原 野，陳丹丹，荊淑芳，于永生，陳健恒，吳純啟，施 暢，*

（1.軍 事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所國(guó)家北京藥物安全評(píng)價(jià)研究中心，北京 100850；2.軍 事醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗毒藥物與毒理學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100850；3.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050；4.YMS Agriculture International Corp., Torontom5X 1C7, Ontario, Canada）

正丁基硫代磷酰三胺對(duì)體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的致突變性研究

原 野1，2，陳丹丹3，荊淑芳1，2，于永生1，2，陳健恒4，吳純啟1，2，施 暢1，2，*

（1.軍 事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所國(guó)家北京藥物安全評(píng)價(jià)研究中心，北京 100850；2.軍 事醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗毒藥物與毒理學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100850；3.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050；4.YMS Agriculture International Corp., Torontom5X 1C7, Ontario, Canada）

正丁基硫代磷酰三胺[N-(n-butyl)-thiophosphorictriamide，NBPT]是一種土壤尿素酶抑制劑，用于以尿素為基料的氮肥，通過(guò)降低尿素的氨揮發(fā)而減少氮損失，具有高效、廉價(jià)、低毒、易降解、無(wú)殘留、不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有較大的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)[1]。澳大利亞國(guó)家工業(yè)化學(xué)物通告和評(píng)估方案(National Industrial Chemicals Notification and Assessment Scheme，NICNAS)報(bào)告顯示NBPT在有或無(wú)代謝活化的Ames試驗(yàn)中未顯示致突變性；在小鼠的體內(nèi)微核試驗(yàn)中，在100、333和1 000mg/kg劑量下未顯示致染色體斷裂活性。目前對(duì)化學(xué)物遺傳毒性多采用試驗(yàn)組合的方式從不同的遺傳學(xué)終點(diǎn)的角度來(lái)綜合評(píng)價(jià)，根據(jù)國(guó)家環(huán)保部《新化學(xué)物質(zhì)環(huán)境管理辦法2010》(7號(hào)令)對(duì)化學(xué)品遺傳毒性評(píng)價(jià)的要求，本研究采用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)和小鼠顯性致死試驗(yàn)評(píng)價(jià)正丁基硫代磷酰三胺對(duì)體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的致突變性，為其生產(chǎn)、注冊(cè)以及出口補(bǔ)充遺傳毒性方面的實(shí)驗(yàn)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試物 NBPT，美國(guó)化學(xué)文摘社(Chemical Abstracts Service，CAS)登記號(hào)94317-64-3。由上虞盛暉化工股份有限公司提供，白色結(jié)晶固體，分子式C4h14N3PS，批號(hào)140420，含量98.0%。2～8℃避光干燥保存。

1.1.2 受試物溶媒 玉米油，購(gòu)自山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公司，為淡黃色或黃色的澄清油狀液體，在陰涼干燥處密閉保存。

1.1.3 陽(yáng)性對(duì)照品 環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CP)，購(gòu)自Sigma公司。含量100%。批號(hào)120M1253V， 2～8℃避光、密閉保存。用自制去離子水配制。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR小鼠，SPF/VAF級(jí)，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK -(京)2012-0001。動(dòng)物合格證號(hào)1140070004821 9。

1.2 劑量設(shè)計(jì)依據(jù)

NICNAS報(bào)告中顯示：①NBPT在兩項(xiàng)有或無(wú)代謝活化的Ames試驗(yàn)中未顯示致突變性；②小鼠的體內(nèi)微核試驗(yàn)中，NBPT在100、333和1 000mg/kg劑量下未顯示致染色體斷裂活性；③SD大鼠(雌雄各5只)以0、250、500、1 000和2 000mg/(kg·d)的劑量水平連續(xù)灌胃NBPT，共15 d，未見(jiàn)動(dòng)物死亡；④NBPT口服吸收較為完全，吸收率為74.39%，半衰期為78h。

按照國(guó)家環(huán)保部《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范——嚙齒類(lèi)動(dòng)物顯性致死試驗(yàn)》和《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范——體內(nèi)哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)》的相關(guān)要求，NBPT的毒性較低，使用多次染毒的高劑量組限量劑量1 000mg/(kg·d)，按1∶0.5的比例下設(shè)中劑量500mg/(kg·d)和低劑量250mg/(kg·d)。

1.3 方法

國(guó)家北京藥物安全評(píng)價(jià)研究中心的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)已批準(zhǔn)本研究的實(shí)驗(yàn)方案，并確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案符合相關(guān)的動(dòng)物福利法規(guī)中相關(guān)條款的要求。

1.3.1 小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)[2-3]量效關(guān)系研究中NBPT設(shè)250、500、1 000mg/kg共3個(gè)劑量組，時(shí)效關(guān)系研究中NBPT劑量為1 000mg/kg，設(shè)24、48及72h共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，同時(shí)設(shè)溶媒對(duì)照組(玉米油)，均采用單次灌胃給藥。陽(yáng)性對(duì)照組按40mg/kg單次腹腔注射環(huán)磷酰胺。每組雌雄動(dòng)物均各5只。量效關(guān)系研究中動(dòng)物于給藥后24h取骨髓細(xì)胞，進(jìn)行骨髓涂片，時(shí)效關(guān)系研究中動(dòng)物于給藥后24、48及72h取骨髓細(xì)胞，

進(jìn)行骨髓涂片。動(dòng)物于處死前2～4h按4mg/kg腹腔注射秋水仙素(400mg/L)。每只動(dòng)物在油鏡下分析100個(gè)中期相骨髓細(xì)胞，計(jì)數(shù)染色體結(jié)構(gòu)畸變、數(shù)目畸變及裂隙的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算發(fā)生率，以每只動(dòng)物標(biāo)本為計(jì)數(shù)單位。

1.3.2 顯性致死試驗(yàn)[4-5]NBPT設(shè)250、500、1 000mg/kg共3個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)溶媒對(duì)照組(玉米油)。雌鼠與雄鼠共進(jìn)行7個(gè)輪次的交配，每輪次1周，覆蓋雄性大鼠整個(gè)生精周期。雄鼠每組20只，每天給藥1次，連續(xù)5 d，雌鼠每組280只，每交配輪次使用40只，不給藥。陽(yáng)性對(duì)照組末次給藥日按50mg/kg單次腹腔注射環(huán)磷酰胺。雄鼠給藥結(jié)束后，于同籠開(kāi)始日的16 時(shí)按2∶1將雌、雄小鼠放入交配籠內(nèi)交配，5 d后取出雌鼠另行飼養(yǎng)。雄鼠則于2 d后再與同樣數(shù)量的另一批雌鼠同籠交配，共進(jìn)行7個(gè)輪次的交配。雄鼠于同籠結(jié)束后處死，雌鼠于同籠結(jié)束后第14天處死，取左右兩側(cè)子宮，分離胎仔，計(jì)數(shù)總著床數(shù)、黃體數(shù)，記錄死胎、活胎和吸收胎數(shù)。計(jì)算公式如下。

受孕率＝受孕雌鼠數(shù)/交配雌鼠數(shù)×100%

窩均著床數(shù)＝(活胎數(shù)＋死胎數(shù)＋吸收胎數(shù))/受孕母鼠總數(shù)

窩均黃體數(shù)＝黃體總數(shù)/受孕母鼠總數(shù)

著床前丟失率＝(黃體數(shù)－總著床數(shù))/黃體數(shù)×100%

著床后丟失率＝(死胎數(shù)＋吸收胎數(shù))/總著床數(shù)×100%

窩均活胎數(shù)＝活胎總數(shù)/受孕母鼠總數(shù)

窩均非活胎數(shù)＝死胎及吸收胎總數(shù)/受孕母鼠總數(shù)

顯性致死突變率＝死亡胚胎數(shù)/總著床數(shù)×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

1.4.1 小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 采用國(guó)際體內(nèi)致突變實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析工作小組提出的三步分析法[6]：①確定溶媒對(duì)照組染色體畸變率是否超出4%；②采用Cochran-Armitage線性趨勢(shì)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)溶媒對(duì)照組和各染毒處理組染色體畸變率是否存在劑量反應(yīng)關(guān)系；③采用卡方檢驗(yàn)比較各染毒處理組與溶媒對(duì)照組是否存在顯著差異。

1.4.2 顯性致死試驗(yàn) 動(dòng)物體質(zhì)量、著床數(shù)、黃體數(shù)、存活著床數(shù)等資料先采用Levene方差齊性檢驗(yàn)在5%顯著性水平分析各組間方差是否均等。①若各組間呈方差齊性，進(jìn)行單因素方差分析；若各組間差異顯著，采用Tukey檢驗(yàn)和Dunnett’s t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。②若各組間方差不齊，采用Kruskal-Willis非參數(shù)檢驗(yàn)確定各組間有無(wú)顯著性差異；若各組間經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有顯著性差異，采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)比較對(duì)照組與處理組間有無(wú)顯著差異。每組受孕率、著床前丟失率、著床后丟失率等頻數(shù)資料采用單側(cè)Fisher精確檢驗(yàn)。非存活著床數(shù)采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)(Mann-Whitney U 檢驗(yàn))比較對(duì)照組與處理組間有無(wú)顯著差異[7]。

2 結(jié)果

2.1 小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)

2.1.1 量效關(guān)系 溶媒對(duì)照組小鼠骨髓染色體畸變率為1.7%，與文獻(xiàn)報(bào)道的小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變率本底值相近。陽(yáng)性對(duì)照(40mg/kg環(huán)磷酰胺)組骨髓細(xì)胞染色體畸變率達(dá)14.3%，與溶媒對(duì)照組相比顯著升高，表明實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可靠。在250、500和1 000mg/kg劑量水平下，小鼠單次灌胃NBPT 24h后，骨髓細(xì)胞染色體畸變率分別為2.4%、3.0%和2.0%，均未超出4%。經(jīng)Cochran-Armitage檢驗(yàn)未顯示明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系(z=-0.3406，P>0.05)，卡方檢驗(yàn)表明各劑量組染色體畸變率與溶媒對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(低、中、高劑量組χ2值分別為1.220、3.682和0.248，P均>0.05)，說(shuō)明NBPT無(wú)致小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)。各劑量組染色體四倍體與裂隙的發(fā)生率也未出現(xiàn)與NBPT相關(guān)性的變化。詳見(jiàn)表1。

表1 小鼠單次灌胃NBPT后24h骨髓細(xì)胞染色體數(shù)目畸變和裂隙細(xì)胞率(n=10)

2.1.2 時(shí)效關(guān)系 小鼠單次灌胃NBPT 1 000mg/kg后24、48和72h的骨髓細(xì)胞染色體畸變率均未超過(guò)4%，經(jīng)Cochran-Armitage檢驗(yàn)未顯示明顯的時(shí)間反應(yīng)關(guān)系(z=-1.2807，P>0.05)，卡方檢驗(yàn)表明各時(shí)間點(diǎn)染色體畸變率與溶媒對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(24、48、72h組χ2值分別為1.220、2.324和3.204，P均>0.05)，說(shuō)明NBPT無(wú)致小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)，給藥時(shí)間對(duì)染色體畸變率無(wú)明顯影響。各時(shí)間點(diǎn)染色體四倍體與裂隙的發(fā)生率也未出現(xiàn)與NBPT相關(guān)性的變化。詳見(jiàn)表2。

表2 小鼠按1 000mg/kg單次灌胃NBPT不同時(shí)間后骨髓細(xì)胞染色體數(shù)

2.2 顯性致死試驗(yàn)

2.2.1 交配前及交配期動(dòng)物的一般狀況、體征和體質(zhì)量 研究期間未見(jiàn)動(dòng)物死亡，也未發(fā)現(xiàn)與受試物處理明顯相關(guān)、存在劑量反應(yīng)關(guān)系的臨床體征。3個(gè)NBPT處理組和陽(yáng)性對(duì)照組的雄鼠體質(zhì)量與對(duì)照組比較均未見(jiàn)顯著性差異(圖1)。溶媒對(duì)照及3個(gè)NBPT處理組

的雌鼠在各自7個(gè)輪次的交配期以及之后的妊娠期的體質(zhì)量均穩(wěn)步增加，與對(duì)照組相比未見(jiàn)明顯差異。

圖1 交配前給藥期及同籠期雄鼠體質(zhì)量

2.2.2 受精鼠的受孕率及子代妊娠結(jié)局 3個(gè)NBPT處理組和50mg/kg環(huán)磷酰胺處理組雌鼠的受孕率均為100%，對(duì)照組除第1輪次交配的受孕率為97.5%外，其余交配輪次受孕率均為100%。在7個(gè)交配輪次中，3個(gè)NBPT處理組和陽(yáng)性對(duì)照組的母鼠平均著床數(shù)、黃體數(shù)、活胎數(shù)與溶媒對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。NBPT 250mg/kg組在第4交配輪次母鼠的著床前丟失率顯著增高，與溶媒對(duì)照組比較有顯著性差異(χ2=20.078，P<0.01)，其余NBPT處理組各交配輪次母鼠的著床前丟失率與溶媒對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NBPT 250mg/kg組第6輪次母鼠的窩均非活胎數(shù)顯著降低，與溶媒對(duì)照組比較差異顯著(t=2.239， P< 0.01)，其余NBPT處理組母鼠的窩均非活胎數(shù)與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。陽(yáng)性對(duì)照組第6交配輪次母鼠的著床前丟失率與溶媒對(duì)照組比較顯著降低，第7交配輪次母鼠的著床前丟失率與溶媒對(duì)照組比較均顯著增高(P均<0.01)，第1和第2交配輪次的窩均非活胎數(shù)高于對(duì)照組(P<0.01)，相應(yīng)的著床后丟失率也高于對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)。與對(duì)照組相比較，3個(gè)NBPT處理組各交配輪次母鼠的致死突變率大多為負(fù)值，偶見(jiàn)較低的正值，表明NBPT無(wú)顯性致死作用。詳見(jiàn)表3。

3 討 論

染色體畸變是細(xì)胞遺傳物質(zhì)損傷的一種表現(xiàn)，哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)在遺傳毒理學(xué)研究中被用以檢測(cè)化學(xué)物對(duì)哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體的致突變作用，包括染色體本身的結(jié)構(gòu)和數(shù)目的變化。該試驗(yàn)直接觀察分裂間期與前期的細(xì)胞染色體畸變情況，從而判斷該受試物是否具有致突變作用，被廣泛用于食品、農(nóng)藥、化學(xué)品、化妝品、輻射等因素的遺傳毒性研究及環(huán)境生物檢測(cè)。本研究中雄性ICR小鼠單次灌胃給予NBPT后24h，250、500、1 000mg/kg劑量組骨髓細(xì)胞染色體畸變率與溶媒對(duì)照組相比均未見(jiàn)顯著升高；1 000mg/kg組在染毒后24、48、72h的染色體畸變率與溶媒對(duì)照組相比亦無(wú)顯著升高，說(shuō)明NBPT無(wú)致小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)。

哺乳動(dòng)物發(fā)育中的精子或卵子在物理或化學(xué)因素的作用下，發(fā)生了染色體損傷，此種損傷不引起配體功能異常，但能引起受精卵或發(fā)育中的胚胎死亡，主要表現(xiàn)是受精卵著床前丟失或著床后胚胎早期死亡。小鼠顯性致死試驗(yàn)通過(guò)觀察胚胎早期死亡情況可以判斷受試物對(duì)整體哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞的致突變性，闡明受試物能否到達(dá)性腺組織產(chǎn)生遺傳損害。該方法需要?jiǎng)游飻?shù)量多、試驗(yàn)周期長(zhǎng)、試驗(yàn)成本較大、連續(xù)工作強(qiáng)度大、對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室條件要求較高，但作為組合試驗(yàn)的補(bǔ)充方法，選擇性的應(yīng)用在體外試驗(yàn)毒性較大、無(wú)法設(shè)高濃度組、實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易判定、進(jìn)一步確證體外試驗(yàn)或其他試驗(yàn)系統(tǒng)獲得的陽(yáng)性結(jié)果以及可能引起哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞染色體畸變時(shí)有其特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)，上世紀(jì)八十年代國(guó)際上曾用本方法檢測(cè)了140多種化合物的致突變作用[8-9]。OECD遺傳毒性指導(dǎo)原則以及我國(guó)《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范》及《食品毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范》目前均保留了該方法[10]。

本研究以ICR小鼠為模型評(píng)價(jià)NBPT對(duì)雄性動(dòng)物生殖細(xì)胞潛在的致突變作用，雌鼠分7個(gè)輪次與雄性動(dòng)物連續(xù)交配，以涵蓋雄性小鼠的整個(gè)生精周期。在7個(gè)交配輪次中，溶媒對(duì)照組母鼠受孕率、孕鼠窩均著床數(shù)、窩均活胎數(shù)均符合顯性致死試驗(yàn)對(duì)陰性對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)的要求。陽(yáng)性對(duì)照組母鼠在第1和第2交配輪次的窩均非活胎數(shù)明顯高于對(duì)照組，相應(yīng)的著床后丟失率也明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明環(huán)磷酰胺所引發(fā)的雄性致死突變主要作用于生精周期的晚期。顯性致死試驗(yàn)的主要判斷標(biāo)準(zhǔn)是窩均非活胎數(shù)，NBPT僅在250mg/kg劑量下第6輪次母鼠的窩均非活胎數(shù)與溶媒對(duì)照組比較呈顯著降低，其余交配輪次以及中、高劑量組各交配輪次的窩均非活胎數(shù)與溶媒對(duì)照組比較均無(wú)顯

著差異，且與對(duì)照組相比較，NBPT各處理組母鼠的致死突變率均大多為負(fù)值，偶見(jiàn)的正值也較低，故此可確定NBPT對(duì)雄性ICR小鼠無(wú)致死突變作用。

綜上，在本試驗(yàn)條件下NBPT在高達(dá)1 000mg/kg的劑量下對(duì)體細(xì)胞和生殖細(xì)胞均無(wú)致染色體畸變作用，結(jié)合NICNAS報(bào)告中的Ames試驗(yàn)和體內(nèi)微核試驗(yàn)結(jié)果，根據(jù)化合物致突變性研究的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組合(Ames試驗(yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)、體內(nèi)微核試驗(yàn))，可判斷NBPT無(wú)致基因突變及染色體損傷的作用。目前ICH遺傳毒性指導(dǎo)原則已將DNA損傷作為檢測(cè)化合物致突變

性的第2個(gè)體內(nèi)遺傳學(xué)終點(diǎn)，因此必要時(shí)可采用體內(nèi)彗星試驗(yàn)檢測(cè)NBPT是否具有致DNA損傷作用，以便更全面評(píng)價(jià)其致突變性。

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Mutagenic effects of N-(n-butyl)-thiophosphorictriamide in somatic and germ cells ofmice

YUAN Ye1，2，CHEN Dandan3，JING Shufang1，2，YU Yongsheng1，2，CHEN Jianheng4，WU Chunqi1，2，SHI Chang1，2，*
(1.Beijing Institute of Pharmacology and Toxicology, National Beijing Center for Drug Safety Evaluation and Research, Beijing 100850; 2.State Key Laboratory of Toxicology andmedical Countermeasures, Academy ofmilitarymedical Sciences, Beijing 100850; 3.National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China; 4.YMS Agriculture International Corp., Torontom5X 1C7, Ontario, Canada)

目的： 采用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)和小鼠顯性致死突變?cè)囼?yàn)評(píng)價(jià)正丁基硫代磷酰三胺(NBPT)對(duì)體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的致突變性。方法：小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)中雄性小鼠分別單次灌胃給予NBPT 250、500、1 000mg/kg，1 000mg/kg組動(dòng)物于給藥后24、48及72h取骨髓細(xì)胞制備骨髓片，其他組動(dòng)物于給藥后24h取骨髓細(xì)胞制備骨髓片。每只動(dòng)物在油鏡下分析100個(gè)中期相骨髓細(xì)胞，記錄染色體結(jié)構(gòu)畸變、數(shù)目畸變和發(fā)生裂隙的細(xì)胞數(shù)。小鼠顯性致死試驗(yàn)中雄鼠分別連續(xù)灌胃給予NBPT 250、500、 1 000mg/kg 5 d后，雌鼠與雄鼠同籠交配5 d，雄鼠再于2 d后與下一輪的雌鼠交配，共進(jìn)行7個(gè)輪次的交配，每輪次1周，覆蓋雄性小鼠整個(gè)生精周期。每輪次雌鼠于同籠結(jié)束后第14天處死，計(jì)數(shù)總著床數(shù)、黃體數(shù)、死胎、活胎和吸收胎數(shù)。結(jié)果：小鼠單次灌胃NBPT 24h后，250、500、1 000mg/kg劑量組骨髓細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)畸變率分別為2.4%、3.0%和2.0%，1 000mg/kg組24、48和72h的骨髓細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)畸變率均未超過(guò)4%，與溶媒對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各NBPT處理組染色體四倍體與裂隙的發(fā)生率也未出現(xiàn)與NBPT相關(guān)性的變化。小鼠顯性致死試驗(yàn)的7個(gè)交配輪次中，NBPT 3個(gè)處理組受孕率為100%，母鼠平均著床數(shù)、黃體數(shù)、活胎數(shù)與溶媒對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。僅在NBPT 250mg/kg組發(fā)現(xiàn)第4交配輪次母鼠著床前丟失率增高，第6輪次母鼠窩均非活胎數(shù)降低，與溶媒對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。NBPT 3個(gè)處理組各交配輪次母鼠的致死突變率大多為負(fù)值，偶見(jiàn)較低的正值。結(jié)論：在本試驗(yàn)條件下，NBPT無(wú)致小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)，對(duì)雄性ICR小鼠無(wú)顯性致死突變作用。

正丁基硫代磷酰三胺；致突變性；骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)；顯性致死試驗(yàn)

OBJECTIVE:Mutagenic effects of N-(n-butyl)-thiophosphorictriamide (NBPT) in somatic and germ cells of adultmale ICRmice were evaluated using the bonemarrow chromosome aberration (CA) and dominant lethalmutation (DLM) assays.METHODS：In the CA assay，adultmale ICRmice were exposed to NBPtat 250，500 and 1000mg/kg by a single oral administration.For the 1 000mg/kg group，bonemarrow samples wereharvested at 24，48 and 72h after the treatmentand slide weremade.For the other groups，bonemarrow samples wereharvested at 24h after the treatment.From slides of eachmouse，100metaphase bonemarrow cells were observed for chromosome aberration， the cell numbers of chromosome aberration，polyploidy，gap were recorded respectively.In the DLM assay，aftermice were exposed to NBPT for successive 5 days，eachmated with 2 virgin females for 5 days at predetermined intervals (2 days) for a total 7 rounds.Females of each round were sacrificed on the 14thday of pregnancy.The total numberof

N-(n-butyl)-thiophosphorictriamide；mutagenicity；bonemarrow chromosome aberration test；dominant lethalmutation test

R394.6；Q355

A

1004-616X(2016)06-0432-06

10.3969/j.issn.1004-616x.2016.06.004

2016-02-01；

2016-09-06

重大新藥創(chuàng)制科技重大專(zhuān)項(xiàng)基金(2013ZX09302303，2014ZX095 07009-022)

作者信息： 原 野，E-mail：13701181662@139.com。*通信作者，施 暢，E-mail：shichang1231@foxmail.com

implantation，numberof corpora lutea，numberof stillbirth，live births and fetal absorption were counted and recorded.RESULTS：Chromosome aberration rates formice after 24h of exposure to the three doses were 2.4%，3.0% and 2.0%，respectively.Chromosome aberration rates for the 1 000mg/kg group were less than 4% after the 24，48 and 72h of exposure.All the observed aberration rates were not significantly different from the vehicle control group (P>0.05).The incidence of tetraploid chromosome and gap for each group showed no correlation with NBPT treatment.In the DLM test，for the 7 batches ofmating，pregnancy ratesin three NBPT treated groups were 100%.In addition，the average numberofmaternal implantation，numberof corpora lutea，numberof live births showed no significant difference compared with the vehicle control group.Preimplantation loss rate increased only in the 4thround ofmating in the 250mg/kg group.The average numberof non-viable fetus decreased in the 6thround ofmating in the 250mg/kg group.Both showed significant difference compared with the vehicle control (P<0.01).Lethalmutation rates for femalemice for eachmating round weremostly negative for all the exposed groups.CONCLUSION：Withinour experimental conditions，NBPT did not induce bonemarrow chromosome aberrations nor dominant lethalmutation.