVEDP明顯升高(P<0.05)；人參皂甙干預(yù)后癡呆大鼠模型的心功能指標(biāo)得到明顯恢復(fù)(P<0.05)。見表3。

表1 各組大鼠學(xué)習(xí)記憶指標(biāo)比較±s,n=12)

表2 各組大鼠心肌氧化酶水平比較

2.4 老年癡呆性大鼠模型心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)控蛋白變化及人參皂甙的干預(yù)分析 老年癡呆性大鼠模型心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)控蛋白CHOP、PERK、IRE-1和ATF6表達(dá)明顯增強(P<0.05)；人參皂甙干預(yù)后癡呆大鼠模型的上述蛋白得到明顯恢復(fù)(P<0.05)。見表4。

2.5 老年癡呆性大鼠模型心肌重構(gòu)蛋白變化及人參皂甙的干預(yù)分析 老年癡呆性大鼠模型心肌細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)蛋白MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2表達(dá)明顯增強(P<0.05)；人參皂甙干預(yù)后癡呆大鼠模型的上述蛋白得到明顯恢復(fù)(P<0.05)，見表5。

表3 老年癡呆性大鼠模型心功能變化及人參皂甙的干預(yù)分析

表4 老年癡呆性大鼠模型心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)控蛋白變化及人參皂甙的干預(yù)分析±s,n=12)

表5 各組大鼠MMP2、9及TIMP1、2水平分析

3 討 論

老年癡呆患者通常伴隨心功能異常，加劇患者的機體損傷。本研究發(fā)現(xiàn)老年癡呆性大鼠模型記憶過程明顯受到影響，且心功能存在異常，人參皂甙可以通過調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能蛋白的表達(dá)而改善心功能異常。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)控蛋白參與多種組織損傷過程，也與多種心功能異常病理模型的發(fā)病過程相關(guān)〔6，7〕。有研究發(fā)現(xiàn)，阿奇霉素心肌損傷模型大鼠心功能異常與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)控蛋白的表達(dá)異常有關(guān)，且丹參多酚酸鹽的干預(yù)作用與其調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白有密切相關(guān)〔8〕。以往的研究發(fā)現(xiàn)小檗堿對壓力負(fù)荷所致心肌肥厚大鼠的保護(hù)作用也與其調(diào)控心肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白異常相關(guān)〔9〕。鄭亞萍等〔10〕也提出赤芍水提物對糖尿病心肌病大鼠心肌功能異常的改善作用與其調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白表達(dá)和巨噬細(xì)胞浸潤有關(guān)。同時，以往的研究也證實rAAV1-SERCA2a轉(zhuǎn)染改善心力衰竭犬心功能與其影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)控蛋白有一定的相關(guān)性〔11〕，且Ghrelin可以通過抑制ERS減輕異丙腎上腺素所致心肌損傷和心肌細(xì)胞凋亡〔12〕。本研究也提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)控蛋白參與了人參皂甙改善癡呆大鼠心功能異常的過程。

MMPs及TIMPs是細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)的主要酶，也是心臟功能維系的關(guān)鍵蛋白〔13〕。藥物能夠通過調(diào)控MMPs表達(dá)的異常過程改善心功能損傷〔14〕。楊忠路等〔15〕也證實曲美他嗪對慢性心力衰竭患者心功能的影響與其調(diào)控MMP9及TIMP1的表達(dá)有關(guān)。本研究也提示MMPs及TIMPs也與人參皂甙改善老年癡呆大鼠心功能異常過程有關(guān)。

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〔2015-11-15修回〕

(編輯 徐 杰)

楊天倫(1957-)，男，博士生導(dǎo)師，主要從事心血管研究。

汪雁歸(1982-)，女，博士在讀，主治醫(yī)師，主要從事心血管，動脈粥樣硬化研究。

R749

A

1005-9202(2016)22-5532-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.017

1 湖南省人民醫(yī)院老年病科