陳小鵬，樊 勇，王躍斌，陳羅飛，王 琛

（蘭州大學(xué)第二醫(yī)院普外四科，甘肅蘭州730030）

大黃甘草湯對(duì)重癥急性胰腺炎腸黏膜屏障功能的對(duì)照研究

陳小鵬，樊 勇，王躍斌，陳羅飛，王 琛△

（蘭州大學(xué)第二醫(yī)院普外四科，甘肅蘭州730030）

目的 探討大黃甘草湯對(duì)重癥急性胰腺炎（SAP）腸黏膜屏障功能的影響。方法 將45只清潔級(jí)健康雄性SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為大黃甘草湯治療組（D組）、SAP模型組（P組）和假手術(shù)組（S組），每組15只。采用逆行注射5%牛黃膽酸鈉（0.5 mL/100 g）制備大鼠SAP模型。D組給予大黃甘草湯（2.0 mL/100 g），P、S組給予0.9%氯化鈉溶液（2.0 mL/100 g）。分別于建模后12、24、36 h經(jīng)腹主動(dòng)脈采集血標(biāo)本檢測(cè)血淀粉酶、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、IL-10、D-乳酸水平等。結(jié)果 D組大鼠血淀粉酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸水平明顯低于P組，IL-10水平明顯高于P組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 大黃甘草湯對(duì)SAP大鼠腸黏膜屏障功能具有保護(hù)作用，治療SAP療效較好。

大黃甘草湯； 急性病； 胰腺炎； 腸黏膜

重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是一種多因素誘發(fā)并累及多臟器的危重疾病，起病急、進(jìn)展快，并發(fā)癥發(fā)生率達(dá)65%，病死率達(dá)34%～53%，全胰壞死率大于90%[1]。大量研究顯示，SAP容易發(fā)生腸黏膜屏障功能障礙[2]。腸黏膜屏障功能障礙是SAP并發(fā)感染甚至形成腹腔膿腫，誘發(fā)和加重全身炎癥反應(yīng)綜合征、多器官功能障礙綜合征及病死率居高不下的關(guān)鍵所在[3-4]。因此，維護(hù)腸黏膜屏障功能的完整性，保持腸黏膜屏障功能對(duì)減弱全身炎性反應(yīng)程度，延緩甚至阻止其向多器官功能衰竭轉(zhuǎn)化具有重要意義。大黃甘草湯具有溫陽(yáng)止痛、通腑化瘀等功效，是中醫(yī)臨床治療SAP等急危重癥的常用方劑。本研究通過(guò)建立SAP大鼠模型，考察大黃甘草湯對(duì)SAP大鼠腸黏膜屏障功能的影響，旨在為防治SAP腸屏障損傷提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)及方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康雄性Sprague Dawley（SD）清潔級(jí)大鼠45只，體質(zhì)量280～300 g，平均（286±3）g。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前均適應(yīng)性喂養(yǎng)7d。

1.1.2 藥物及試劑 大黃、甘草均購(gòu)自北京同仁堂飲片有限責(zé)任公司，由蘭州大學(xué)第二醫(yī)院藥劑科煎制大黃甘草湯[大黃12 g、甘草3 g]；D-乳酸測(cè)定試劑盒和牛黃膽酸鈉（Sodium Taurocholate）購(gòu)自Sigma公司；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-10酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒購(gòu)自上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立 將45只清潔級(jí)健康雄性SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為大黃甘草湯治療組（D組）、SAP模型組（P組）和假手術(shù)組（S組），每組15只；又將各組大鼠分為12、24、36 h 3個(gè)亞組，每個(gè)亞組5只；大鼠于術(shù)前禁食、不禁飲12 h，用1%戊巴比妥鈉溶液（0.4 mL/100 g）進(jìn)行腹腔內(nèi)麻醉。將大鼠置于仰

臥位，四肢及頭固定于操作臺(tái)上，備皮后用聚維酮碘消毒，鋪無(wú)菌洞巾，于上腹正中做6 cm切口進(jìn)入腹腔，暴露肝門(mén)，分離胰膽管，提起十二指腸以小號(hào)血管夾分別夾住十二指腸段和肝門(mén)部胰膽管。以0.75 mm動(dòng)靜脈留置針穿刺胰膽管注射（最好用微泵注射）5%牛黃膽酸鈉（0.5 mL/100 g），持續(xù)1 min，停留5 min，然后拔除針頭，去除血管夾，可觀察到大鼠胰腺組織明顯水腫、出血，縫合腹壁各層。S組僅開(kāi)腹后輕翻胰腺組織。各組大鼠術(shù)后均于背部皮下注射0.9%氯化鈉溶液（2.0 mL/ 100 g）以補(bǔ)充術(shù)中失液。D組大鼠術(shù)后清醒后給予大黃甘草湯2.0 mL/100 g灌胃，以后每6小時(shí)給藥1次；P、S組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)給予等量0.9%氯化鈉灌胃。三組大鼠造模后12、24、36 h各處死5只大鼠，下腔靜脈采血檢測(cè)血淀粉酶、D-乳酸及各細(xì)胞因子水平。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo) 采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血淀粉酶水平，采用ELISA法測(cè)定血清TNF-α、IL-6、IL-10水平，采用D-乳酸測(cè)定試劑盒測(cè)定D-乳酸水平。均按試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 三組大鼠血淀粉酶水平比較 S組大鼠造模后12 h血淀粉酶稍升高，D、P組大鼠血淀粉酶水平明顯升高，D、P組大鼠血淀粉酶水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.474，P＞0.05）；D、P組大鼠造模后48 h血淀粉酶水平仍處于高水平，但D、P組大鼠血淀粉酶水平比較，差異仍無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.254，P＞0.05）；三組大鼠造模后36 h血淀粉酶水平均下降，D組大鼠淀粉酶水平下降更為明顯，與P組大鼠淀粉酶水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.719，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 三組大鼠血淀粉酶水平比較（±s，U/L）

表1 三組大鼠血淀粉酶水平比較（±s，U/L）

注：與P組同時(shí)間點(diǎn)比較，t=3.719，aP＜0.05。

組別 12 h 24 h 36 h n D組P組S組15 15 15 5 471.60±368.96 5 453.70±454.16 1 212.08±247.51 5 511.03±423.17 5 404.81±345.25 978.35±118.06 4 920.19±308.51a5 322.97±369.06 905.04±145.55

2.2 三組大鼠各細(xì)胞因子、D-乳酸水平比較 三組大鼠造模后12、24 h D-乳酸及各細(xì)胞因子水平均呈升高趨勢(shì)，D組大鼠造模后12 h TNF-α水平就明顯低于P組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.622，P＜0.05），P、D組大鼠造模后24、36 h TNF-α水平均呈升高趨勢(shì)，P、D組大鼠TNF-α水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。P組大鼠造模后36 h IL-6水平仍持續(xù)升高，而D組大鼠IL-6水平則呈下降趨勢(shì)，P、D組大鼠IL-6水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.228，P＜0.05）。D組大鼠造模后24 h IL-10水平升高幅度明顯大于P組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 3.719，P＜0.05），且造模后36 h IL-10水平仍繼續(xù)升高，與P組大鼠IL-10水平比較，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.447，P＜0.05）。D組大鼠造模后12 h D-乳酸水平低于P組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=1.254，P＞0.05），D組大鼠造模后36hD-乳酸水平明顯低于P組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 4.791，P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 三組大鼠各細(xì)胞因子、D-乳酸水平比較（±s）

表2 三組大鼠各細(xì)胞因子、D-乳酸水平比較（±s）

注：與P組同時(shí)間點(diǎn)比較，t=2.622，aP＜0.05；t=2.228，bP＜0.05；t=3.719，cP＜0.05；t=2.447，dP＜0.05；t=4.791，eP＜0.05。

組別D組（n=15）12 h 24 h 36 h P組（n=15）12 h 24 h 36 h S組（n=15）12 h 24 h 36 h TNF-α（pg/mL）IL-6（pg/mL）IL-10（pg/mL）D-乳酸（μg/mL）207.21±46.28a235.25±45.87 278.66±54.11 598.75±51.11 678.84±59.41 581.51±49.58b85.86±9.52 177.93±16.14c222.52±14.32d64.23±5.75 76.63±9.44 86.39±6.49e232.59±53.13 261.34±51.39 308.96±63.35 607.25±49.02 717.11±40.02 805.77±48.68 88.86±14.44 159.78±16.59 193.42±15.98 67.26±5.17 82.01±7.02 106.28±10.45 22.38±6.51 22.39±4.66 21.48±7.79 153.70±15.25 183.50±11.52 236.70±24.21 21.61±2.71 34.68±6.76 35.42±4.55 16.48±4.47 19.13±3.66 15.38±4.55

3 討 論

SAP是普外科病死率最高的危重病癥之一，以胰腺實(shí)質(zhì)出血、壞死為主要特征[4]，常并發(fā)心、肺、腎、消化道等多器官功能衰竭。消化道是SAP危及的靶器官之一，在發(fā)病早期階段即可出現(xiàn)腸黏膜結(jié)構(gòu)損傷、腸壁功能障礙，進(jìn)而使腸道細(xì)菌、內(nèi)毒素進(jìn)入體循環(huán)而發(fā)生腸源性內(nèi)毒素血癥，誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征甚至多器官功能衰竭[5]。目前，SAP治療以西藥為主聯(lián)合中藥治療。中醫(yī)藥對(duì)SAP的治療方法及手段較多，治療的同時(shí)且對(duì)相關(guān)臟器具有一定保護(hù)作用。已有多種單味及中藥復(fù)方用于臨床SAP的治療[6-7]。

大黃甘草湯是古籍《金匱要略》中的經(jīng)典名方。方中生大黃性味苦寒，有瀉實(shí)熱、蕩滌腸胃、祛瘀解毒之功，現(xiàn)代研究表明，大黃能松弛Oddis括約肌、避免膽汁淤積、消除膽源性胰腺炎的病因、清除氧自由基等，可誘導(dǎo)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡，減輕胰腺水腫，促進(jìn)胰腺細(xì)胞修復(fù)[8]；甘草性味甘平，能守中、解毒、緩和藥性。二藥相伍，瀉中有補(bǔ)，通中寓守，相輔相成。有研究顯示，大黃甘草湯能減輕胰腺損傷及機(jī)體炎性反應(yīng)[9-10]。

本研究采用逆行注射5%牛黃膽酸鈉（0.5 mL/100g）制備大鼠SAP模型，通過(guò)大黃甘草湯對(duì)SAP大鼠進(jìn)行干預(yù)，檢測(cè)各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血淀粉酶、炎性細(xì)胞因子（TNF-α、IL-6、IL-10）、D-乳酸水平。在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，P、D組大鼠造模后12、24、36 h血淀粉酶水平均明顯高于S組，D組大鼠造模后36 h血淀粉酶水平開(kāi)始降低，

造模后36 h血淀粉酶水平明顯低于P組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

目前認(rèn)為，促炎性細(xì)胞因子在SAP及后續(xù)的全身炎性反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用[10]，其中TNF-α是SAP中最早升高的炎性細(xì)胞因子，TNF-α由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞，上調(diào)黏附分子對(duì)上皮細(xì)胞的作用，引導(dǎo)毛細(xì)血管滲透及組織損害，胰腺炎時(shí)TNF-α還可產(chǎn)生很多重要的促炎性細(xì)胞因子，如IL-6等，這些促炎性細(xì)胞因子的變化可直接反映并預(yù)測(cè)胰腺炎的炎癥嚴(yán)重程度。IL-10是由巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞釋放的一種重要的抗炎性細(xì)胞因子，能抑制巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞活化，從而抑制其分泌細(xì)胞因子的能力和降低輔助其他細(xì)胞的能力，限制炎性反應(yīng)的發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-10通過(guò)控制TNF-α生成而對(duì)胰腺局部及全身炎性反應(yīng)具有抑制作用，血清IL-10水平也能反映急性胰腺炎的炎性反應(yīng)程度，且是一個(gè)早期預(yù)測(cè)急性胰腺炎預(yù)后的良好指標(biāo)[11]。

本研究結(jié)果顯示，P、D組大鼠造模后24 h TNF-α、IL-6水平均高于S組，且P、D組大鼠TNF-α、IL-6水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但P組大鼠造模后36hTNF-α、IL-6水平仍持續(xù)升高，而D組大鼠TNF-α、IL-6水平則開(kāi)始大幅度下降。P、D組大鼠造模后24 h IL-10水平均高于S組，且D組大鼠造模后24、36 h IL-10水平均高于P組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明大黃甘草湯可明顯緩解SAP誘發(fā)的胰腺局部及機(jī)體全身炎癥，有利于大鼠腸道屏障功能的恢復(fù)。

D-乳酸是胃腸道多種細(xì)菌代謝后產(chǎn)生的不易被腸道吸收的共同物質(zhì)，但在應(yīng)激等特殊情況時(shí)腸黏膜屏障會(huì)受損，腸道通透性增加，腸道D-乳酸生成增加并進(jìn)入血液并在血液中蓄積而導(dǎo)致D-乳酸水平升高。因此，D-乳酸水平可被作為標(biāo)記物反映腸缺血性損傷及腸道屏障功能損傷。本研究結(jié)果顯示，D、P組大鼠造模后各時(shí)間點(diǎn)D-乳酸水平均高于S組，D組大鼠造模后36 h D乳酸水平明顯低于P組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明大黃甘草湯可明顯減輕SAP腸道炎性反應(yīng)，促進(jìn)腸道屏障功能的快速恢復(fù)。

綜上所述，大黃甘草湯對(duì)大鼠SAP誘發(fā)的腸黏膜屏障功能障礙具有明顯改善作用，有利于腸黏膜屏障功能的早期恢復(fù)，對(duì)疾病的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后的改善具有積極意義。本研究雖然遵循嚴(yán)格的操作程序標(biāo)準(zhǔn)，但仍無(wú)法避免人為因素造成的實(shí)驗(yàn)差異，如模型制備時(shí)牛黃膽酸鈉的滴注濃度，注藥時(shí)的操作手法是否對(duì)大鼠造成了人為傷害等。同時(shí)，本研究觀察時(shí)間較短、樣本量偏少等原因或多或少可能影響到本研究結(jié)論的準(zhǔn)確性，因此，尚需進(jìn)行后續(xù)更深入的研究以進(jìn)一步探討。

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Contrastive study of Dahuanggancao Decoction on intestinal mucosal barrier function in severe acute pancreatitis

Chen Xiaopeng，F(xiàn)an Yong，Wang Yuebin，Chen Luofei，Wang Chen△
（Forth Department of General Surgery，Second Hospital，Lanzhou University，Lanzhou，Gansu 730030，China）

Objective To explore the effect of Dahuanggancao Decoction on the intestinal mucosal barrier function of severe acute pancreatitis（SAP）.Methods Forty-five clean class SD healthy male rats were randomly divided into the Dahuanggancao Decoction group（D，n=15），SAP model group（P，n=15）and sham operation group（S，n=15）.The SAP rat model was induced by the retrograde injection of 5%sodium taurocholate（0.5 mL/100 g）.The group D was given Dahuanggancao Decoction（2.0 m/100 g），while the group P and S was given 0.9%sodium chloride solution（2.0 mL/100 g）.The blood samples were collected from inferior vena cava at 12，24，36 h after model construction and serum amylase，TNF-α，IL-6，IL-10 and D-lactic acid levels were detected. Results The serum amylase，TNF-α，IL-6 and D-lactic acid levels in the group D were significantly lower than those in the group P，while the IL-10 level was significantly higher than that in the group P，the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Dahuanggancao Decoction has a protective effect on the intestinal mucosal barrier function of SAP rats and has good effect in treating SAP.

Dahuang gancao decoction； Acute disease； Pancreatitis； Intestinal mucosa

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.22.005

A

1009-5519（2016）22-3432-03

2016-07-09）

陳小鵬（1990-），碩士研究生，主要從事膽胰外科的臨床研究。

△通訊作者，E-mail：wedfjack@163.com。