李林潞，陳悅，趙維哲，王洋，柴玉卓，張勝

(北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

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天臺(tái)烏藥散對(duì)輸卵管的影響

李林潞，陳悅，趙維哲，王洋，柴玉卓，張勝*

(北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029)

目的：觀察天臺(tái)烏藥散對(duì)輸卵管阻塞模型SD大鼠輸卵管的影響。方法：將正常SD雌性大鼠40只按體質(zhì)量均衡和隨機(jī)原則分為正常對(duì)照組、模型組、婦炎康組、天臺(tái)烏藥散組。正常對(duì)照組在大鼠輸卵管局部注射生理鹽水，模型組和兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組注射苯酚膠漿，手術(shù)9天后，正常對(duì)照組給予等量蒸餾水灌胃，婦炎康組給予7.3 g/(kg·d)婦炎康混懸液灌胃，天臺(tái)烏藥散組給予0.35 g/(kg·d)天臺(tái)烏藥散灌胃，1次/天，持續(xù)20天。第21天分離子宮，檢測輸卵管肌張力；HE染色觀察各組大鼠輸卵管和卵巢的損傷及修復(fù)情況。結(jié)果：正常對(duì)照組和婦炎康組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.01)， 天臺(tái)烏藥散組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.05)；婦炎康組及天臺(tái)烏藥散組大鼠輸卵管及卵巢病理組織形態(tài)學(xué)較模型組有顯著改變。結(jié)論：天臺(tái)烏藥散對(duì)于輸卵管阻塞有明顯的治療作用，并可改善輸卵管肌張力。

天臺(tái)烏藥散；肌張力；不孕癥

世界衛(wèi)生組織規(guī)定，夫妻雙方性生活正常，1年未避孕未懷孕稱為不孕癥[1]。近年來，隨著社會(huì)壓力的增加，生活節(jié)奏的加快以及自然環(huán)境的惡化，我國不孕癥的發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢且逐漸呈現(xiàn)低齡化趨勢[2]。不孕癥已成為影響家庭和諧和社會(huì)穩(wěn)定的醫(yī)學(xué)問題[3]。在女性不孕的病因中，輸卵管因素居首要地位，發(fā)生率約為43.6%，其原因與盆腔及生殖道感染、盆腔手術(shù)、流產(chǎn)等有關(guān)[4]。近年來中醫(yī)發(fā)揮其整體觀念，辨證論治的特點(diǎn)，在不孕癥的辨證分型、治療用藥等方面取得了一定的進(jìn)展，對(duì)不孕癥的臨床研究有一定的指導(dǎo)意義[5]。天臺(tái)烏藥散作為中醫(yī)藥學(xué)的經(jīng)典方劑，用于治療小腸疝氣，但目前對(duì)其現(xiàn)代應(yīng)用及其作用機(jī)制方面的報(bào)道較少，本研究觀察了天臺(tái)烏藥散對(duì)輸卵管阻塞模型SD大鼠的作用，并探討其發(fā)揮作用的可能機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

SD大鼠40只，雌性，體質(zhì)量(210±10)g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(京)2012-0001。實(shí)驗(yàn)期間飼養(yǎng)在三級(jí)動(dòng)物室，溫度(25±1)℃。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)用藥物

烏藥、木香、小茴香、青皮、高良姜、檳郎、川楝子、巴豆(北京同仁堂中藥店)；婦炎康丸(吉林省中研藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：Z20025527，水蜜丸)，使用前研成粉末，配成0.14 g/ml(相當(dāng)于成人1日用量4倍)的混懸液。

中藥材經(jīng)浸泡、煎煮、濃縮等處理使藥物終質(zhì)量濃度為含生藥量0.73 g/ml；所得藥液置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 實(shí)驗(yàn)用試劑

苯酚膠劑液化苯酚(Amresco)5 ml，黃芪樹膠(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)1 g，甘油(Genebio)4 ml，加蒸餾水至20 ml，配成25%的苯酚膠漿；二甲苯(北京化學(xué)試劑工廠)；LOCKE氏液：無水氯化鈣(北京藥理精細(xì)化學(xué)品有限公司)0.266 g/L，碳酸氫鈉(北京化學(xué)試劑工廠)1.7 g/L， 氯化鈉(北京化學(xué)試劑工廠)7.103 g/L，葡萄糖(北京化學(xué)試劑工廠)1.98 g/L， 氯化鉀(中國上海試劑一廠)0.41 g/L， 磷酸二氫鉀(北京紅星化工廠)0.187 g/L， 六水合氯化鎂(滬試)0.244 g/L。

1.1.4 儀器

顯微鏡(Olympus)；電子讀數(shù)分析天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)；手術(shù)燈；剪刀；手術(shù)剪；眼科鑷；止血鉗；持針器；手術(shù)縫合針；線；紗布；1 ml、5 ml、10 ml注射器；燒杯；量筒；灌胃針；切片機(jī)(leizt)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(湖北省黃石市醫(yī)療器械廠)。

1.2 分組及造模、給藥

將動(dòng)物按質(zhì)量均衡和隨機(jī)的原則分為正常對(duì)照組、模型組、婦炎康組、天臺(tái)烏藥散組。40只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，于第8天以1%戊巴比妥鈉4 ml/kg腹腔注射麻醉，減去下腹正中毛，碘酒，酒精消毒皮膚，由下腹部正中切口2.5 cm，暴露子宮。模型組、婦炎康組、天臺(tái)烏藥散組在距離卵巢1 cm處向卵巢方向進(jìn)針緩緩注入25%苯酚膠劑0.04 ml，術(shù)畢，分層關(guān)腹，消毒術(shù)區(qū)，將其側(cè)臥放入鼠籠中，待其自然蘇醒。正常對(duì)照組，在同一部位注入0.04 ml生理鹽水，其余操作同前，作為假手術(shù)對(duì)照組。手術(shù)9天后，進(jìn)行灌胃，正常對(duì)照組和模型組給予等量蒸餾水灌胃，婦炎康組給與7.3 g/(kg·d)婦炎康混懸液灌胃，天臺(tái)烏藥散組給予0.35 g/(kg·d)天臺(tái)烏藥散灌胃，均1次/天，持續(xù)20天。

1.3 取材

各組動(dòng)物于最后給藥后第2天稱體質(zhì)量，斷頸，距卵巢0.5 cm處分離、剪下1 cm長的輸卵管。

1.4 肌張力測定

實(shí)驗(yàn)前先將適量的水注入恒溫浴槽中，溫度控制在39℃。麥?zhǔn)显∶笾屑尤?0 ml LOCKE氏液。另外用燒杯盛滿LOCKE氏液，放在恒溫浴槽內(nèi)保溫，以便在實(shí)驗(yàn)中更換浴管中的LOCKE氏液。將輸卵管兩端用4號(hào)手術(shù)線結(jié)扎，一端固定于含10 ml LODKE氏液(pH值為7.2～7.4)的麥?zhǔn)显∶蟮撞?麥?zhǔn)显∶笾糜?9℃恒溫水浴槽中)，將浴槽充氣連接換能器的輸卵管前負(fù)荷為5 g，平衡10 min收縮平穩(wěn)后記錄90 min自發(fā)收縮。

1.5 輸卵管切片HE染色

將輸卵管肌條置于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，常規(guī)HE染色，各級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，樹脂膠封固。光鏡下觀察各組大鼠輸卵管組織形態(tài)學(xué)變化。

1.6 卵巢切片HE染色

將卵巢組織置于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，常規(guī)HE染色，各級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，樹脂膠封固。光鏡下觀察各組大鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)變化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠子輸卵管平滑肌張力比較

正常對(duì)照組和婦炎康組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.01)， 天臺(tái)烏藥散組離體輸卵管肌張力明顯高于模型組(P<0.05)。見表1。

表1 各組離體輸卵管肌張力水平比較

注：與模型組比較，1)P<0.01，2)P<0.05。

2.2 各組大鼠輸卵管切片HE染色

輸卵管形態(tài)學(xué)觀察，光鏡下觀察，可見輸卵管的肌層和漿膜層并無明顯差別，肌層與黏膜層結(jié)構(gòu)分層明顯，黏膜層差異較為明顯，特別是黏膜上皮。正常對(duì)照組大鼠輸卵管上皮細(xì)胞多呈單層柱狀較為整齊排列，部分上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，并見有淋巴細(xì)胞浸潤、嗜酸性粒細(xì)胞(圖1-1)。模型組大鼠輸卵管黏膜層損傷較為嚴(yán)重，大量上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，纖毛短小、稀疏、部分脫落，上皮細(xì)胞相對(duì)疏松排列雜亂，胞核排列不規(guī)整，核仁不清晰，并見有淋巴細(xì)胞浸潤、嗜酸性粒細(xì)胞(圖1-2)。婦炎康組大鼠輸卵管黏膜上皮多呈單層柱狀整齊排列，纖毛細(xì)胞游離面纖毛長而密集，核仁清晰，胞質(zhì)豐富，少量上皮細(xì)胞變性脫落，并見有淋巴細(xì)胞浸潤、嗜酸性粒細(xì)胞(圖1-3)。天臺(tái)烏藥散組大鼠輸卵管黏膜上皮多呈單層柱狀整齊排列，纖毛細(xì)胞游離面纖毛長而密集，核仁清晰，胞質(zhì)豐富，部分上皮細(xì)胞變性脫落，并見有少量淋巴細(xì)胞浸潤、嗜酸性粒細(xì)胞(圖1-4)。

圖1 各組大鼠輸卵管切片HE染色圖

2.3 各組大鼠卵巢切片HE染色

卵巢形態(tài)學(xué)觀察，光鏡下觀察，正常對(duì)照組可觀察到大量黃體、成熟卵泡，少量閉鎖卵泡。卵母細(xì)胞可見清晰的細(xì)胞核，其周圍由顆粒細(xì)胞構(gòu)成，顆粒細(xì)胞形態(tài)正常，分布規(guī)則，無明顯壞死脫落(圖2-1)。模型組的黃體數(shù)目較少，成熟卵泡數(shù)目較少，閉鎖卵泡數(shù)目較多。間質(zhì)小血管擴(kuò)張充血以及紅細(xì)胞滲出。卵母細(xì)胞核不清晰，卵泡腔顆粒層顆粒細(xì)胞大量增生，并見有大量壞死，脫落(圖2-2)。婦炎康組的黃體數(shù)目增加，成熟卵泡數(shù)目增加，閉鎖卵泡數(shù)目明顯減少。卵母細(xì)胞核不清晰，泡腔顆粒層顆粒細(xì)胞增生，并見有部分壞死，脫落(圖2-3)。天臺(tái)烏藥散組的黃體數(shù)目明顯增加，成熟卵泡數(shù)目明顯增加，閉鎖卵泡數(shù)目明顯減少。卵母細(xì)胞核不清晰，卵泡腔顆粒層顆粒細(xì)胞增生，并見有部分壞死，脫落(圖2-4)。

圖2 各組大鼠卵巢切片HE染色圖

3 討論

目前輸卵管因素已經(jīng)成為造成女性不孕的主要原因，占女性不孕癥的30%～50%。西醫(yī)認(rèn)為其主要原因?yàn)槁暂斅压苎装Y，輸卵管結(jié)核，盆腔、宮腔術(shù)后黏連等[6]。中醫(yī)學(xué)對(duì)于輸卵管阻塞造成成的婦科炎癥無專門稱謂，但根據(jù)其臨床特點(diǎn)可歸屬于“癥瘕”“婦人腹痛”“無子”等范疇[7]。西醫(yī)以抗炎、反復(fù)輸卵管通液、腹腔鏡下黏連分離等治療為主，但治療效果并不滿意，且反復(fù)輸卵管通液或腹腔鏡下黏連分離會(huì)導(dǎo)致一系列手術(shù)并發(fā)癥甚至發(fā)生宮外孕，一些患者對(duì)手術(shù)難以接受[8]。而近幾年的研究表明中醫(yī)藥能明顯改善輸卵管內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)輸卵管功能的恢復(fù)，對(duì)盆腔慢性炎癥有很好的療效，對(duì)輸卵管性不孕有很好的治療作用，且副作用小，易被不孕癥患者接受[9-13]，同時(shí)中藥提高卵巢功能，治療卵巢早衰、多囊卵巢綜合癥等疾病效果明顯[14-21]。

天臺(tái)烏藥散最早出自《圣濟(jì)總錄》，原名烏藥散[22]。本方由天臺(tái)烏藥、木香、小茴香、青皮、高良姜、檳郎、川楝子、巴豆等組成，具有行氣疏肝，散寒止痛之功，常用于治療寒滯肝脈之小腸疝氣，少腹引控睪丸而痛，偏墜腫脹，苔白，脈弦；亦治婦女痛經(jīng)，瘕聚等屬寒凝氣滯者。常用于治療腹股溝斜疝和直疝、睪丸炎、附睪炎、胃腸功能紊亂等。天臺(tái)烏藥散以辛溫之烏藥為君，疏肝行氣，散寒止痛，理脾胃元?dú)?。又用青皮疏肝、木香行氣、高良姜暖下、茴香散寒，從而加?qiáng)了烏藥行氣散寒之功。檳榔下氣導(dǎo)滯，直達(dá)下焦，有破堅(jiān)推蕩之力。巴豆與川楝子同用且在用法上均被炒用，既增強(qiáng)了行氣疏肝之功用，又避免了川楝子苦寒之性。有關(guān)本方的應(yīng)用報(bào)道并不多，現(xiàn)有的臨床報(bào)道指出天臺(tái)烏藥散加減在治療前列腺炎、慢性闌尾炎、婦科炎癥等疾病中有一定療效[23-25]。

妊娠是新個(gè)體產(chǎn)生的過程，包括受精與著床、妊娠的維持、胎兒的生長等，而卵巢及輸卵管功能的正常是不可缺少的要素。本實(shí)驗(yàn)在成功建立輸卵管阻塞的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)，天臺(tái)烏藥散湯劑的灌服可改善大鼠輸卵管黏膜層損傷，并改善卵巢功能，增加黃體及成熟卵泡數(shù)量。同時(shí)現(xiàn)代研究證實(shí)卵子需在輸卵管的運(yùn)動(dòng)和纖毛的作用下逐漸移動(dòng)，其中輸卵管平滑肌收縮活動(dòng)是卵子在輸卵管內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的主要推動(dòng)力，故輸卵管的肌張力在很大程度上影響排卵和受孕。本實(shí)驗(yàn)采用臨床上常用的婦炎康作為治療效果的參考，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示天臺(tái)烏藥散組輸卵管阻塞程度、輸卵管肌張力及卵巢功能的改善情況均略低于婦炎康組，但本方完全按照記載使用，不排除對(duì)本方進(jìn)行加減后可以治療婦科炎癥的可行性。綜上所述，天臺(tái)烏藥散在治療婦科炎癥方面具有一定的應(yīng)用價(jià)值，在對(duì)其進(jìn)行加減后的治療效果令人期待，有待進(jìn)一步研究。

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Effect of Tiantai Wuyao San on Fallopian Tube

LI Lin-lu,CHEN Yue,ZHAO Wei-zhe,WANG Yang,CHAI Yu-zhuo,ZHANG Sheng*

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To observe the effect of Tiantai Wuyao San on fallopian tubes in SD rat models. Methods:Forty female SD rats were randomly divided into four groups: normal group, model group, Fuyankang group and Tiantai Wuyao San group. Rats in normal group received the injection of saline into both sides of their tubes. Rats in other three groups were injected with phenolatabrine paste. Nine days after operation,normal group and model group were given the same volume of distilled water by intragastric administration;Fuyankang group was treated by Fuyankang suspension at the dosage of 7.3 g/(kg·d);Tiantai Wuyao San group was treated by Tiantai Wuyao San at the dosage of 0.35 g/(kg·d) respectively,with once a day and for 20 days. On the 21stday, animals were sacrificed and tubes were separated solely and their smooth muscle contraction force was measured. After tubes were removed, paraffin section and HE staining were made. Results:There was a significant difference between normal group and Fuyankang group according to fallopian tube smooth muscle contraction (P<0.01),and there was a significant difference between Tiantai Wuyao San group and model group (P<0.05). Compared with those in model group,the fallopian tube and ovary pathological histology in Tiantai Wuyao San group and Fuyankang group were significantly improved. Conclusion:Tiantai Wuyao San has an obvious effect in the treatment of fallopian tube obstruction, and can improve tubal smooth muscle contraction.

Tiantai Wuyao San; Muscle contraction;Infertility

2014年國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.201410026054)

李林潞(1992-)，女，北京中醫(yī)藥大學(xué)2011級(jí)中西醫(yī)結(jié)合臨床專業(yè)學(xué)生。

張勝*(1963-)，男，副教授，主要研究方向：心臟生理學(xué)。

2016-03-18

R285.3

A

1002-2406(2016)06-0031-04

修回日期：2016-04-10