宋天琦，白 洋，閆 旭

(1.北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)三科，吉林吉林 132011；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院超聲科，長春 130021；3.吉林大學(xué)第一醫(yī)院病理科，長春 130021)

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SNCA基因多態(tài)性與帕金森病認(rèn)知障礙的相關(guān)性分析*

宋天琦1，白 洋2，閆 旭3

(1.北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)三科，吉林吉林 132011；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院超聲科，長春 130021；3.吉林大學(xué)第一醫(yī)院病理科，長春 130021)

目的 對(duì)帕金森病(PD)患者α-突觸核蛋白(SNCA)rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行研究，探討SNCA基因多態(tài)性與PD認(rèn)知障礙的相關(guān)性。方法 選擇2014年6月至2015年12月該院神經(jīng)內(nèi)科120例PD患者(PD組)和120例健康者(對(duì)照組)作為研究對(duì)象，PD患者根據(jù)是否有認(rèn)知功能障礙分為認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組。對(duì)各組患者rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型進(jìn)行研究。結(jié)果 PD組和對(duì)照組rs356200等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，PD組和對(duì)照組rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PD組和對(duì)照組rs356165等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，PD組和對(duì)照組rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PD認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356200及 rs356165等位基因頻率和基因型比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 PD的發(fā)病和SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性有關(guān)，PD患者的認(rèn)知功能障礙和SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性沒有顯著相關(guān)性。

α-突觸核蛋白；基因多態(tài)性；帕金森??；認(rèn)知功能障礙

帕金森病(Parkinson′s disease,PD)的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，目前認(rèn)為PD的發(fā)病可能和免疫/炎癥、氧化應(yīng)激、氨基酸毒性以及線粒體功能異常等多種機(jī)制有關(guān)，是在年齡老化的情況下遺傳因素和環(huán)境因素共同作用引起的[1-2]。在遺傳方面，發(fā)現(xiàn)了一系列的PD致病基因，α-突觸核蛋白(α-synuclein gene polymorphism,SNCA)基因是PD的致病基因之一，PD的病理改變是由SNCA蛋白聚集而成的小體構(gòu)成，家族性的PD的發(fā)病和SNCA基因的重復(fù)突變和點(diǎn)突變有關(guān)，散發(fā)性的PD和SNCA基因關(guān)系也比較密切[3-4]，SNCA基因的多態(tài)性和PD患者的認(rèn)知功能也有一定關(guān)系[5-6]。SNCA基因的多個(gè)多態(tài)位點(diǎn)(rs3822086、rs1372525、rs356165等)和PD的發(fā)病有關(guān)，但研究結(jié)果不盡相同。本文對(duì)PD患者SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行研究，探討SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性與PD認(rèn)知障礙的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年6月至2015年12月北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科120例PD患者(PD組)和體檢中心健康體檢的120例健康者(對(duì)照組)作為研究對(duì)象，PD組根據(jù)是否有認(rèn)知功能障礙分為認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組；PD組男67例，女53例，年齡(61.34±6.7)歲；對(duì)照組男61例，女59例，年齡(60.31±8.1)歲，對(duì)照組和PD組患者性別和年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。排除標(biāo)準(zhǔn)：有精神病病史者，有顱內(nèi)器質(zhì)性疾病者，有肝、腎、心、肺嚴(yán)重疾病者，有血管性癡呆等可能引起認(rèn)知功能異常者。

1.2 方法

1.2.1 認(rèn)知功能評(píng)估 所有研究對(duì)象均進(jìn)行MoCA評(píng)估認(rèn)知功能，根據(jù)MoCA評(píng)估結(jié)果將PD患者分為認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組，認(rèn)知功能障礙為MoCA評(píng)分小于26分，認(rèn)知功能正常為MoCA評(píng)分大于或等于26分。

1.2.2 rs356200和rs356165基因型測定 采集受試者外周血，采用氯仿法提取患者外周血基因組DNA，根據(jù)SNCA基因的rs356200和rs356165位點(diǎn)兩側(cè)序列，用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)進(jìn)行擴(kuò)增，總反應(yīng)體系為20 μL，PCR反應(yīng)為95 ℃預(yù)變性2 min，95 ℃、60 ℃和72 ℃各30 s，72 ℃延伸5 min，共40個(gè)循環(huán)。將PCR酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分離確定rs356200和rs356165基因型。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察PD組和對(duì)照組rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型，認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型 。

2 結(jié) 果

2.1 rs356200和rs356165電泳分型結(jié)果 rs356200位點(diǎn)有3個(gè)基因型：G/G、A/A、A/G，A/A純合子不能被酶切開，只有1個(gè)229 bp基因型片段，G/G純合子被切成64 bp和165 bp 2個(gè)基因型片段，A/G雜合子被切為64、165 bp和229 bp 3個(gè)片段(圖1)。rs356165位點(diǎn)有3個(gè)基因型：G/G、A/A、A/G，A/A純合子不能被酶切開，只有1個(gè)297 bp基因型片段，G/G純合子被切成139 bp和158 bp 2個(gè)基因型片段，A/G雜合子被切為139、158 bp和297 bp 3個(gè)片段(圖2)。

標(biāo)本1:A/A純合子；標(biāo)本2：G/G純合子；標(biāo)本3和標(biāo)本4：A/G雜合子。

圖1 rs356200部分電泳圖

標(biāo)本1：A/G雜合子；標(biāo)本2：A/A純合子；標(biāo)本3：G/G純合子。

圖2 rs356165部分電泳圖

2.2 PD組和對(duì)照組rs356200等位基因頻率和基因型比較 PD組和對(duì)照組rs356200等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，PD組和對(duì)照組rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明PD的發(fā)病可能和rs356200基因多態(tài)性有關(guān)，見表1。

2.3 PD組和對(duì)照組rs356165等位基因頻率和基因型比較 PD組和對(duì)照組rs356165等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，PD組和對(duì)照組rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明PD的發(fā)病可能和rs356165基因多態(tài)性有關(guān)，見表2。

2.4 認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較 認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明PD認(rèn)知功能障礙和rs356200基因多態(tài)性沒有相關(guān)性，見表3。

表1 PD組和對(duì)照組rs356200等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

表2 PD組和對(duì)照組rs356165等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

表3 認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

2.5 認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較 認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明PD認(rèn)知功能障礙和rs356165基因多態(tài)性沒有相關(guān)性，見表4。

表4 認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較[n(%)]

3 討 論

SNCA基因是PD的致病基因，SNCA蛋白相對(duì)分子質(zhì)量比較小，在神經(jīng)可塑性、信號(hào)傳遞和細(xì)胞分化等的調(diào)節(jié)方面發(fā)揮一定作用，SNCA蛋白的異常積聚由SNCA基因的重復(fù)突變或者點(diǎn)突變引起，異常積聚的SNCA蛋白使神經(jīng)細(xì)胞死亡或者發(fā)生功能障礙，引起大腦萎縮[7]。SNCA蛋白聚集形成的路易小體是PD的主要病理特征，SNCA基因的位點(diǎn)多態(tài)性和基因重復(fù)序列能夠使SNCA蛋白的表達(dá)水平升高，影響PD的發(fā)病。SNCA基因重復(fù)序列越長越容易引起PD的發(fā)生，SNCA基因的多個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性和散發(fā)性PD的發(fā)病關(guān)系密切，如rs3857059、rs3733449、rs11931074和rs356165等多種基因位點(diǎn)，SNCA基因位點(diǎn)的多態(tài)性增加PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[8]。本研究對(duì)北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科120例PD患者和120例健康者作為研究對(duì)象，PD患者根據(jù)是否有認(rèn)知功能障礙分為認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組。對(duì)各組患者rs356200及rs356165等位基因頻率和基因型進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：PD組和對(duì)照組rs356200等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PD組和對(duì)照組rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PD組和對(duì)照組rs356165等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PD組和對(duì)照組rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明PD的發(fā)病和SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性有關(guān)。基因的多態(tài)性和地區(qū)差異等有關(guān)，不同地區(qū)患者的基因多態(tài)性可能不同，本文對(duì)我國漢族人群的SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行研究，表明在中國漢族人群中，SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性和PD的發(fā)病有關(guān)。

PD不僅存在運(yùn)動(dòng)功能障礙，還包含癡呆、感覺障礙、認(rèn)知功能障礙等其他非運(yùn)動(dòng)癥狀[9]，其中癡呆和認(rèn)知功能障礙是PD比較常見的非運(yùn)動(dòng)癥狀，PD的認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制不清楚[10-11]。SNCA基因除了和PD的發(fā)病易感性有關(guān)，和PD的認(rèn)知功能也存在一定關(guān)系，PD患者中認(rèn)知功能障礙是一種比較常見的現(xiàn)象，認(rèn)知功能障礙和PD的路易小體病理改變關(guān)系密切。PD患者邊緣系統(tǒng)和皮層的SNCA聚集形成路易小體，路易小體的形成是PD認(rèn)知功能障礙的病因之一，SNCA基因可能通過調(diào)節(jié)多巴胺的水平影響患者的記憶功能[12-13]。本研究通過對(duì)SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性與PD認(rèn)知障礙的相關(guān)性進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):帕認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356200等位基因頻率和基因型比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，帕認(rèn)知障礙組和非認(rèn)知障礙組rs356165等位基因頻率和基因型比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明PD認(rèn)知功能障礙和SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性沒有相關(guān)性。關(guān)于PD認(rèn)知功能障礙和SNCA基因多態(tài)性相關(guān)性的研究在不同國家和不同地區(qū)結(jié)果不同[14-15]，因本研究是對(duì)中國漢族人群進(jìn)行的研究，且樣本量較少，為進(jìn)一步明確SNCA基因rs356200和rs356165位點(diǎn)的多態(tài)性與PD認(rèn)知障礙的相關(guān)性，需要進(jìn)行大樣本、多種族、多地區(qū)進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

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Analysis on correlation between SNCA gene polymorphism and cognitive disorders of Parkinson′s disease*

SongTianqi1,BaiYang2,YanXu3

(1.ThirdDepartmentofNeurology,AffiliatedHospitalofNorthChinaUniversity,Jilin,Jilin132011,China； 2.DepartmentofUltrasound,theFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China; 3.DepartmentofPathology,theFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China)

Objective To study α- synuclein(SNCA)rs356200 and rs356165 loci polymorphism in the patients with Parkinson′s disease(PD)and to investigate the correlation between SNCA gene polymorphism and PD cognitive impairment.Methods One hundred and twenty cases of PD in our hospital from June 2014 to December 2015 and 120 heaalthy people were selected as the research subjects.The PD cases served as the PD group and 120 healthy subjects as control group.The PD cases were also divided into the cognitive impairment group and non-cognitive impairment group according to the cognitive impairment.The rs356200 and rs356165 allele frequencies and genotype in each group were studied.Results The rs356200 allele frequency had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05),the rs356200 G/G,A/A and A/G genotype had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05).The rs356165 allele frequency had no statistical difference between the PD group and the control group(P>0.05),the rs356165 G/G,A/A and A/G genotype had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05).The rs356200 and rs356165 allele frequencies and genotype had no statistical difference between the cognitive impairment group and non-cognitive impairment group(P>0.05).Conclusion The morbidity of PD is related to SNCA gene rs356200 and rs356165 sites polymorphism.PD cognitive dysfunction has no significant correlation with SNCA gene rs356200 and rs356165 loci polymorphism.

α- synuclein gene polymorphism;Parkinson′s disease;cognitive dysfunction

??·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.33.013

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20130522018JH)。 作者簡介：宋天琦(1979-),碩士，主治醫(yī)師，主要從事腦血管病方面的研究。

R749.1

A

1671-8348(2016)33-4650-03

2016-04-04

2016-05-17)

許魏(1984-)，本科，主治醫(yī)師，主要從事腦血管病及認(rèn)知功能方面的研究?！?/p>